电化学检测法制造技术

一种测定流体样品中分析物存在或含量的方法，其包含：（ａ）将一种流体样品与一种包含多个可裂解物质分子的结合试剂接触并且其中所述可裂解物质裂解时能够用电化学的方法测出；（ｂ）把形成的所有的结合试剂－分析物复合体与未结合的结合试剂分离；（ｃ）由固定化的结合试剂－分析物复合体中裂解出可裂解物质；和（ｄ）用电化学的方法检测裂解的片断。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种测定流体样品中分析物的存在或含量的方法、该方法中使用的结合试剂、该结合试剂用于免疫分析法的用途以及一种用于测量样品中分析物的含量或存在的试剂盒。
技术介绍
已经知道，用于测定流体样品中分析物的存在或含量的免疫分析法依赖于与所关注的分析物结合的结合试剂的使用。在该类装置中形成结合试剂-分析物复合体然后在捕获点(capture site)被固定，然后测定分析物的存在或含量。这类测定可以通过各种方法实现，如荧光分析法。然而，这类测定存在的一个问题是在分析物浓度较低时有时不是很有效。这是因为结合试剂-分析物复合体的浓度也会较低，并且测定较低浓度的该物质的存在和/或含量可能是困难的。如果能够开发一种适于测定流体样品中分析物的存在或含量的方法，该方法即使在分析物浓度较低的情况下也有效，这将是有益的。
技术实现思路
本专利技术人已开发出了一种新的用于测定流体样品中分析物的存在或含量的方法，该方法即使在分析物的浓度水平较低时也能够准确地检测到分析物。 因此，本专利技术提供了一种测定流体样品中分析物的存在或含量的方法，包含 (a)将一种流体样品与一种包含多个可裂解物质分子(cleavable species)的结合试剂接触，其中所述可裂解物质分子当被裂解的时候能够用电化学方法测出； (b)将形成的所有的结合试剂-分析物复合体与未结合的结合试剂分离； (c)从固定化的结合试剂-分析物复合体上裂解该可裂解物质；和 (d)用电化学的方法检测该裂解的物质。 本专利技术也提供一种本专利技术的结合试剂。 本专利技术进一步提供本专利技术的结合试剂用于免疫分析法的用途。 本专利技术还提供一种用于测量样品中分析物的含量或存在的试剂盒，包含； (a)一种本专利技术的结合试剂， (b)一种捕获相(capture phase)，该捕获相包含一种含有一种试剂的载体，所述试剂能够结合或连接到一种结合试剂-分析物复合体上，和； (c)一种能检测出裂解时的可裂解物质的电极，以提供待测分析物存在或含量的指示。 所有形成的结合试剂-分析物复合体与未结合的结合试剂的分离可以通过结合试剂-分析物复合体的固定化来实现。 附图说明 图1电化学测量UV裂解的电化学报道基团的一般性方案。 图2已经报道过的检测体系的概括。20μm和400nm的珠子符合图1中规定的要求。 图3在各种照射时间下，UV可裂解的二茂铁分子9(浓度2.18mM)进行光分解的情况的TLC。 图4试剂和条件a)0.4μm乙醛修饰的胶乳颗粒、氨基葡聚糖、NaBH3CN(1M)、MES(50mM，pH6.0)；b)GMBS、DMF、PBS(pH7.0)；c)脱保护9、DMF、PBS(pH7.0)。 图5 CV’s照射前(重复2次，用 和.....表示)。照射5分钟后(重复2次，用实线和---表示)。将17μl的样品施加于丝网印刷电极(screen printed electrode)(碳工作电极和对电极、银/氯化银参比电极)。 图6 CV’s照射前(重复2次，用 和.....表示)。照射5分钟后(重复2次，用实线和---表示)。将17μl的样品施加于丝网印刷电极(碳工作电极和对电极、银/氯化银参比电极)。 图7CV’s照射前(重复2次，用 和.....表示)。照射5分钟后(重复2次，用实线和---表示)。将17μl的样品施加于丝网印刷电极(碳工作电极和对电极、银/氯化银参比电极)。 图8计时电流法测量可变的珠子浓度(每17μl中1.16E+08、46600000、23300000、11650000、5825000、2912500个珠子)。 图9计时电流法扫描可变的珠子浓度。每种浓度都已经进行PBS背景校正，即使用Autolab控制软件中的消减磁盘文件(subtract diskfile)/编辑数据(edit data)选项把PBS背景扫描从每种浓度中扣除。 图10计时电流法测量珠子的最低浓度(每17μL 2912500个珠子)(实线)和PBS对照测量(虚线)。注意电流升高和降低表明该UV裂解的二茂铁分子的消耗。 图11计时电流法测量已知浓度的UV裂解的二茂铁分子。测量用与图8中概括的研究中相同的方法。 图12 UV裂解的二茂铁分子的标定曲线。数值(i/A)来自图11中的200秒处的点。 图13颗粒数量与i/A(裂解的FcPEG)的关系的曲线。数值来自图9中的200秒处的点。 图14 FcPEG(裂解的)与颗粒数量的关系的曲线。用图12将图3.12中的数值(i/A)转换成FcPEG浓度(μM)。 图15计时电流法测量UV裂解的二茂铁分子，将用38mV(电压输入LED)对6μL样品在一个毛细管填充电极(capillary fill electrode)装置中的测量重复2次，用 和.....表示。线---代表的内容如前所述但电压为22mV。实线如前所述代表PBS但电压为38mV。 图16与图15所示相同但重新标度。 图17试剂和条件a)0.4μm乙醛修饰的胶乳颗粒、氨基葡聚糖、NaBH3CN(1M)、MES(50mM，pH6.0)；b)GMBS、DMF、PBS(pH7.0)；c)修饰的3299、PBS(pH7.0)；d)脱保护的9、DMF、PBS(pH7.0) 图18试剂和条件a)0.4μm乙醛修饰的胶乳颗粒、氨基葡聚糖、NaBH3CN(1M)、MES(50mM，pH6.0)；b)GMBS、DMF、PBS(pH7.0)；c)脱保护的9、DMF、PBS(pH7.0)、SHPEG4CO2H；d)氨基葡聚糖、EDCI、NHS、MES(50mM，pH6.0)；e)GMBS、DMF、PBS(pH7.0)；f)修饰的3299、PBS(pH7.0) 图19计时电流法测量具有抗体和UV可裂解连接体的400nmTRF珠子。将17μL的溶液施用到电极上(碳工作电极、对电极和银/氯化银参比电极)。线....表示当先偶联抗体再偶联可裂解连接体时得到的结果。实线表示当先偶联可裂解连接体再偶联抗体时得到的结果。 图20计时电流法测量具有抗体和UV可裂解连接物的400nmTRF珠子。将17μL的溶液施用到电极上(碳工作电极、对电极和银/氯化银参比电极)。实线表示具有抗体和UV可裂解连接物的400nmTRF珠子、线---表示1/2稀释的具有抗体和UV可裂解连接物的400nmTRF珠子，并且线…表示PBS对照。 图21重新标度的计时电流法测量具有抗体和UV可裂解连接物的400nm TRF珠子(源于图19)。该LED输入电压在504秒的时候从22mV转换成38mV，速率的变化可被清晰的观察到。 图22试剂和条件a)F108-PMPI、去离子H2O；b)修饰的3468、PBS(pH7.0)。 图23计时电流法测量0(实线)和400(虚线)mIU hCG标准液。在使该溶液流过微流体IMF3装置前进行湿的hCG分析，在所述湿的hCG分析中包括将hCG标准液、400nm 3299/UV可裂解二茂铁化合物(UVCFC)和20μm 3468胶乳珠子预混大约30分钟。 图24与图相同但重新标度以突出0和400mIU hCG测量之间的差异。 图25电化学二茂铁本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定流体样品中分析物存在或含量的方法，其包含：　　　　（ａ）将一种流体样品与一种包含多个可裂解物质分子的结合试剂接触并且其中所述物质当被裂解的时候能够用电化学的方法测出；　　　　（ｂ）将形成的所有的结合试剂－分析物复合体与未结合的结合试剂分离；　　　　（ｃ）从固定化的结合试剂－分析物复合体上裂解该可裂解物质；和　　　　（ｄ）用电化学的方法检测该裂解的物质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：DE威廉斯，P洛，CJ斯莱文，AC郝维，SJ卡莱尔，A汤姆森，
申请(专利权)人：因韦尔尼斯医药瑞士股份有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]