本发明专利技术提供了鉴定和／或制备用于减少和／或防止纤维变性的化合物的方法，包含步骤：提供ＣＴＧＦ受体；提供试验样品；提供ＣＴＧＦ受体激动剂（ａｇｏｎｉｓｔ）；将ＣＴＧＦ受体与试验样品接触；随后或同时将ＣＴＧＦ受体与ＣＴＧＦ受体激动剂接触；检测和／或测量ＣＴＧＦ受体活化量；比较存在试验样品时检测和／或测量的ＣＴＧＦ受体活化量与不存在试验样品时检测和／或测量的ＣＴＧＦ受体活化量；根据其引起ＣＴＧＦ受体活化没有增加或减少来确定化合物是否降低和／或防止纤维变性。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】该要求保护的专利技术涉及鉴定和/或制备用于减少和/或防止纤维变性的化合物的方法。本专利技术还涉及用于降低和/或防止纤维变性的化合物和该化合物的用途。当生物学组织损伤时，损伤和相关的炎症反应都可引起细胞死亡。当细胞死亡发生时，合成新组织代替死亡的或垂死的细胞。新组织的合成可分成两种类型，特化细胞的再生和结缔组织的增加。在一些病理情况下，结缔组织的增加在愈合过程中占优势，导致形成纤维变性组织。在纤维变性中，新组织修复组织中的任何结构缺损，但是由结缔组织和结缔组织生产细胞取代特化细胞损害了其自身的功能。纤维变性是否发生，或者实际纤维变性的程度，受到各种因素的影响，包括待愈合的损伤的性质，严重性和位置。纤维变性最常见的是皮肤表面的瘢痕，除了大面积的瘢痕形成外，它是相对不令人讨厌的。然而，纤维变性也可在诸如肝脏，肺和肾的内部器官的组织中发生。在大多数情况下，最严重的是在这些区域的纤维变性，因为该器官的特化活性受到损害。在最极端的情况中，由于该损害可出现器官衰竭或死亡。纤维变性在疾病状态中的重要性的一个例子可通过在糖尿病，即在全世界现在达到流行比例的一种疾病中出现的肾纤维变性(糖尿病性肾病)来证实。糖尿病的发病率在最近几年经历了一个全球性的增长。特别是它归功于2型糖尿病(晚期发作(late-onset)的糖尿病)的显著增长(Silink M(2002)，Horm.Res.57(Suppl 1)第1-5页)。糖尿病与许多继发型并发症，特别是微血管相关性并发症密切联系。这些并发症，包括纤维变性情况的肾病，通常在糖尿病开始后的许多年形成。糖尿病性肾病的特征在于细胞外基质蛋白质在肾小球膜和肾小球基底膜中和在小管间质中细胞外基质蛋白的过多沉积。在确定糖尿病性肾病(DN)易感性中认为遗传背景是重要的(Quinn M等，(1996)Diabetologica 39第940-945页)，但是据信关键性起动因素是组织暴露于慢性高血糖中(UKPDS Group，(1998)Lancet352，第837-853页)。肾病的流行随地理位置，糖尿病类型，和诊断后时间的长度而变化。尽管有影响因素，但是预期糖尿病性肾病的流行在前十年中会增长(Bagust A等，(2002)Diabetes Med19(Suppl4)第1-5页)。糖尿病性肾病是末期肾病的主要原因，且需要新的治疗方法来限制其发展。糖尿病性肾病的病理学在1和2型糖尿病中相似。两种类型的糖尿病都与肾小球中存在的相似超微结构改变相关联(Osterby R，(1992)Diabetologica 35第803-812页)。肾小球基膜厚度增加，且肾小球膜细胞外基质扩张。据认为是糖尿病性肾病中肾功能下降的主要原因是肾小球膜扩张(Steffes M等(1989)Diabetes 38第1077-1081页)。由于肾小球膜基质扩张，影响肾小球毛细血管，减少了可用于过滤的表面并变窄或阻塞管腔。除了肾小球硬化症外，小管间质纤维变性也在糖尿病性肾病中发生。肾功能的进行性丧失与其它肾病中出现的进行性间质纤维变性相关联(Risdon R等，(1968)Lancet2 7564第363-366页)。纤维变性疾病通常与生长因子和激素的不平衡相关联，后者又接着影响蛋白质表达的产量。异常蛋白质表达接着又导致纤维变性形成。例如，纤维变性通常受到纤维变性组织中存在的转化生长因子-β的增加的影响。纤维变性是无有效疗法的最大疾病群体之一，部分原因是这些疾病的机制受到各种因素的影响且准确的细胞机制未被阐明。因此，对纤维变性或其可提供的靶的分子靶特性缺乏了解，而围绕该靶可作为抗纤维变性疗法的基础。对于糖尿病性肾病，研究表明葡萄糖可至少部分通过转化生长因子-β(TGF-β)的作用诱导基质合成(Ziyadeh F等，(2000)Proc Natl Acad Sci USA97第8015-8020页)。然而，TGF-β具有许多生理学作用，包括涉及免疫和上皮增生(McCartney-Francis N等，(1998)Int.Rev.Immunol.16第553-580页)。这些变化的生理学作用意味着TGF-β不可能是临床上有利的靶。抑制TGF-β的作用可能对生物体具有多种影响，引起不需要的和潜在的严重副作用。转化生长因子-β通过直接诱导胶原蛋白和基质合成引起纤维变性。另外，TGF-β也能诱导参与和/或影响该途径的其它分子的表达引起纤维变性。一个该蛋白是结缔组织生长因子(CTGF)，它诱导增生，胶原蛋白合成和间充质细胞的趋化性(Moussad E等，(2000)Molec Genet Metab.71第276-292页)。CTGF(CCN2)是具有多个结构域的38kDa的分泌蛋白质，它由立即早期基因编码且是CCN蛋白质家族的一个成员(Bork等，(1993)Febs Lett.327第125-130页；Perbal等，(2001)Mol.Pathol.54第57-79页)。然而，其发挥功能的分子机制尚未充分阐明。CTGF中存在多个结构域表明它与多个其它因子相互作用。已表明CTGF通过其von Willebrand型C结构域直接结合BMP4和TGF-β，导致抑制BMP和增强TGF-β信号传导(Abreu等，(2002)Nat.Cell.Biol.4第599-604页)。已表明CTGF结合整联蛋白(Babic等，(1999)Mol.Cell Biol.19第3811-3815页)且有可能该相互作用在介导CTGF诱导的一些细胞现象中是重要的。CTGF在包括糖尿病性肾病的各种纤维变性疾病中过量表达(Wahab N等，(2001)Biochem J 359第77-87页)。事实上，已表明CTGF表达水平增加与糖尿病性肾病的严重性和进行速度增加相关联(Ito Y等，(1998)KidneyInt.53第853-886页)。因此，CTGF可以是潜在有用的纤维变性反应的分子指标。尚未证实CTGF直接诱导体内肾纤维变性，但是，当与TGF-β一起皮下注射时，在大鼠中诱导持续皮肤纤维化(Mori T等(1999)J.Cell.Physiol.181第153-159页)。在本专利技术的形成过程中，本专利技术人证实了CTGF与细胞受体，即TrkA受体相互作用，以诱导与纤维变性形成相关的细胞内信号传导级联。有三种Trk受体酪氨酸激酶基因(TrkA，TrkB和TrkC)。与其配体结合时，Trk受体二聚化并自身磷酸化，导致包括Ras，Rap-1，和Cdc 42-Rac-Rho家族的一些小G蛋白，以及受MAP激酶，PI3-激酶，和磷脂酶C-γ(PLCγ)调节的途径活化(Segal，2003)。活化的Trk受体也可与各种细胞质衔接(adaptor)蛋白直接或间接相互作用以产生许多生物学反应，包括，细胞增殖和存活；轴突和树突生长，和改型；细胞骨架的装配和改型；膜运输和融合；和突触的形成，功能，和可塑性(Huang E和Reichardt L，(2003)Annu.Rev.Biochem.72第609-642页)。在实施例中描述的本专利技术人的工作证实了Trk酪氨酸激酶活性是涉及纤维变性的细胞内信号分子的CTGF-依赖型诱导所必需的。该工作导致形成了鉴定和制备可与CTGF受体本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鉴定和／或制备用于减少和／或防止纤维样变性的化合物的方法，包括步骤：（ａ）提供ＣＴＧＦ受体；（ｂ）提供试验样品；（ｃ）提供ＣＴＧＦ受体激动剂；（ｄ）将ＣＴＧＦ受体与试验样品接触；（ｅ）随后或同时将ＣＴＧＦ受体与ＣＴＧＦ受体激动剂接触；（ｆ）检测和／或测量ＣＴＧＦ受体的活化量；（ｇ）比较存在试验样品时ＣＴＧＦ受体活化量与不存在试验样品时检测和／或测量的ＣＴＧＦ受体活化量；和（ｈ）根据其引起ＣＴＧＦ受体活化没有增加或减少来确定化合物是否降低和／或防止纤维变性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗杰M马森，纳迪亚A韦哈布，
申请(专利权)人：帝国大学改革有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[]
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