对白细胞进行分类的试剂及方法技术

本发明专利技术公开了一种用于对白细胞进行四分类的试剂，所述试剂包括：ａ．能够溶解红细胞，且使白细胞的细胞膜部分损伤的至少一种表面活性剂；ｂ．能够与白细胞内阳离子结合，使白细胞之间产生形态差异的至少一种带阴离子基团的有机化合物；ｃ．能够将ｐＨ值调整在２～８范围内的缓冲剂。本发明专利技术还公开了用上述试剂进行细胞四分类的方法。利用本发明专利技术的试剂和方法进行白细胞的四分类时，反应可以在酸性到弱碱性ｐＨ条件下进行，温度以及主要成分表面活性剂的种类都具有很宽的选择范围，从而使本发明专利技术的应用范围得到极大的拓宽，与现有技术相比有了很大的进步。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞分类所用的试剂及分类方法，特别是涉及一种对血液中的白细胞进行四分类时所用的试剂及分类方法。
技术介绍
在临床检查领域中，用患者的全血对白细胞进行分类计数工作，在诊断各种疾病时是极其常见并且非常重要的。迄今为止，用于白细胞分类的装置及方法的专利发表了许多。其中，中国专利CN95115317.X公开了一种通过两种试剂完成白细胞的五分类的方法。该两种试剂除都含有非离子表面活性剂和缓冲剂外，第一试剂至少含一种离子表面活性剂和一种带阴离子的有机化合物，将血细胞分成淋巴细胞、单核细胞、嗜酸细胞以及嗜碱细胞加中性粒细胞四类，第二试剂至少含一种离子表面活性剂，将血细胞分成嗜碱细胞和其他细胞类群。该方法通过综合两种结果将白细胞五分类。检测系统为激光散射法。美国专利5,618,733是一篇白细胞五分类试剂专利，通过两种试剂完成白细胞的五分类，这两种试剂除都含有非离子表面活性剂和缓冲剂外，第一试剂至少含一种带阴离子的有机化合物，将血细胞分成淋巴细胞、单核细胞、嗜酸细胞和嗜碱细胞加中性粒细胞四类，第二试剂至少含一种离子表面活性剂，可以是阳离子或两性表面活性剂中一种，将血细胞分成嗜碱细胞和其他细胞类群，综合两种结果将白细胞五分类。美国专利5,389,549是一篇白细胞五分类和计数试剂专利，通过两种试剂，第一试剂为稀释血样的高渗溶液，第二试剂为含阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂的溶液，检测系统是射频和直流法。美国专利5,538,893是一篇白细胞五分类试剂专利，试剂至少含一种阳离子表面活性剂和一种非离子表面活性剂，检测系统是光散射和电阻法。申请号为88101677、审定号为CN1018586B的中国专利是通过一种pH 2-4的酸性溶解剂对红细胞快速溶解和白细胞保持完整后加入抑制剂对白细胞进行分类的方法，其检测系统可以使用光散射也可以使用射频/直流法。美国专利5,155,044是一篇白细胞五分类试剂系统专利，由溶血剂和稀释液组成，溶血剂由两种试剂组成，第一试剂含各种酸及皂苷，可以溶解红细胞，同时白细胞不变；第二试剂为碱性抑制剂，反应终点PH为6-7.5。美国专利5,731,206是一篇白细胞五分类方法和试剂系统专利，溶血剂由两种试剂组成，第一试剂含羧酸和磺酸的衍生物及皂苷，PH为2.6-4.0，第二试剂为碱性抑制剂。反应终点PH为6-7.5。美国专利5,817,518是一篇白细胞五分类方法和试剂系统专利，溶血剂由两种试剂组成，第一试剂含烷基磺酸的碱金属盐类、有机酸、无机酸或其混合物及非离子表面活性剂。PH1.4-3.6。第二试剂含聚氧乙烯或聚氧丙烯的共聚物类表面活性剂、十二烷基磺酸钠的高渗碱性溶液。检测方法为直流阻抗和射频法。美国专利5,510,267是一篇白细胞五分类方法和试剂专利，溶血剂含2-苯氧基乙醇、非离子表面活性剂及缓冲液。检测系统为四角度激光散射法。以上现有技术中的分类试剂及方法中，大部分对pH值有特定的要求，而且pH值适用范围都只包含一较窄的范围。而在中国专利CN95115317.X、美国专利5,618,733、美国专利5,389,549、美国专利5,538,893中，分类试剂都必须包含非离子表面活性剂，材料的选用范围较窄，同时pH值也有一定的限制，比如，中国专利CN95115317.X中pH值要求在5-11之间。这些都限制了上述技术的应用范围。另外，申请号88101677、审定号为CN1018586B的中国专利中提到的分类技术，其最适反应条件为常温，但随着环境温度发生变化，很难保证处于25度恒温状态，所以测量结果随着温度变化会产生波动，降低了结果的准确性。在此方法基础上，如果为了消除温度对反应的影响，需要增加恒温装置，但为了控制在25度则不仅需要加热装置，同时需要配备制冷装置，这样大大提高了仪器成本。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对以上现有技术的不足，提供一种能在酸性到弱碱性的pH范围及较宽温度范围内应用，且主要成分具有较宽选择范围的白细胞分类用的试剂及方法。为实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案本专利技术公开了一种用于对白细胞进行分类的试剂，所述分类是将白细胞分成与淋巴细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞分别对应的3个集团，以及与中性粒细胞和嗜碱粒细胞相对应的1个集团共计4个集团，所述试剂包括a.能够溶解红细胞，且使白细胞的细胞膜部分损伤的至少一种表面活性剂，所述至少一种表面活性剂是指选自非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂及两性表面活性剂中的一种或几种的组合，但不包括阳离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的组合，b.能够与白细胞内阳离子结合，使白细胞之间产生形态差异的至少一种带阴离子基团的有机化合物，c.能够将pH值调整在2～8范围内的缓冲剂；并且当所述至少一种表面活性剂为阳离子表面活性剂与非离子表面活性剂的组合，或者为阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的组合时，所述缓冲剂的pH范围为2～4.5。优选的，所述试剂进一步包括作为助溶剂的醇类。在本专利技术优选的实施方案中，所述非离子表面活性剂为具有式I所示结构的非离子表面活性剂，R1-R2-(CH2CH2O)n-HI其中，R1为C原子数8到23的烷基或链烯基，R2为-O-或-COO-，n为8-30的整数。所述阳离子表面活性剂为具有式II所示结构的季铵盐型阳离子表面活性剂， 其中R3为C原子数6-14的烷基或链烯基；R4及R5为原子数1-4的烷基或链烯基；R6为C原子数为1-4的烷基或链烯基或苄基；X为卤素原子。所述阴离子表面活性剂为十二烷基磺酸钠，或者是具有式III所示结构的阴离子表面活性剂，R7-R8-(CH2CH2O)n-Y III其中，R7为C原子数8到22的烷基、链烯基或炔基，R8为-O-或-COO-，n为8-30的整数，Y为-SO3Na，-COONa，-OSO3Na，或-ONa。所述两性表面活性剂为具有式IV所示结构的两性表面活性剂， 其中，R9为C原子数6-14的烷基或链烯基；R10及R11为原子数1-4的烷基或链烯基。所述带阴离子基团的有机化合物为酸性有机色素。本专利技术还公开了一种对白细胞进行分类的方法，所述方法包括步骤，将上述的试剂加入到全血样本中，使白细胞分成与淋巴细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞分别对应的3个集团以及与中性粒细胞和嗜碱粒细胞相对应的1个集团共计4个集团，然后通过测定细胞大小和形态信息对所分成的四个集团进行分类计数。所述分类过程中的反应温度为10～40℃，优选的反应温度为35℃。所述测定细胞大小信息利用激光散射法采用低角度散射光完成，测定角度为2-6度；所述测定细胞形态信息利用激光散射法采用高角度散射光完成，测定角度为8-20度。由于采用了以上的方案，使本专利技术具备的有益效果在于利用本专利技术的试剂和方法进行白细胞的四分类，相比较现有技术，能够在酸性到弱碱性的pH条件下进行，而且该pH值范围不会对结果造成不良影响，从而扩充了本专利技术的试剂及方法的使用条件。另外，本专利技术的试剂中所用的主要成份表面活性剂，具有非常宽的选择范围，阳离子、阴离子、非离子、两性的表面活性剂以及它们的组合(除了阳离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的组合)都可用于本专利技术，并且选用以上各种表面活性剂，都能实现白细胞的四分类，并保证结果的准确性。此外，利用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于对白细胞进行分类的试剂，所述分类是将白细胞分成与淋巴细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞分别对应的３个集团，以及与中性粒细胞和嗜碱粒细胞相对应的１个集团共计４个集团，其特征在于，所述试剂包括：ａ．能够溶解红细胞，且使白细胞的细胞膜部分损伤的至少一种表面活性剂，所述至少一种表面活性剂是指选自非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂及两性表面活性剂中的一种或几种的组合，但不包括阳离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的组合，ｂ．能够与白细胞内阳离子结合，使白细胞之间产生形态差异的至少一种带阴离子基团的有机化合物，ｃ．能够将ｐＨ值调整在２～８范围内的缓冲剂；并且当所述至少一种表面活性剂为阳离子表面活性剂与非离子表面活性剂的组合，或者为阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的组合时，所述缓冲剂的ｐＨ范围为２～４．５。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许文娟，张利娜，刘兵，
申请(专利权)人：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]