一种新的多肽--氯离子通道蛋白17.6和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－氯离子通道蛋白１７．６，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如Ｔｈｏｍｓｅｎ病、隐性Ｂｅｃｋｅｒ－ｔｙｐｅ肌僵直、水电解质代谢紊乱症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的氯离子通道蛋白１７．６的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——氯离子通道蛋白17.6，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。运输蛋白是跨膜蛋白分子或是大的跨膜分子复合物，通过被动转运，按浓度梯度通过细胞膜。它以多种形式存在，并发现存在于各种生物膜中。参与被动运输的重要的运输蛋白有以下几种通道蛋白(channel proteins)，门通道(gatedchannels)或称门微孔(gated pores)，载体蛋白。门通道具有的“门”不是连续开放，而是瞬时地开放，仅在对特定的刺激发生反应时打开，其他时间是关闭的。门通道可分为配体门通道(ligand gatedchannel)和电位门通道(voltage gated channel)。电位门通道是对细胞内或细胞外特异离子浓度发生改变时，或对其他刺激引起膜电位变化时，致使其构像变化，“门”打开。在很多情况下，门通道有它自己的关闭机制，它能快速自发地关闭，开放常常只有几毫秒的时间。在这短暂瞬时的开放时间里，一些离子，代谢物或其他溶质顺着浓度梯度自由扩散进入细胞膜。门通道的开放和关闭常常是连续相继的过程。在这一过程中，物质通过第一个门通道系统进入，引起另一门通道的开放。第一门通道的快速关闭，调整了第二个门通道的活动，它还可以引起其他特定刺激的门通道开放，尽管原来使其开放的刺激仍在起作用，通道也能快速地关闭。作为门通道，他们可选择不同的离子，让它们通过细胞膜，这决定了突触后反应的类型。抑制性神经传递素，例如g-氨基丁酸(GABA)和氨基乙酸，可开启氯离子通道，这一抑制由突触后膜极化引起。开启氯离子通道有以下影响。细胞外氯离子浓度比细胞内要大得多，因此，开启氯离子通道需要让更多氯离子进入细胞，使细胞膜超极化。一些神经毒素，如番木鳖碱，可与氨基乙酸受体结合，抑制氨基乙酸活动，使氯离子通道无法开启，从而导致肌肉痉挛，抽搐，甚至死亡。目前，CIC家族(voltage-gated chloride channel family)中有许多成员，它们的结构相当保守。编码重要运动肌氯离子通道的基因CLCN1突变会导致显性Thomsen病或隐性Becker-type肌僵直。CLCN3与呼吸作用和离子限制的细胞生长有关。CICN4主要存在于肌肉中，在脑和心脏中也有存在，主要与神经传导，运动有关。(Hum Mol Genet 1994，van Slegtenhordt MA，et al；Genomics 1995，Borsani G，et al；Am J Hum Genet 1996，Mailander V，et al)通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌中，本专利技术的多肽的表达谱与氯离子通道蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为氯离子通道蛋白17.6。由于如上所述氯离子通道蛋白17.6蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的氯离子通道蛋白17.6蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新氯离子通道蛋白17.6蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——氯离子通道蛋白17.6以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码氯离子通道蛋白17.6的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码氯离子通道蛋白17.6的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产氯离子通道蛋白17.6的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——氯离子通道蛋白17.6的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——氯离子通道蛋白17.6的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与氯离子通道蛋白17.6异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中380-862位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1237位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制氯离子通道蛋白17.6蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与氯离子通道蛋白17.6蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于氯离子通道蛋白17.6表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－氯离子通道蛋白１７．６，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]