一种多肽类物质及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种多肽类物质（ＩＶ）的结构、用途和制备方法，这类多肽物质在临床上用于检测、诊断病毒性疾病。特别是艾滋病等一些由病毒引起的疾病，也可以用以用做制备药物制剂的原料，多肽类物质（ＩＶ）可以用人工合成的方法制备得到，也可以用基因重组的方法制备得到。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种医药中间体化合物，特别是一种多肽类物质(IV)的化学结构及其制备方法和用途。一种多肽类物质(IV)，其特征是由多种氨基酸聚合组成，其氨基酸的排列序列为REPRGSDIAGTTSTLQEQI*WMTGNPP**PVG***IYKK其中*为氨基酸A(丙氨酸)或氨基酸N(天冬酰氨)**为氨基酸V(缬氨酸)或氨基酸I(异亮氨酸)***为氨基酸D(天冬氨酸)或氨基酸E(谷氨酸)多肽类物质(IV)的制备方法(一)化学合成法在自然界中每一种多肽或蛋白质都是由游离的氨基酸通过多肽键的形式聚合而成。在蛋白质的翻译过程中，多肽链的延伸总是由氨基端(N-端)向羧基端(C-端)进行。在化学合成开始时，往往是先将羧基端的第一个氨基酸固定到活化的树脂上，然后经过氨基基团的去保护，再将羧基端的第二个氨基酸加入到反应器中，二个氨基酸经过相互反应后即可形成肽键。然后依照多肽的氨基酸排列序列依次加入第三个、第四个氨基酸等等，直到最后一个氨基酸结合到肽链上为止。在多肽类物质(IV)的化学合成中，每个氨基酸的氨基可以由以下化学基团加以保护①苄酯基(Carbobenzoxyl)②叔-丁基羧基(t-Butyloxycarbonyl)③甲苯磺酰基(Tosyl)④9-亚芴基甲酯基(Fmoc9-Fluorenylmethoxycarbonyl)多肽类物质(IV)的化学合成步骤，具体操作如下1、合成先用氯乙醚将树脂活化，然后在树脂中加入第一个氨基酸(氨基已被保护)，从而固定到树脂上。经过二氯甲烷洗涤后，氨基的保护基团可以由六氢吡啶脱保护。与此同时，将第二个氨基酸经过活化后，加入到结合有第一个氨基酸的树脂中，二个氨基酸反应后即形成肽键。然后按照多肽的氨基酸排序，依次加入相应的氨基酸，重复上述的洗涤，氨基去保护，氨基酸的活化等步骤，从而使多肽链不断延长。直到最后第一个氨基酸结合到肽链上为止。2、分离合成后的多肽仍然与树脂结合在一起，因此分离的过程就是利用分离液将多肽类物质(IV)从树脂上游离下来。分离液可以采用苯酚，苯硫基甲烷以及二氟乙酸其中的一种或几种的混合物，取适量的分离液浸泡上述结合有多肽类物质(IV)的树脂，在室温下搅拌，然后经过过滤便可得到多肽类物质(IV)。游离的多肽类物质(IV)经过沉淀后，即可分离出来。3、纯化将分离出来的多肽类物质(IV)溶解在水或适当浓度的碱溶液中(碱可以选用碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠)，然后用常规的色谱方法，即可将完整的多肽类物质(IV)进行纯化。4、鉴定纯化后的多肽类物质(IV)，可以通过质谱分析重新核实所合成的多肽类物质(IV)的氨基酸序列是否正确。(二)基因重组法将多肽类物质(IV)的基因序列利用化学合成法合成之后，克隆到预先被内切酶(BamHI和EcoRI)处理过的PGEX-2载体中。重组的质粒再转化到BL21受体菌中，然后在培养基中大量繁殖、诱导。最后将细菌离心收集，再依靠层析柱将多肽类物质(IV)与GST(谷胱甘肽-S-转移酶)的融合蛋白纯化出来。多肽类物质(IV)可以通过凝血因子蛋白酶从GST融合蛋白上切割下来。最后再浓缩即可制得多肽类物质(IV)的纯品。2、分离合成后的多肽仍然与树脂结合在一起，因此分离的过程就是利用分离液将多肽类物质(IV)从树脂上游离下来。分离液可以采用苯酚，苯硫基甲烷以及三氟乙酸其中的一种或几种的混合物，取10-80毫升的分离液浸泡上述结合有多肽类物质(IV)的树脂，在室温下搅拌1-5小时，然后经过过滤便可得到多肽类物质(IV)混合液。游离的多肽类物质(IV)经过沉淀后，即可分离出来。3、纯化将分离出来的多肽类物质(IV)溶解在水或10-40％的碱溶液中(碱可以选用碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠)，然后用常规的液相色谱法，即可将完整的多肽类物质(IV)进行纯化。4、鉴定纯化后的多肽类物质(IV)，可以通过紫外分光光度法测得其浓度并可通过质谱分析重新核实所合成的多肽类物质(IV)的氨基酸序列是否正确。多肽制备实施例二多肽的氨基酸序列为REPRGSDIAGTTSTLQEQIAWMTGNPPVPVGEIYKK根据上述氨基酸的序列参照下列方法制备。1、合成首先将树脂用氯乙醚活化(用量50-100毫升/克，并且用量可以变化±5％)，然后将羧基端的第一个氨基酸的氨基用氨基保护基团(苄酯基)保护起来后(用量10-80克/克)，再加入到树脂中，从而使其固定到树脂上。经过二氯甲烷洗涤后，氨基的保护基团可以用六氢吡啶(用量10-80％，最好20-40％)脱保护。与此同时，将第二个氨基酸的羧基经过HBTU活化和二异丙基乙胺中和后，加入到结合有第一个氨基酸的树脂中，二个氨基酸反应后即可形成肽键。然后按照多肽类物质(IV)的氨基酸排序，依次加入相应的氨基酸，重复上述的洗涤，氨基去保护，氨基酸羧基的活化等步骤，从而使多肽链不断延长。直到最后一个氨基酸结合到肽链上为止。2、分离合成后的多肽仍然与树脂结合在一起，因此分离的过程就是利用分离液将多肽类物质(IV)从树脂上游离下来。分离液可以采用苯酚，苯硫基甲烷以及三氟乙酸其中的一种或几种的混合物，取10-80毫升的分离液浸泡上述结合有多肽类物质(IV)的树脂，在室温下搅拌1-5小时，然后经过过滤便可得到多肽类物质(IV)混合液。游离的多肽类物质(IV)经过沉淀后，即可分离出来。3、纯化将分离出来的多肽类物质(IV)溶解在水或10-40％的碱溶液中(碱可以选用碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠)，然后用常规的液相色谱法，即可将完整的多肽类物质(IV)进行纯化。4、鉴定纯化后的多肽类物质(IV)，可以通过紫外分光光度法测得其浓度并可通过质谱分析重新核实所合成的多肽类物质(IV)的氨基酸序列是否正确。多肽制备实施例三多肽的氨基酸序列为REPRGSDIAGTTSTLQEQIAWMTGNPPIPVGEIYKK根据上述氨基酸的序列按下列方法制备。1、合成首先将树脂用氯乙醚活化(用量50-100毫升/克，并且用量可以变化±5％)，然后将羧基端的第一个氨基酸的氨基用氨基保护基团(叔-丁基羰基)保护起来后(用量10-100克/克)，再加入到树脂中，从而使其固定到树脂上。经过二氯甲烷洗涤后，氨基的保护基团可以用六氢吡啶(用量10-80％，最好20-40％)脱保护。与此同时，将第一个氨基酸的羧基经过HBTU活化和二异丙基乙胺中和后，加入到结合有第一个氨基酸的树脂中，二个氨基酸反应后即可形成肽键。然后按照多肽类物质(IV)的氨基酸排序，依次加入相应的氨基酸，重复上述的洗涤，氨基去保护，氨基酸羧基的活化等步骤，从而使多肽链不断延长。直到最后一个氨基酸结合到肽链上为止。2、分离合成后的多肽仍然与树脂结合在一起，因此分离的过程就是利用分离液将多肽类物质(IV)从树脂上游离下来。分离液可以采用苯酚，苯硫基甲烷以及三氟乙酸其中的一种或几种的混合物，取10-80毫升的分离液浸泡上述结合有多肽类物质(IV)的树脂，在室温下搅拌1-5小时，然后经过过滤便可得到多肽类物质(IV)混合液。游离的多肽类物质(IV)经过沉淀后，即可分离出来。3、纯化将分离出来的多肽类物质(IV)溶解在水或10-40％的碱溶液中(碱可以选用碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠)，然后本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽类物质（Ⅳ），其特征是由多种氨基酸组成，其氨基酸的排列序列为：ＲＥＰＲＧＳＤＩＡＧＴＴＳＴＬＱＥＱＩ＊ＷＭＴＧＮＰＰ＊＊ＰＶＧ＊＊＊ＩＹＫＫ其中：＊为氨基酸Ａ（丙氨酸）或氨基酸Ｎ（天冬酰氨）＊＊为氨基酸Ｖ（缬氨酸）或氨基 酸Ｉ（异亮氨酸）＊＊＊为氨基酸Ｄ（天冬氨酸）或氨基酸Ｅ（谷氨酸）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许卫东，魏勋斌，潘勇，
申请(专利权)人：北海新升技术开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：45[中国|广西]