一株阿氏芽孢杆菌及其在西洋参病害防治中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株阿氏芽孢杆菌JNM8102，属于微生物利用与开发领域。该菌株已于2019年9月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通生物中心，分类命名为阿氏芽孢杆菌（Bacillus aryabhattai），保藏编号为：CGMCC No.18498；所述阿氏芽孢杆菌JNM8102可应用于西洋参病虫害防治中，具有遗传稳定性强，与环境兼容性好、防病持效期长等优点。

【技术实现步骤摘要】
一株阿氏芽孢杆菌及其在西洋参病害防治中的应用
本专利技术属于植物病虫害生物防治
、微生物资源的开发与利用领域，特别涉及一株阿氏芽孢杆菌JNM8102及其在西洋参防治中的应用。
技术介绍
西洋参（学名：Panaxquinquefolius）是五加科人参属多年生草木植物，别名花旗参、洋参、西洋人参、Americanginseng，原产于加拿大的大魁北克与美国的威斯康辛州，我国北京怀柔、山东文登与吉林长白山等地皆有种植。西洋参具有滋阴补气，宁神益智及清热生津，降火消暑的双重功效，应用广泛，市场供不应求。西洋参种植投资大，整个周期长达4~5年，种植过程中有多种病虫害威胁植株影响产量，病虫害严重时造成减产甚至绝产。研究发现，对西洋参威胁最大的是根腐病，主要由尖孢镰刀菌（Fusariumoxysporum）和茄病镰刀菌（Fusariumsolani）等引起，该菌同时也是香蕉、西瓜、黄瓜等作物的病原菌。随着绿色农业理念的发展，国家对农作物农药残留的限量越发严格，西洋参种植管理过程中农药使用种类和范围受到极大限制，对镰刀菌最有效的含五氯硝基苯类农药已被禁用，在发生根腐病的时候缺乏特效药，给种植户带来重大经济损失。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是：克服现有技术中存在的不足，本专利技术提供一种阿氏芽孢杆菌JNM8102，通过利用微生物的方法达到防治西洋参病害的目的。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一株阿氏芽孢杆菌JNM8102，该菌株已于2019年9月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为阿氏芽孢杆菌（Bacillusaryabhattai），保藏编号为：CGMCCNo.18498，保藏地址为中国北京。进一步地，所述菌株16SrRNA基因序列如SEQ.NO.1。进一步地，所述阿氏芽孢杆菌JNM8102在西洋参病害防治中的应用。一种生物防治制剂，包括所述的一种阿氏芽孢杆菌JNM8102。一种生物防制剂的制备方法，包括如下步骤：（1）菌株活化：挑取菌种划线接种至固体斜面培养基，于恒温培养箱30～37℃培养18～24h，待斜面长满菌落用于转接液体种子；（2）液体种子制备：挑取活化菌株接种于装有种子培养基的容器中，八层纱布封口，温度30~37℃，160～220r/min摇床振荡培养14～28h，长出大量菌体细胞，得液体种子；（3）液体发酵：按体积比5～20%接种量向发酵培养基接入步骤2制备的液体种子，转速300～700r/min，溶氧控制20%~50%，pH7.0～7.5，温度30～37℃，通气培养24～48h，得到菌株JNM8102的发酵液。进一步地，所述固体斜面培养基的成分及其浓度为：葡萄糖1~2g/L，酵母浸粉3~5g/L，蛋白胨5~10g/L，NaCl3~5g/L，琼脂15~20g/L，pH7.0~7.2，121℃高压蒸汽灭菌20min。进一步地，所述液体种子培养基的成分及其浓度为：葡萄糖5~10g/L，酵母浸粉3~5g/L，蛋白胨5~10g/L，NaCl3~5g/L，pH7.0~7.2，121℃高压蒸汽灭菌20min。进一步地，所述发酵培养基的成分及其浓度为：葡萄糖10~20g/L，蛋白胨5~10g/L，酵母浸粉1~5g/L，MgSO40.1~0.5g/L，KH2PO40.1~1g/L，硫酸铵2~5g/L，CoCl250~100mg/L，pH7.0~7.2，121℃高压蒸汽灭菌20min。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术所述的一株阿氏芽孢杆菌JNM8102，具有生长速度快、发酵密度高，作用谱广防治多种西洋参病害、遗传稳定性强，与环境兼容性好、防病持效期长等优点，具有良好的应用前景。附图说明图1为菌株JNM8102显微形态；图2为菌株JNM8102基于16SrRNA序列的系统发育树；图3为菌株JNM8102促进西洋参出苗的田间试验结果，其中左图为未经过菌株JNM8102发酵液处理的西洋参种子出苗情况，右图为经过菌株JNM8102发酵液处理的西洋参种子出苗情况；图4为菌株JNM8102促进西洋参生长的田间试验结果，其中左图为未经过菌株JNM8102发酵液处理的西洋参苗生长情况，右图为经过菌株JNM8102发酵液处理后的西洋参苗生长情况。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作更进一步的说明。一、制备菌株JNM8102的步骤为：（1）分离；本专利技术所述阿氏芽孢杆菌JNM8102，采用稀释涂布法分离获得的。具体方法为：1、选取用餐厨垃圾养殖7天的黑水虻（Hermetiaillucens）幼虫20条，在超净台上用生理盐水冲洗黑水虻幼虫体表；2、将冲洗后的黑水虻幼虫置于75%乙醇溶液中浸泡1min，转入0.1%升汞浸泡2min；3、将黑水虻幼虫取出，并用无菌水冲洗干净黑水虻幼虫身上残留的药剂，在解剖镜下用解剖针取出肠道；4、将取出的黑水虻置于无菌研钵里加入5mL无菌生理盐水进行研磨，制成菌悬液，梯度稀释后涂布于LB培养基平板中，30℃恒温培养4d，将培养基上的不同形态的菌落在LB培养基平板中进行划线，纯化获得的菌株，并分别编号保存。上述LB培养基的组分及其相应浓度为：酵母浸粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂20g/L，pH7.0，121℃高压蒸汽灭菌20min。（2）筛选；采用对峙培养法，用直径5mm的打孔器将尖孢镰刀菌接种到PDA培养基的中心点，在菌块离中心2cm处对称两侧接种10μL拮抗菌液，倒置，在28℃恒温培养5d，以不接种拮抗菌液的培养皿作对照，根据抑菌圈大小确定拮抗效果，筛选抑菌圈最大的菌株进行培养并保藏。上述PDA培养基的组分及其相应浓度为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，pH自然，121℃高压蒸汽灭菌20min。通过大量筛选工作得到一株能够高效拮抗尖孢镰刀菌的菌株JNM8102。二、菌株JNM8102的鉴定，鉴定主要项目为：菌种特性、分子鉴定及其稳定性。（1）菌株JNM8102的特性鉴定。菌株JNM8102在LB培养基上30培养2d后菌落近圆形，表面光滑湿润凸起，边缘不规则，乳白色或淡黄色，不产色素；通过镜检观察（图1），菌体呈杆状，有芽孢，能运动，革兰氏阳性；生理生化指标见表1。（2）菌株JNM8102的分子鉴定。经DNA提取、PCR扩增和测序获得的16SrRNA基因序列长度为1361bp，在GenBank上进行BLAST比对，得出该菌株与Bacillusaryabhattai（EF114313）碱基相似性达99%，结合形态学及生理生化指标，将JNM8102菌株鉴定为Bacillusaryabhattai。16SrRNA序列信息见SEQ.NO.1。基于16SrRNA序列的系统发育树见图2。SEQ.NO.1cgtta本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株阿氏芽孢杆菌JNM8102，其特征在于，该菌株已于2019年9月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为阿氏芽孢杆菌（Bacillusaryabhattai），保藏编号为：CGMCC No.18498，保藏地址为中国北京。/n

【技术特征摘要】
1.一株阿氏芽孢杆菌JNM8102，其特征在于，该菌株已于2019年9月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为阿氏芽孢杆菌（Bacillusaryabhattai），保藏编号为：CGMCCNo.18498，保藏地址为中国北京。


2.根据权利要求1所述的阿氏芽孢杆菌JNM8102，其特征在于，所述菌株16SrRNA基因序列如SEQ.NO.1所示。


3.权利要求1所述阿氏芽孢杆菌JNM8102在西洋参病害防治中的应用。


4.一种生物防治制剂，其特征在于，包括权利要求1所述的阿氏芽孢杆菌JNM8102。


5.一种生物防治制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）菌株活化：挑取菌种划线接种至固体斜面培养基，于恒温培养箱30～37℃培养18～24h，待斜面长满菌落用于转接液体种子；
（2）液体种子制备：挑取活化菌株接种于装有种子培养基的容器中，八层纱布封口，温度为30~37℃，160～220r/min的摇床振荡培养14～28h，长出大量菌体细胞，得液体种子；
（3）液体发酵：按体积比5～20%接种量向发酵培养基接入...

【专利技术属性】
技术研发人员：于馨，陈国忠，张兴晓，冯志彬，姜琳琳，朱洪伟，张建龙，
申请(专利权)人：鲁东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37