用功能糖芯片及飞行质谱仪分析糖结合蛋白的方法技术

一种用功能糖芯片及飞行质谱仪分析糖结合蛋白的方法，其首先配制偶联剂溶液，孵育固相载体，清洗、干燥后，将还原糖用水溶解，调至所需的浓度，经点样、温育，得功能糖芯片。将生物样品直接加在功能糖芯片上，进行孵育、去除杂质、成形晶体、解离晶体，用飞行质谱仪检测荷电离子在真空电场中飞行的时间，得到蛋白质图谱信息，直观显示被测生物样品中分子量、丰度等蛋白质信息，鉴定蛋白质差异表达。将被测生物样品的蛋白质图谱信息与样本图谱信息进行比照，得到差异表达的糖结合蛋白质信息。本发明专利技术解决了背景技术中检测通量低，检测步骤繁琐，周期长的技术问题。本发明专利技术操作简便，灵敏度高，重复性好，适合于医学临床的快速分析应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分析糖结合蛋白的方法，具体是一种采用功能糖芯片，结合表 面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术来对糖结合蛋白进行检测和鉴定的方法。技术背景目前，蛋白质组学的分析检测所涉及的技术主要有二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)、电喷雾质谱(ESI-MS)、基质辅助激光解吸离子飞行时间质谱 (MALDI-TOF-MS)及近期出现的蛋白质芯片联用飞行时间质谱仪技术。飞行时间质 谱仪是基于表面增强激光解析电离光谱技术(surface-enhanced laser desorption ionization spectrometry, SELDI)发展起来的，其基本原理是2002年诺贝尔化学奖 获得者田中耕-一于1993年提出的。同年，美国的Bill Hutchens和Tai-Yung Yip提 出了改良的表面增强激光解析电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption ionization time of flight, SELDI-TOF-MS)。以质谱技术为基础的直接检测法，是将吸附在芯片表面的靶蛋白离子化，使之 能在电场力的作用下本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用功能糖芯片及飞行质谱仪分析糖结合蛋白的方法，其特征在于，该方法的实现步骤包括：　　　　（１）制备功能糖芯片：　　　　（１．１）配制偶联剂溶液、孵育固相载体：将偶联剂溶于有机溶剂中，配制成１０～５０ｍｏｌ／Ｌ的偶联剂有机溶液；将衍生化的固相载体浸入偶联剂有机溶液中，室温下孵育３小时；　　　　（１．２）清洗：分别用溶解偶联剂的有机溶剂和无水乙醇将固相载体清洗二次；　　　　（１．３）干燥：将固相载体于室温干燥；　　　　（１．４）将还原糖用水溶解，调至所需的浓度；　　　　（１．５）点样：加入ｐＨ３～６的酸性点样缓冲液，对固相载体进行点样；　　　　（１．６）温育：于２５～６０℃温育１２小时，得功能...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李铮，陈超，南刚，杨刚龙，任挺立，
申请(专利权)人：陕西北美基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]