一种基因免疫制备人类I型胸苷激酶单克隆抗体的新方法技术

本发明专利技术涉及一种基因免疫制备人类Ⅰ型胸苷激酶单克隆抗体的新方法。其具体方法是：首先，从经过氨基喋呤处理的Ｈｅｌａ细胞中提取ＲＮＡ，经逆转录ＰＣＲ扩增出ＴＫ１　　ｃＤＮＡ，ＴＡ克隆后进行ＤＮＡ序列分析，确定正确的ＴＫ１基因序列，然后亚克隆入ｐＳｅｃＴａｇ２／ＨｙｇｒｏＢ载体的ＨｉｎｄⅢ和ＸｈｏⅠ位点之间（ｐＳｅｃＴａｇ／ＴＫ１），插入片段表达的蛋白质可以从真核细胞中分泌到胞外。直接用ｐＳｅｃＴａｇ／ＴＫ１重组质粒ＤＮＡ免疫小鼠，用骨髓瘤细胞和脾细胞融合制备杂交瘤，筛选出产抗ＴＫ１的单克隆抗体的杂交瘤；通过小鼠腹水大量制备ＴＫ１的单克隆抗体。最后，将收集的小鼠腹水高速冷冻离心，其上清液用正辛酸一硫酸胺法分别进行提取，并用蛋白Ｇ柱亲和层析法纯化，即可得到可用于检测临床样品中ＴＫ１标志物的ＴＫ１单克隆抗体。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种基因免疫制备人类Ⅰ型胸苷激酶单克隆抗体的新方法，其特征在于：　　　　将氨基喋呤处理的Ｈｅｌａ细胞ＲＮＡ作为原始模板，其中ＲＮＡ经逆转录ＰＣＲ获得ＴＫ１　　ｃＤＮＡ，其中ＴＫ１基因序列是用ＴＫ１　　ＴＡ克隆双向测序获得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：丁克祥，郑永晨，刘卫国，费定宇，丁宇，
申请(专利权)人：丁克祥，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]