水中浮游藻类叶绿素测定方法技术

本发明专利技术公开了一种水中浮游藻类叶绿素ａ的测定方法，该方法用醋酸纤维滤膜过滤获得水中的浮游藻类，用无水乙醇浸泡提取藻类体内的叶绿素ａ，通过离心后得到上清液，以无水乙醇作参比，用可见分光光度计在６３０、６４７、６６４、７５０ｎｍ处测定吸光度，计算出水样中藻类叶绿素ａ的含量。本发明专利技术的方法操作程序简单，安全可靠，结果重现性好，实用性强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于一种藻类叶绿素测定方法，具体涉及利用分光光度法测定水体中藻类叶绿素a的方法，适合于各种地表水的测定。
技术介绍
叶绿素是植物光合作用中的重要光合色素。通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体中初级生产力的情况。在环境监测中，水体中叶绿素a含量能够很好地反映水体中浮游藻类的生物量，因而被当作水体富营养化的指标之一。测定水中浮游藻类叶绿素a的方法有3类，即分光光度法、荧光法和高效液相色谱法。其中分光光度法所需仪器简单，操作简便，成本低廉，是目前采用的主要方法。美国的《水和废水监测分析方法》(Standard Methods for the Examination of Water andWastewater)提出的标准方法是使用玻璃纤维滤膜过滤水样，加90％丙酮研磨，在4℃、黑暗条件下提取2h以上，离心后用分光光度计测定吸光度，再计算出叶绿素a的含量。该方法的缺点是玻璃纤维滤膜价格相对较高，挥发性有机物丙酮对人体具有一定的危害，研磨耗时较长，转移提取液时容易损失，而且需要低温保存提取液。我国国家环保总局制定的《水和废水监测分析方法》(第四版)采用的方法是用醋酸纤维滤膜过滤水样，截留藻类的滤膜低温干燥6～8h后，加90％丙酮研磨提取，离心后用分光光度计测定并计算叶绿素a含量。该方法的缺点是丙酮对人体具有危害性，研磨耗时较长，转移提取液时容易损失。西安建筑科技大学黄廷林等(专利公开号CN1631117A)介绍了一种较为安全的乙醇提取法，该方法使用90％的乙醇作为提取液，使测试过程的安全性得到提高。但是该方法的不足之处主要有两点第一是使用0.8μm滤膜，孔径偏大，会有部分超微藻类无法截留。第二，该方法同样需要研磨，转移提取液时容易损失，耗时费力。
技术实现思路
本专利技术目的是通过对原有藻类叶绿素测定方法的改进，提供一种设备简单、操作简便、安全无害、结果准确性高的测定方法。本专利技术的目的是通过以下解决方案实现的采用醋酸纤维滤膜过滤水中的浮游藻类，用无水乙醇直接浸泡截留了藻类的醋酸纤维滤膜，室温下置于黑暗处提取6～24h后取出离心，获得上清液在630、647、664、750nm波长下测定吸光度，并计算水体中叶绿素a的含量。所述的醋酸纤维滤膜采用0.45μm孔径。过滤后滤膜置于10ml具塞离心管，加10ml无水乙醇浸泡。所述提取条件为黑暗处，温度条件为15-27℃，提取时间为6～24h。所述提取液离心条件为3500r·min-1，离心10min。使用光程为1cm的玻璃比色皿，无水乙醇作参比进行比色。依照下式计算叶绿素a含量。 V—过滤水样体积(L)；D—不同波长下的吸光度；V1—提取液定容后的体积(ml)本专利技术的测定方法有如下优点无需研磨，可以大大节省人力，并避免因转移提取液而造成的叶绿素损失；使用无水乙醇作为提取液，对人体安全无毒害；提取液可放置于室温下，无需冰箱保存，操作简便、减少能耗；一般水样测定项目较多，叶绿素可以在提取6～24h之后再行比色测定，因而能够缓解人手不足的矛盾；提取更完全，结果重现性好。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明取某湖泊水体若干作为试验水样，使用孔径为0.45μm的醋酸纤维滤膜(50cm)过滤100ml水样，将滤膜放入10ml具塞离心管中，加入分析纯无水乙醇10ml，盖上塞子，摇动数次后放置于黑暗处。6～24h后取出离心管，摇匀后使用医用离心机以3500r·min-1离心，上清液倒入1cm玻璃比色皿，以无水乙醇作参比，用光栅分光光度计在630、647、664、750nm波长下测定吸光度，利用前面所述公式计算叶绿素a含量。试验设3个平行。为验证本方法的准确性和重现性，同时取同一水样，用国家环境保护总局编写的《水和废水监测分析方法》(第四版)的叶绿素测定方法测定一组数据(表1中第二列数据)(基本条件是研磨，丙酮提取)。此外，还测定了在不研磨条件下，使用乙醇不同提取时间(2h、6h、24h、48h)的提取量，以及不研磨条件下，使用丙酮不同时间的提取量，用来验证本方法的准确性。由表1可以看出，采用国家环保总局推荐方法(研磨+丙酮提取)测得的叶绿素a平均值为91.2μg/L，采用本专利技术推荐的方法6～24h提取测得的叶绿素a含量与该方法接近，且提取量略高(6h和24h分别为94.0μg/L和96.1μg/L)。采用丙酮直接提取得到的结果是，在6h叶绿素a提取量达到最大，但是其相对标准偏差较大。此外，丙酮直接提取液中叶绿素a在室温下稳定性较差，不同提取时间测得数值变化很大，因而不推荐使用。通过本实施例，证明了本专利技术推荐的方法不仅提取水中藻类取叶绿素a更完全，而且重现性好。表1不同提取方法测得叶绿素a含量及重现性比较(单位μg/L) 注(1)表中黑体字为本专利技术方法测得数据；(2)乙醇提取使用本专利技术所述计算公式；(3)丙酮提取使用国家环保总局《水和废水监测分析方法》(第四版)中所述公式。权利要求1.一种水中浮游藻类叶绿素a的测定方法，其特征是采用醋酸纤维滤膜过滤水中的浮游藻类，用无水乙醇直接浸泡截留了藻类的醋酸纤维滤膜，室温下置于黑暗处提取6～24h后取出离心，获得上清液在630、647、664、750nm波长下测定吸光度，并计算水体中叶绿素a的含量。2.根据权利要求1所述的水中浮游藻类叶绿素a的测定方法，其特征是所述醋酸纤维滤膜采用0.45μm孔径。3.根据权利要求1所述的水中浮游藻类叶绿素a的测定方法，其特征是过滤后滤膜置于10ml具塞离心管，加10ml无水乙醇浸泡。4.根据权利要求1所述的水中浮游藻类叶绿素a的测定方法，其特征是所述提取条件为黑暗处，温度条件为15-27℃，提取时间为6～24h。5.根据权利要求1所述的水中浮游藻类叶绿素a的测定方法，其特征是所述提取液离心条件为3500r·min-1，离心10min。6.根据权利要求1所述的水中浮游藻类叶绿素a的测定方法，其特征是使用光程为1cm的玻璃比色皿，无水乙醇作参比进行比色。全文摘要本专利技术公开了一种水中浮游藻类叶绿素a的测定方法，该方法用醋酸纤维滤膜过滤获得水中的浮游藻类，用无水乙醇浸泡提取藻类体内的叶绿素a，通过离心后得到上清液，以无水乙醇作参比，用可见分光光度计在630、647、664、750nm处测定吸光度，计算出水样中藻类叶绿素a的含量。本专利技术的方法操作程序简单，安全可靠，结果重现性好，实用性强。文档编号G01N21/17GK1963466SQ20061012945公开日2007年5月16日 申请日期2006年11月20日 优先权日2006年11月20日专利技术者刘春光, 孙红文, 孙凌, 李贺, 钟远, 庄源益 申请人:南开大学 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水中浮游藻类叶绿素ａ的测定方法，其特征是：采用醋酸纤维滤膜过滤水中的浮游藻类，用无水乙醇直接浸泡截留了藻类的醋酸纤维滤膜，室温下置于黑暗处提取６～２４ｈ后取出离心，获得上清液在６３０、６４７、６６４、７５０ｎｍ波长下测定吸光度，并计算水体中叶绿素ａ的含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春光，孙红文，孙凌，李贺，钟远，庄源益，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]