用于用抗ROR1免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法技术

公开了包含ROR1抗原结合结构域的嵌合抗原受体。还公开了涉及所述嵌合抗原受体的核酸、重组表达载体、宿主细胞、抗原结合片段和药物组合物。还公开了在对象中治疗或预防癌症的方法、以及制备嵌合抗原受体T细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于用抗ROR1免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.Section119(e)要求于2017年11月3日提交的美国临时专利申请No.62/581,284的优先权权益，其全部内容通过引用并入本文。序列表本申请包含已经以ASCII格式电子提交并且在此通过引用整体并入的序列表。2018年10月25日创建的ASCII拷贝被命名为SequenceListing.txt并且大小为90.0千字节。关于联邦政府资助研究和开发的声明本专利技术是在执行与卫生和人服务部(theDepartmentofHealthandHumanService)下属的国家卫生研究院(theNationalInstitutesofHealth)签订的合作研究和开发协议中产生的。美国政府在本专利技术中享有某些权利。
本申请涉及癌症领域，特别地涉及ROR1抗原结合结构域和包含这样的ROR1抗原结合结构域的嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，CAR)及其使用方法。
技术介绍
癌症是对人健康最致命的威胁之一。仅在美国，癌症每年影响接近130万例新患者，并且其是继心血管疾病之后第二位的死亡原因，引起大约四分之一的死亡。实体瘤是这些死亡中大多数的原因。尽管在某些癌症的医学治疗方面已取得显著进展，但是在过去的20年内所有癌症的总体5年存活率仅提高约10％。癌症或恶性肿瘤转移并且以不受控制的方式迅速生长，使得治疗极其困难。在实体瘤和液体瘤的治疗中有许多未满足的治疗需求。ROR1，受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptortyrosinekinase-likeorphanreceptor1)，是一种在许多癌症类型(包括CLL、乳腺癌、胶质母细胞瘤、肺腺癌和肉瘤(尤因肉瘤(Ewingsarcoma)、骨肉瘤、横纹肌肉瘤和纤维肉瘤))中高表达的胚胎蛋白，且通常在正常组织中不存在(SupingZhang，etal.，2012，TheOnco-EmbryonicAntigenROR1IsExpressedbyaVarietyofHumanCancers.AmJPathol，181：1903-1910，AshwiniBalakrishnan，etal.，2017，AnalysisofROR1ProteinExpressioninHumanCancerandNormalTissues.，ClinCancerRes23：3061-3071，Borcherding，Nicholasetal.，2017，ROR1，anEmbryonicProteinwithanEmergingRoleinCancerBiology.Protein&Cell5.7(2014)：496-502)。ROR1具有3个剪接变体，包括104kDa(多至120kDa，取决于糖基化)跨膜糖蛋白，其中包含937个氨基酸(1至29个信号肽)和2个较小的胞内和分泌形式变体(GeneBankNP_005003，Masiakowski，P.，andCarroll，R.D.，1992，ANovelFamilyofCellSurfaceReceptorswithTyrosineKinase-likeDomain，JBiolChem36：26181-26190.)。ROR1在转化的细胞表面的存在表明靶向ROR1将使得能够针对一系列液体癌症(例如慢性淋巴细胞白血病(chroniclymphocyticleukemia，CLL)和其他实体瘤)开发新的癌症治疗(Borcherding，N.，Kusner，D.etal.，2014，ROR1，anembryonicproteinwithanemergingroleincancerbiology.Protein&Cell，5：496-502)。尽管在成人组织中普遍不存，但至少有一项报告在甲状旁腺；胰岛；以及食管、胃和十二指肠的区域中发现ROR1表达(AshwiniBalakrishnan，etal.，2017，AnalysisofROR1ProteinExpressioninHumanCancerandNormalTissues.，ClinCancerRes23：3061-3071)，承认在ROR1靶向抗癌治疗的临床应用中应谨慎。ROR1受体包含胞质蛋白激酶结构域，根据一些报告，其参与Wnt和EGFR信号传导(Borcherding，N.，Kusner，D.etal.，2014，ROR1，anembryonicproteinwithanemergingroleincancerbiology.Protein&Cell，5：496-502)。在肿瘤中，ROR1可诱导上皮-间充质转化(epithelialtomesenchymaltransition，EMT)，并促进肿瘤增殖、侵袭和转移形成，并介导对凋亡的抗性(Yamaguchi，Tomoya，etal.，2012，“NKX2-1/TITF1/TTF-1-InducedROR1isrequiredtosustainEGFRsurvivalsignalinginlungadenocarcinoma.”Cancercell21.3：348-361；Borcherding，N.，Kusner，D.etal.，2014，ROR1，anembryonicproteinwithanemergingroleincancerbiology.Protein&Cell，5：496-502)。它在促成肿瘤表型中的作用表明它可在肿瘤的发生或发展中提供重要的功能，并因此是一种驱动蛋白。较早的癌症治疗方法包括外科手术、放射治疗、化学治疗以及针对血液肿瘤的骨髓移植。然而，目前的一线治疗值得进一步改善。通过新的免疫治疗策略寻求这样的改善。已经使用多种方式开发了靶向ROR1抗原的正在进行的临床前研究和临床试验。已在鼠和非人灵长类动物二者系统中测试了表达ROR1特异性CAR的T淋巴细胞(HuangX，ParkH，GreeneJ，PaoJ，MulveyE，ZhouSX，etal.，2015，IGF1R-andROR1-SpecificCARTCellsasaPotentialTherapyforHighRiskSarcomas.PLoSONE10(7)：e0133152；HudecekM，SchmittTM，BaskarS，Lupo-StanghelliniMT，NishidaT，YamamotoTN，BleakleyM，TurtleCJ，ChangWC，GreismanHA，WoodB，MaloneyDG，JensenMC，RaderC，RiddellSR，2010，TheB-celltumor-associatedantigenROR1canbetargetedwithTcellsmodifiedtoexpressaROR1-specificchimericantigenreceptor.Blood116：4532-41.)。非人灵长类动物中没有毒性，这提本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.编码嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸分子，所述嵌合抗原受体(CAR)包含至少一个胞外抗原结合结构域、至少一个跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，所述胞外抗原结合结构域包含由含有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：7的核苷酸序列编码的ROR1抗原结合结构域。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171103 US 62/581,2841.编码嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸分子，所述嵌合抗原受体(CAR)包含至少一个胞外抗原结合结构域、至少一个跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，所述胞外抗原结合结构域包含由含有SEQIDNO：1或SEQIDNO：7的核苷酸序列编码的ROR1抗原结合结构域。


2.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个ROR1抗原结合结构域包含与ROR1结合的抗体的至少一个单链可变片段。


3.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个ROR1抗原结合结构域包含与ROR1结合的抗体的至少一个重链可变区。


4.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个ROR1抗原结合结构域、所述至少一个胞内信号传导结构域或这二者通过接头或间隔区结构域与所述跨膜结构域连接。


5.权利要求4所述的分离的核酸分子，其中所编码的接头或间隔区结构域来源于IgG4、CD8或CD28的胞外结构域，并且与跨膜结构域连接。


6.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中在所编码的胞外ROR1抗原结合结构域之前是编码前导肽的前导核苷酸序列。


7.权利要求6所述的分离的核酸分子，其中所述前导核苷酸序列包含含有SEQIDNO：19的核苷酸序列，其编码SEQIDNO：20的前导氨基酸序列。


8.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述跨膜结构域包含含有以下的蛋白质的跨膜结构域：T细胞受体的α、β或ζ链，CD8，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8，CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD83，CD86，CD134，CD137，CD154和TNFRSF19，或其任意组合。


9.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中编码所述胞外ROR1抗原结合结构域的所述核酸序列包含含有SEQIDNO：1、3、5、7、9或11的核酸序列或与其具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。


10.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个胞内信号传导结构域还包含CD3ζ胞内结构域。


11.权利要求10所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个胞内信号传导结构域相对于所述CD3ζ胞内结构域布置在N端侧。


12.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个胞内信号传导结构域包含共刺激结构域、初级信号传导结构域，或其任意组合。


13.权利要求12所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个共刺激结构域包含以下的功能性信号传导结构域：OX40、CD70、CD27、CD28、CD5、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、DAP10、DAP12和4-1BB(CD137)，或其任意组合。


14.嵌合抗原受体(CAR)，其由权利要求1所述的分离的核酸分子编码。


15.权利要求14所述的CAR，其包含至少一个胞外抗原结合结构域、至少一个跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，所述胞外抗原结合结构域包含含有SEQIDNO.2或8的氨基酸序列的ROR1抗原结合结构域。


16.权利要求15所述的CAR，其中所述ROR1抗原结合结构域包含与ROR1结合的抗体的至少一个单链可变片段。


17.权利要求15所述的CAR，其中所述ROR1抗原结合结构域包含与ROR1结合的抗体的至少一个重链可变区。


18.权利要求15所述的CAR，其中所述跨膜结构域包含含有以下的蛋白质的跨膜结构域：T细胞受体的α、β或ζ链，CD8，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8，CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137，CD154和TNFRSF19，或其任意组合。


19.权利要求18所述的CAR，其中所述CD8跨膜结构域包含SEQIDNO：22的氨基酸序列或与SEQIDNO：22的氨基酸序列具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。


20.权利要求15所述的CAR，其中所述至少一个胞外抗原结合结构域和所述至少一个胞内信号传导结构域或这二者通过接头或间隔区结构域与所述跨膜结构域连接，所述胞外抗原结合结构域包含含有SEQIDNO.2或8的氨基酸序列的ROR1抗原结合结构域。


21.权利要求20所述的CAR，其中所述接头或间隔区结构域来源于IgG4、CD8或CD28的胞外结构域，并且与跨膜结构域连接。


22.权利要求15所述的CAR，其中所述至少一个胞内信号传导结构域包含共刺激结构域和初级信号传导结构域。


23.权利要求22所述的CAR，其中所述至少一个胞内信号传导结构域包含共刺激结构域，所述共刺激结构域包含选自以下的蛋白质的功能性信号传导结构域：OX40、CD70、CD27、CD28、CD5、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、DAP10、DAP12和4-1BB(CD137)，或其组合...

【专利技术属性】
技术研发人员：里马斯·J·奥伦塔什，迪娜·施奈德，博罗·德罗普利奇，迪米特尔·S·迪米特罗夫，朱忠玉，
申请(专利权)人：莱蒂恩技术公司，美国政府卫生与公众服务部，
类型：发明
国别省市：美国;US