诊断SARS冠状病毒感染的方法技术

本发明专利技术涉及检测在样本中是否存在ＳＡＲＳ冠状病毒的抗体的方法，该方法是基于发现了ＳＡＲＳ冠状病毒的Ｓ、Ｍ、Ｅ、Ｎ和Ｕ２７４蛋白具有抗原性。这样的方法可以被用于诊断患者是否已经被ＳＡＲＳ冠状病毒感染或暴露于ＳＡＲＳ冠状病毒。本发明专利技术还提供了抗ＳＡＲＳ冠状病毒的Ｓ、Ｍ、Ｅ、Ｎ和Ｕ２７４蛋白质的抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术主要涉及诊断病毒感染的方法，尤其是诊断SARS冠状病毒感染的方法。
技术介绍
新出现的严重急性呼吸综合征(SARS)是一种具有全球意义的严重的呼吸疾病。被感染的患者可以表现出非典型性肺炎的症状，SARS与非典型性肺炎的早期的、精确的区分是成功控制这一高度传染性疾病的关键。SARS病毒的高度传染性特性以及高死亡率在日益全球化的世界可以是具破坏性的和高代价的。当2003年SARS在中国广东省内的起源地以外流行扩散时，世界卫生组织(WHO)迅速地认识到了这一点，WHO历史上第一次发布了全球警报。这次爆发影响了超过8,098人，并在短短6个月期间波及到超过29个国家和地区，死亡率达到15％。显然，这一疾病并非一个局部的问题，而是具有对公共卫生部门以外的其它部门的深远影响。由于在2004年1月，新的病例似乎要重新出现，迅速鉴定和隔离被感染患者的紧迫性仍然存在。在许多国家，为了降低接触到可能已经暴露于引起SARS的病毒的风险，对那些在被SARS感染的国家旅行过的人、与SARS患者直接接触过的人和体温超过38℃的人施行了严格的隔离令。在感染的初期对该疾病进行早期诊断能避免不必要的隔离、降低有关人员的应激，并帮助医生决定出适当的医疗行为和/或治疗。因此，在具备确定性和正确度的前提下，尽可能早地鉴定出SARS患者是至关重要的。一种新的冠状病毒被鉴定为SARS(1-4)的病原。冠状病毒是包膜病毒，其包含一27.6-36kb长的单链、正义RNA基因组。对新的SARS冠状病毒(SARS CoV)的核苷酸序列的分析表明该病毒基因组近30kb长(5，6)，并包含了14个潜在的开放阅读框(ORF)(5)。但是，就如何检测、诊断和治疗该疾病而言还有更多待认识的东西。因为没有药物或疫苗可用于该病，被感染患者的快速鉴定和隔离仍然对于疾病的控制极其重要。最初，当SARS被首次鉴定时，最初的疾病控制依赖于旅游和接触史，以及所表现出来的症状。后来，随着对SARS-CoV基因组的鉴定，几种通过PCR基于病毒RNA序列的检测的诊断检测被设计出来并且是现在可以利用的。基于这些方法，WHO已经修正了其对于病例鉴定的标准。但是，现有的用于PCR的方案未脱离它们的局限性。尽管灵敏度高，这样的检测具有固有的问题全世界的科学家和临床医师都不确定来自患者的何种样本(呼吸道样本、唾液、粪便、血液或结膜液)提供了最佳的可复制RNA的制备；RNA提取方法不简单，如果做得不好，可能制备到不能用于将病毒RNA转化为DNA的逆转录步骤的RNA制剂；如果必需以几对引物进行验证性实验，则提取、逆转录和PCR的全过程是耗时的。此外，扩增方法可能伴随着假阳性结果，如2003年8月在加拿大观测到一些被其它人冠状病毒感染的患者最初通过PCR方法被检测为SARS阳性。PCR实验室的污染始终是个问题，这对于SARS会导致不必要的隔离。在新加坡所获得的结果表明，当使用不同的临床样本时，由PCR诊断方法所提供的阳性预测值(PPVs)在56.7％至83.8％之间变动(A.E.Ling，″SARS-the Singapore laboratory experience″，presented at theWHO Conference on SARS Research，Singapore，Republic of Singapore，19 June 2003)。在一个最近的报道中(7)，对两个WHO的SARS逆转录实验室的PCR(RT-PCR)方案进行了评估，所得发现确认RT-PCR具有相似的缺点。因此，当获得阴性结果时，现行的PCR方法不能够排除SARS病毒的存在，也不能排除由于实验室污染导致错误检出率的可能性。包括间接免疫荧光测定(IFA)、对病毒分离物的典型组织培养和用于诊断的细胞培养物的电子显微镜术在内的诊断方法往往是耗时的或在技术上要求很高。因此替代方法对于有效地控制该疾病是非常关键的。尽管将新的冠状病毒，SARS-CoV鉴定为SARS的病原使得有可能开发出不同的检测方法，如WHO所建议的那样仍然要优先提供用于实验室诊断的工具。迄今为止，仍然没有用于诊断SARS的标准化检测，不管这样的检测是基于抗原的还是基于抗体的。用标准化板或通过使用大量临床样本的试验检测新开发的试剂盒将提供克服该缺点的有用信息。专利技术概述一方面，本专利技术提供了一种用于检测是否存在SARS冠状病毒(CoV)的抗体的方法，该方法包括在足以使得抗体能与抗原形成复合物的条件下，用包含抗体的样本接触SARS CoV抗原一段足以使得抗体能与抗原形成复合物的时间的步骤；其中所述抗原含有一种选自S、M、E、N、U274及其免疫原性片段的蛋白质；且其中所述抗体与所述蛋白质间的特异性结合指示该样本含有对SARS CoV具有特异性的抗体。该方法可以被用于检测某人是否已经被SARS CoV感染或暴露于SARS CoV，其中含有抗体的样本来自被检测的人，其中所述抗体与所述蛋白质间的特异性结合指示该人已经被SARS CoV感染或暴露于SARS CoV。本专利技术还提供了商品化试剂盒。一方面，本专利技术提供了一种用于检测在某一样本中是否存在SARS冠状病毒(CoV)的抗体的商品化试剂盒，其包含一种SARS CoV抗原，该SARS CoV抗原包含一种选自S、M、E、N、U274及其免疫原性片段的蛋白质；和检测来自样本的抗体与所述抗原间的复合的工具。另一方面，本专利技术提供了一种用于检测某人是否已经被SARS冠状病毒(CoV)感染或暴露于SARS CoV的商品化试剂盒，其包含一种SARS CoV抗原，该SARS CoV抗原包含一种选自S、M、E、N、U274及其免疫原性片段的蛋白质；和检测所述抗原与针对该抗原的抗体的复合的工具，其中所述样本是被检测的人的含有抗体的样本。另一方面，本专利技术提供了一种分离的抗体，其针对抗原性SARSCoV蛋白，其中所述抗原SARS CoV蛋白是S、M、E、N、U274或其免疫原性片段的蛋白质。本专利技术的抗体被用于检测样本中是否存在SARS CoV的S、M、E、N或U274蛋白。因此，在另一方面，本专利技术提供了检测是否存在S、M、E、N或U274 SARS CoV蛋白的方法，该方法包括在足以使得抗体能与抗原形成复合物的条件下，用含有抗原的样本接触抗体一段足以使得抗体能与抗原形成复合物的时间，所述抗体针对一种选自S、M、E、N和U274的蛋白质；其中所述抗体与所述抗原间的特异性结合指示该样本含有包含S、M、E、N、U274或其免疫原性片段的抗原。通过阅读以下对本专利技术的特定实施方式的描述以及附图，本专利技术的其它方面和特征对于本领域技术人员而言是显而易见的。附图说明在附图中，仅以举例的方式对本专利技术的实施方式进行说明，其中图1是对应于结构蛋白S、M、N和E以及特有蛋白(UX)的ORF的结构组成和表达的示意图，其中X表示由各ORF所编码的氨基酸的数；相应的被标注的ORF 1-14被指出来；图2图示的是Western印迹分析，表明在患者血清中存在抗各种SARS-CoV病毒蛋白的抗体；图3图示的是通过SDS-PAGE分析并用考马斯亮蓝R-250(Bio-Rad)染色的细菌表达的GST-U274、GST-U122、GST-N和GST蛋白；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测是否存在ＳＡＲＳ冠状病毒（ＣｏＶ）的抗体的方法，该方法包括在足以使得抗体与抗原形成复合物的条件下，将ＳＡＲＳＣｏＶ抗原与含有抗体的样本接触一段足以使得抗体与抗原形成复合物的时间的步骤，其中所述抗原包含一种选自Ｓ、Ｍ、Ｅ、Ｎ、 Ｕ２７４及其免疫原性片段的蛋白质；且其中所述抗体与所述蛋白质间的特异性结合指示该样本含有对ＳＡＲＳＣｏＶ具有特异性的抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈燕如，吴佩燕，伯特拉姆克林顿菲尔丁，申硕，林成义，洪万进，阮一骏，卫嘉玲，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：SG[新加坡]