展示南非2型口蹄疫病毒B细胞表位猪细小病毒样颗粒的制备方法技术

本发明专利技术根据计算机软件模拟结果，在猪细小病毒PPV VP2蛋白表面Loop2区嵌入SAT2 FMDV B细胞表位(VYTKAAAAIRGDRAALAAKYADTNHTLPPTFNFGYVTVD)。根据昆虫细胞嗜性优化合成嵌合基因GS1921OP，克隆到载体pFastBac

【技术实现步骤摘要】
展示南非2型口蹄疫病毒B细胞表位猪细小病毒样颗粒的制备方法
本专利技术属于生物工程
，尤其是一种展示南非2型口蹄疫病毒B细胞表位猪细小病毒样颗粒的制备及应用。
技术介绍
猪细小病毒(Porcineparvovirus，PPV)属于细小病毒科，细小病毒属，能导致初产母猪及血清学阴性的经产母猪发生流产、不孕、产死胎、木乃伊胎及弱仔等[1]。无囊膜的病毒粒子呈二十面体对称，直径介于20～25nm[2]。基因组为单股负链DNA，5000bp左右，正链有2个ORF[3]。依次编码非结构蛋白NS1、NS2、NS3和结构蛋白VP1、VP2、VP3[4]。VP2拥有4个Loop环，能自组装形成病毒样颗粒(Virus-likeParticles，VLPs)。Hurta-do等人分别使犬细小病毒(CPV)VP2Loop1、2、3、4内的相应基因缺失，再用杆状病毒表达系统表达，结果Loop1、3、4的缺失突变株均不能表达出VLPs，而Loop2(217～234)的缺失突变株则能装配出规则的病毒样颗粒，进一步研究证明Loop2能容纳外源抗原决定簇[5]，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组杆状病毒rBacL

【技术特征摘要】
1.重组杆状病毒rBacL2B的制备方法，其特征在于：根据计算机软件模拟结果，在猪细小病毒PPVVP2蛋白表面Loop2区嵌入SAT2FMDVB细胞表位(VYTKAAAAIRGDRAALAAKYADTNHTLPPTFNFGYVTVD)；根据昆虫细胞嗜性优化合成嵌合基因GS1921OP，克隆到杆状病毒表达载体pFastBacTMDual上，转化感受态细胞DH10Bac，获得重组杆粒rBacmidL2B，转染sf9细胞，收获重组杆状病毒rBacL2B。


2.根据权利要求1所述的重组杆状病毒rBacL2B的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1)L2B基因的扩增及重组供体质粒的构建
根据优化合成含有嵌合序列的质粒GS1921OP，运用生物信息学软件Primer5.0设计引物P1/P2，扩增得到嵌合基因L2B；回收纯化目的条带L2B，将目的片段和pFastBacTMDual载体分别进行BamHI、PstI双酶切，回收清洁后连接，转化DH5α，筛选阳性克隆，提取重组供体质粒pFastL2B，并进行酶切、测序鉴定；
表1引物序列及酶切位点
Table1Primersequenceandenzymecuttingsite



下划线处为保护碱基和酶切位点，其中前面“CG”“AA”为保护碱基；
(2)L2B重组穿梭质粒的构建与...

【专利技术属性】
技术研发人员：李苗苗，丁耀忠，马维民，李茜，汪洋，马炳，侯谦，代军飞，刘永生，张杰，张永光，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62