一种新的多肽——人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85和编码这种多肽的多?制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人含ＡＴＰ／ＧＴＰ结合结构域的ＥＦ－手型钙结合蛋白３６．８５，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人含ＡＴＰ／ＧＴＰ结合结构域的ＥＦ－手型钙结合蛋白３６．８５的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。细胞液中钙离子浓度的变化引起了广泛的细胞反应。细胞内的钙结合蛋白是通过酶反应或蛋白与蛋白相互作用调节来传导钙信号中的关键分子。它们中的一些在细胞周期中作用，或作用于细胞分化。被第二信号分子(如肌醇三磷酸)刺激后，它们短暂地从内质网释放到周围的细胞质中。相似的生理过程在核膜破裂和有丝分裂后期的染色单体分离中亦发生。许多钙结合蛋白均属于同一进化家族，且含有一共同的钙结合结构域，即EF-手型结构域。这些蛋白构成了一很大的蛋白家族，即EF-手型钙结合蛋白家族。该蛋白家族的成员分布非常广泛，这些蛋白均在细胞生长及分化过程中起重要的作用，调控着细胞循环及控制着生物体的新陈代谢过程。EF-手型结构域包含一个12个氨基酸残基组成的环，这个环通过一个12个氨基酸残基的α螺旋区域向两边伸展，组成约成90度的角。在EF-hand环中，钙离子结合于一个五边形的双锥状的构象中。涉及结合的6个残基在1，3，5，7，9和12位。12位上保守的Glu或Asp提供与Ca配位的两个氧原子(双配位基配体)。EF-手型钙结合蛋白在该家族中的分布较多，该类钙结合蛋白具有如下保守的一致性序列片段(2)-X(2)--D-X(3)--X(3)---X---X(2)--；所有EF-手型钙结合蛋白均具有这一一致性序列片段，而非EF-手型的蛋白中不含有这一序列片段。该序列片段包含有EF-手型的高亲和区域，但这一位点不具备钙结合特征。其不是蛋白与钙结合的中心位点，但在生物体内调节着蛋白与钙离子的亲和作用。ATP或GTP结合基序是各种ATP/GTP结合蛋白中普遍存在的结构域，一些连接ATP或GTP的蛋白都或多或少含有这一保守的motif序列，该基序具有保守的特征性序列片段-X(4)-G-K-(其中X为任意氨基酸残基)。这些motif中最为保守的是glycine富集区域，这一区域在β线与α螺旋之间形成一个易弯曲的环。这一弯曲环通常与核苷酸上的某一磷酸基团反应，该motif序列通常被称为“A”共有序列或P环。该基序在生物体内通常负责与ATP、GTP结合，为蛋白发挥生物学功能提供所需的能量及稳定蛋白在生物体内的结构，协助蛋白完成其正常的生理学功能。其表达异常将直接导致一些蛋白的异常表达及功能异常，从而引发各种相关的疾病，如发育紊乱、肿瘤及癌症的发生等。本专利技术的新的人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白62也含有EF-手型钙结合蛋白的保守的EF-手型一致性序列片段，同时，还含有ATP/GTP结合结构域，因而，其为人钙结合蛋白家族的新成员，且与该蛋白家族的其它成员具有相似的生物学功能。该蛋白在生物体内调控着细胞的生长及分化，并调节着生物体的新陈代谢过程。其表达异常将引发各种相关的发育紊乱症、各组织的代谢紊乱症及一些神经系统的疾病。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85。由于如上所述人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中342-1349位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2486位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白36.85表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人含ＡＴＰ／ＧＴＰ结合结构域的ＥＦ－手型钙结合蛋白３６．８５，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]