辣根过氧化物酶的邻苯二胺底物配制方法技术

本发明专利技术公开了一种辣根过氧化物酶的邻苯二胺底物配制方法。辣根过氧化物酶的邻苯二胺底物配制方法：首先将１０－１００毫克邻苯二胺溶于１００微升Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰胺中，形成Ａ液，含有双氧水的柠檬酸－磷酸盐的底物缓冲液为Ｂ液，使用时，将５微升Ａ液与１０毫升Ｂ液混合后即可使用。本发明专利技术主要针对辣根过氧化物酶底物邻苯二胺的底物配方作一些改进，解决邻苯二胺的精确称量的烦琐问题、邻苯二胺在底物缓冲液中不易溶解问题、邻苯二胺小量保存的稳定性以及底物缓冲体系的操作方便等问题。并且这种改进不能破坏原先的辣根过氧化物酶底物系统的灵敏性，也不破坏该系统的分析测试等相关内容。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫检测领域，尤其涉及一种。
技术介绍
辣根过氧化物酶是免疫检测领域中一种非常重要的一种工具酶，由于其来源方便，价格较低，并且检测体系灵敏因而被广泛地应用于免疫学分析测试，其中有可溶性的体系、有沉淀性的体系，可溶性体系是底物经辣根过氧化物酶催化反应后其终产物为可溶性的，因而可以被仪器读取数据，因而主要用于定量、定性分析。辣根过氧化物酶的底物很多，其中最常用的是邻苯二胺，该底物的常用配方是0.1M柠檬酸 24.3ml0.2M Na2HPO4 25.7ml邻苯二胺 20mg30％双氧水 75ul。上述底物配方中邻苯二胺虽然价格较低，但邻苯二胺的用量在20mg在许多单位精确称量这样剂量较为困难，有称量条件并且称量起来也是较为烦琐，并且这种底物必需要现用现配、并且对光敏感，同时这种底物在现配时不太容易被底物缓冲液溶解，这给实验室研究分析以及低层分析机构的分析与应用带来不便，同时由于实际应用时情况也不是一层不变的，有时人们分析测试时只需要用到4ml、有时只用到10ml底物，这样相应的底物也需要变化，称量将会精确称量工作的确变得烦琐，以至一些机构不得不粗放称量。称量的邻苯二胺量太多，也是一种浪费，同时也会对环境保护产生不利影响。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种。首先将10-100毫克邻苯二胺溶于100微升N，N-二甲基甲酰胺中，形成A液，含有双氧水的柠檬酸-磷酸盐的底物缓冲液为B液，使用时，将5微升A液与10-20毫升B液混合后即可使用。含有双氧水的柠檬酸-磷酸盐的底物缓冲液为0.1M柠檬酸 24.3ml 0.2M Na2HPO4 25.7ml30％双氧水75-300ul。本专利技术主要针对辣根过氧化物酶底物邻苯二胺的底物配方作一些改进，解决邻苯二胺的精确称量的烦琐问题、邻苯二胺在底物缓冲液中不易溶解问题、邻苯二胺小量保存的稳定性以及底物缓冲体系的操作方便等问题。并且这种改进不能破坏原先的辣根过氧化物酶底物系统的灵敏性，也不破坏该系统的分析测试等相关内容。具体实施例方式经实际使用发现将邻苯二胺溶于适当的溶剂中时，邻苯二胺在这种溶剂中较稳定，不会出现邻苯二胺在过去常用的柠檬酸-磷酸盐缓冲液中很容易出现变色反应。并且将这种溶液混合物在使用前才吸取适量加入底物缓冲液中直接溶解使用，即时应用。也可以将混合液分装到适量的容器瓶中，每次使用一瓶，一次性用完。这样使用是非常方便，也不会出现底物浪费现象，也不会出现底物在溶解到底物缓冲液中的难溶解问题。精确称量一次，溶解到适量的溶剂中后，再精确分装到各个小瓶中，也可以避免多次精确称取特定量底物的烦琐。并且所涉及的底物分装到小瓶中的体积是极微小的，用前只需将底物缓冲液加入到底物瓶中即可，由于是速溶的，用户只需轻轻吹打数次即可。实施例1称取100毫克邻苯二胺，溶于100微升无水的N，N-二甲基甲酰胺中，然后放入低温下保存，用前吸取10微升体积的底物加入10毫升的含有双氧水的柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，邻苯二胺在N，N-二甲基甲酰胺中是非常容易溶解的，因而底物邻苯二胺所溶解的溶剂的体积不宜太大，以10毫克邻苯二胺溶于10微升N，N-二甲基甲酰胺是很容易做到的，用时只需吸取所需量的底物直接加入到底物缓冲液中。实施例2称取300毫克邻苯二胺，溶于500微升无水的N，N-二甲基甲酰胺中，然后放入低温下保存，用前吸取10微升的底物加入20毫升的含有双氧水的柠檬酸-磷酸盐缓冲液中即可，邻苯二胺在N，N-二甲基甲酰胺中是非常容易溶解的，因而底物邻苯二胺所溶解的溶剂的体积不宜太大，以3毫克邻苯二胺溶于5微升N，N-二甲基甲酰胺也是很容易实现的，用时只需吸取所需量的底物直接加入到底物缓冲液中即可。实施例3称取20毫克的邻苯二胺，溶于200微升无水N，N-二甲基甲酰胺中，然后分装到10-20毫升小透明玻璃瓶中或棕色瓶中，依据需要每瓶分装成5微升，一般每瓶分装底物的量为2毫克。这种底物一次称量，并分装成一批等量的底物，分装量均一致，而且邻苯二胺的溶剂的体积只有大约5微升，一个分装瓶中的底物通常为一快96孔酶标反应板中的底物使用量。使用前只需将10毫升含有双氧水的底物缓冲液加入该底物瓶中混匀即可使用。这样每次使用的底物相对一致，并且底物很容易溶解于底物缓冲液中。实施例4称取400毫克的邻苯二胺，溶于500微升无水N，N-二甲基甲酰胺中，然后分装到10-20毫升小透明玻璃瓶中或棕色瓶中，依据需要每瓶分装成5微升，每瓶分装底物的量邻苯二胺为4毫克。这种底物一次称量，并分装成一批等量的底物，分装量均一致，而且邻苯二胺的溶剂的体积只有大约5微升，一个分装瓶中的底物通常为一快96孔酶标反应板中的底物使用量。使用前只需将10毫升含有双氧水的底物缓冲液加入该底物瓶中混匀即可使用。这样每次使用的底物相对一致，并且底物很容易溶解于底物缓冲液中。权利要求1.一种，其特征在于，首先将10-100毫克邻苯二胺溶于100微升N，N-二甲基甲酰胺中，形成A液，含有双氧水的柠檬酸-磷酸盐的底物缓冲液为B液，使用时，将5微升A液与10-20毫升B液混合后即可使用。2.根据权利要求1所述的一种，其特征在于，所述的含有双氧水的柠檬酸-磷酸盐的底物缓冲液为0.1M柠檬酸24.3ml0.2M Na2HPO4 25.7ml30％双氧水75-300ul。全文摘要本专利技术公开了一种。首先将10－100毫克邻苯二胺溶于100微升N，N－二甲基甲酰胺中，形成A液，含有双氧水的柠檬酸－磷酸盐的底物缓冲液为B液，使用时，将5微升A液与10毫升B液混合后即可使用。本专利技术主要针对辣根过氧化物酶底物邻苯二胺的底物配方作一些改进，解决邻苯二胺的精确称量的烦琐问题、邻苯二胺在底物缓冲液中不易溶解问题、邻苯二胺小量保存的稳定性以及底物缓冲体系的操作方便等问题。并且这种改进不能破坏原先的辣根过氧化物酶底物系统的灵敏性，也不破坏该系统的分析测试等相关内容。文档编号G01N33/532GK1725011SQ20051005080公开日2006年1月25日 申请日期2005年7月21日 优先权日2005年7月21日专利技术者陈正贤, 徐正, 吴建祥, 周雪平, 沈立荣, 叶兴乾 申请人:浙江大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种辣根过氧化物酶的邻苯二胺底物配制方法，其特征在于，首先将１０－１００毫克邻苯二胺溶于１００微升Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰胺中，形成Ａ液，含有双氧水的柠檬酸－磷酸盐的底物缓冲液为Ｂ液，使用时，将５微升Ａ液与１０－２０毫升Ｂ液混合后即可使用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈正贤，徐正，吴建祥，周雪平，沈立荣，叶兴乾，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]