逆型胶体金免疫层析试剂条及其应用制造技术

一种逆型胶体金免疫层析试剂条，包括缓冲液加入区、固相胶体金标记结合物、测试区、对照区、吸水纸区等组成部分，其特征在于待测样品的加样点位于固相胶体金标记结合物的前沿。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫层析试剂条，具体指加样点位于固相胶体金标记结合物前沿的逆型胶体金免疫层析试剂条。本专利技术还涉及上述试剂条的应用。
技术介绍
金标免疫检测技术属于固相膜免疫测定技术。金标免疫检测技术包括金标免疫渗滤法(滴金免疫测定法)和金标免疫层析法。金标免疫渗滤法建立于20世纪90年代初，是以硝基纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可滤过性，使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。金标免疫层析法是继金标免疫渗滤法之后发展起来的另一种膜固相免疫测定方法，目前已被广泛应用，其原理是以微孔滤膜(如硝基纤维素膜)为固相载体，并利用微孔滤膜的毛细管作用，使加于膜条一端的液体样品向另一端渗移，犹如层析一般。移动过程中被分析物与固定于膜上某一区域的受体(抗原或抗体)结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过标记物(胶体金)的显色来判定检测结构。金标免疫层析法的特点是快速、简便，利用胶体金免疫层析试剂条可使抗体抗原“三明治”夹心反应于5-30分钟内快速进行。全部反应在一个试剂条上完成，将样品膜(玻璃纤维纸或其它纤维纸)、固相胶体金标记物(Conj)、硝基纤维素膜和吸水纸装配于带有双面粘胶的塑料薄板上。硝基纤维素膜上有两个反应区域，测试区(T区)固相一条特异抗原/抗体，对照区(C区)，固相一条对照带。固相胶体金标记物是为与T区相对应的另一特异“抗原/抗体-金标记物”的干燥颗粒。经典试剂条的测试流程为滴入尿液、血清、血浆、血液、唾液等待测液或样品提取液或它们的稀释液于样品膜(S)上面。有的检测项目需随后再于同一位置滴入“缓冲液”以达到更好的效果。如果样品中含有待测成分，该待测成份分子的一端将与胶体金标记物中特异抗原/抗体形成复合物，该复合物按毛细管原理上行于纤维膜上。在测试区(T)，待测成分分子的另一端将于固相化的另一特异抗原/抗体起反应，并在T处被“固定”。由于胶体金颗粒是玫瑰色，于是在T区出现了一条玫瑰色线。该处颜色深浅与待测样品浓度高低成正比例。金标免疫层析检测技术目前已得到广泛的应用，如进行人绒毛促性腺激素(HCG)、促黄体生成激素(LH)、促卵泡成熟激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)等激素的测定；衣原体(Chlamydia)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒(Syphilis)、乙肝病毒(HBV)、幽门螺旋杆菌(Hpy)等感染原的检测；吗啡、可卡因、鸦片等毒品的检测；以及心肌梗塞指标(如肌钙蛋白Tni、异激动酶CKMB、肌红蛋白Myoglubin)和肿瘤指标(如前列腺特异抗原PSA、胚癌蛋白CEA、甲胎蛋白a-FP)的检测等。利用金标免疫层析法测定抗体时，一般采用胶体金标记抗人IgG/IgM，在硝基纤维素膜上固相一条特异性抗原。在检测中，按上述反应流程因样品中的特异性和非特异性IgG/IgM先与胶体金标记抗人IgG/IgM竞争结合，大大降低了检测的敏感度，因此上述流程的胶体金免疫层析试剂条并不能用于某些检测项目，尤其无法对TORCH抗体进行检测。将弓形体(Toxoplasmagondii)、巨细胞病毒(Cytomegalovirus，CMV)、风疹病毒(Rubella)、单纯疱疹(Hepes Smplex virus I&II)这几种抗原按第一字母组合，简称为TORCH，应用上述经典的胶体金免疫层析试剂条对TORCH抗体进行检测时，在T区见不到色带，即使在高浓度抗体的存在下，也极难见到T色带。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种逆型胶体金免疫层析试剂条，改换经典金标免疫检测的反应步骤，以获得高灵敏度的检测效果，从而拓宽经典胶体金免疫层析试剂条的应用范围。本专利技术的另一目的在于提供上述逆型胶体金免疫层析试剂条的用途。本专利技术提出的逆型胶体金免疫层析试剂条，将样品加入点由经典试剂条(组成结构见附图1)的样品膜(S)处移至固相胶体金标记结合物的前沿，样品膜处仅用于滴加缓冲液。本专利技术试剂条的底板可采用双面胶塑料片，塑料片两端粘贴有吸水材料，其中一端为缓冲液加入区(B)，可采用材料包括玻璃纤维纸或其它纤维纸，另一端为吸水纸区(A)，材料以吸水性强的滤纸为佳。紧邻B区为干燥固相胶体金标记结合物(Conj)，加样点位于Conj的前沿。Conj与A的中间粘贴吸附有受体(抗原或抗体)的硝基纤维素膜，受体以直线的形式包被在膜上，自Conj向A方向，硝基纤维素膜上有两个反应区域，测试区(T区)固相一条特异抗原/抗体，对照区(C区)，固相一条对照带。本专利技术试剂条的反应特点在于首先将待测样品加于固相胶体金标记结合物之前使之向测试区层析移动，随后用一定的缓冲液溶解固相胶体金标记结合物，使之在硝基纤维素膜上向测试区发生移动，这样待测成分分子首先与固相于测试区的特异抗原/抗体形成复合物并被固定，然后再与胶体金所标记的特异抗原/抗体结合，形成最终的显色复合物(试剂条组成结构见附图2)。这样对经典试剂条的反应顺序(即待测成分分子首先与胶体金所标记的特异抗原/抗体结合形成显色复合物，然后再与固相于测试区的特异抗原/抗体形成最终复合物并被固定)进行了逆向改变，从而在利用试剂条检测抗体时，大大降低了样品中大量非特异性IgG/IgM的干扰，从而避免了样品中特异性和非特异性IgG/IgM与胶体金标记抗人IgG/IgM的先行竞争结合，提高了试剂条的检测灵敏度。本专利技术拓宽了经典试剂条的检测范围，尤其可以有效地用于TORCH抗体检测。根据实际需要，本专利技术逆型胶体金免疫层析试剂条可制成测定单一指标的试剂条或同时测定多项指标的试剂条。本专利技术逆型试剂条可用于抗原或抗体的检测，应用本专利技术逆行试剂条，可根据其测试区所固相的抗体或抗原，检测相对应的抗原或抗体。以有色乳胶颗粒、荧光或其它发光物质等代替胶体金作为标记物，可将本专利技术试剂条制成相应的逆型免疫层析试剂条。下面以抗体抗原“三明治”夹心法测定TORCH抗体为例，说明逆型胶体金免疫层析试剂条的操作步骤和原理首先加入待测液血清、血浆于胶体金标记结合物Conj的前沿，随后立即于B处滴入2滴缓冲液，该缓冲液在溶解固相胶体金标记抗人IgG/IgM抗体的同时“冲向”硝基纤维素膜，将待测液成份先带入T区。如样品中含有待测成分，即TORCH抗体，该抗体将被在T区的固相TORCH抗原所捕获并形成抗原抗体复合物。而样品中所含的大量非特异性人免疫球蛋白IgG/IgM，将通过T区继续前进而被排除。在T区形成的足够量“抗原抗体”复合物与随之而来的胶体金标记抗人IgG/IgM抗体形“TORCH抗原-人体TORCH抗体-抗人IgG/IgM抗体-胶体金颗粒”复合物。因而在T区产生玫瑰色色带，其颜色深浅与TORCH抗体含量成正比例。如样品中不含有待测成分，或TORCH抗体的含量低于检测灵敏度。则在T区不形成可见的玫瑰色带，即为阴性结果。如需检测IgG型TORCH抗体，则使用抗人IgG抗体胶体金标记物。如需检测IgM型TORCH抗体，则用抗人IgM抗体胶体金标记物。T区可固相化一种或多种TORCH抗原，胶体金标记结合物可采用胶体金标记的羊或兔或其它动物品种抗人的免疫球蛋白IgG/IgM。附图说明图1为经典型胶体金免疫层析试剂条的组成结构图，其中S指样品膜；Conj指固相胶体金标记结合物；T指测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：卢惟钊，
申请(专利权)人：卢氏实验公司，
类型：发明
国别省市：