风疹病毒IgM抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术运用化学发光免疫分析与捕获法相结合，提供一种风疹ＩｇＭ抗体测定试剂盒及其制备方法，试剂盒由阴、阳性对照，抗人ＩｇＭμ链包被微孔板，中和抗原，样品稀释液，浓缩洗涤液，碱性磷酸酶标记单抗以及化学发光底物组成。本发明专利技术试剂盒制备方法包括：１）配制阴、阳性对照；２）以抗人ＩｇＭμ链包被微孔板；３）配制中和抗原；４）配制样品稀释液；５）配制浓缩洗涤液；６）碱性磷酸酶标记风疹单抗；７）配制化学发光底物；８）分装上述各组分及组装为成品。本发明专利技术具有灵敏度高，特异性强等优点，为血清学检测、流行病学调查及临床诊断提供了可靠的科学诊断依据，有助于优生优育。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫分析医学领域，具体地，本专利技术利用化学发光免疫分析与捕获法 原理相结合，提供了一种风渗病毒IgM抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方 法。
技术介绍
风疹病毒属于披膜病毒科，具单股正链RNA,直径为60nm,仅有一个血清型。风 渗病毒的抗原结构相当稳定，是一种最危险的致畸因素。风渗病毒与巨细胞病毒、弓 形虫病毒、疱渗病毒1型和2型共同命名为T0RCH。这五大病毒的共同危害是造成流 产、早产、死胎、胎儿畸形、残疾儿。妊娠期妇女感染风渗病会造成胎儿损伤，如新 生儿畸形、肝脾肿大、神经发育障碍、先天性心脏病等。侥幸存活的新生儿常可发生 生长发育迟緩、白内障、神经性耳耷、先天性心脏病、脑膜脑炎、巨细胞肝炎、溶血 性贫血、视力、听力障碍等。风渗是由风渗病毒引起的。80年代以来日本、美国、印度、墨西哥、澳大利亚 等均有较大的流行。孕妇属易感人群， 一旦感染便可发生子宫内感染致胎儿畸形及严 重后遗症，流产及死产率较正常妊娠高2倍-4倍。妊娠早期感染者致畸率为50% , 中期为25%，末期为15%。因此，早期妊娠妇女若确诊为风疹病毒感染时应行人工 流产终止妊娠。风疹最大的危害是母亲在怀孕早期特别是头三个月感染风渗，造成流 产、死产和新生儿先天性风渗综合征。风渗在我国已列入法定报告的传染病。风疹病毒IgM主要用于诊断病毒的急性感染。成人及儿童感染风渗毒会引起皮渗， 淋巴结肿大的症状。感染风疹早期产生抗体为IgM抗体，因此，早期妊娠妇女风渗 IgM抗体阳性时应行人工流产终止妊娠。检测风渗IgM抗体至关重要，而孕妇属易感 人群，孕期检查主要检查孕妇血中的IgM抗体。故风渗抗体检查被列入婚前检查常规项目。先天性风渗患儿和初次感染风疹者体内特异性IgM抗体滴度高，持续时间较长， 风發再次感染者体内也能查到IgM抗体，但滴度低，持续时间较短。因此，IgM抗体 的检测有助于诊断早期风渗病毒的感染。当前检测风渗病毒的诊断技术有金标、ELISA、 PCR等方法。金标方法操作简单、 快速，但肉眼观察有一定误差，准确率低；PCR具有灵敏度极高的特点，直接检测病 原体基因，但操作繁瑣、需要先进的仪器设备和较高的费用，不适用于基层推广；而 ELISA检测，目前临床应用普遍，但大多为间接法测定IgM抗体，受血清标本中IgG、 RF的干扰，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理，这样不但测定较为繁瑣，而 且影响测定的特异性和灵敏度，容易导致假阳性或假阴性结果。以上检测技术，均有 其特定的优缺点，而本专利技术利用捕获法检测IgM抗体，克服了血清标本中IgG、 RF 的干扰，提高了灵敏度与特异性，使操作更简便快速。化学发光免疫分析法是目前发展和推广应用最快的免疫分析方法，也是目前较先 进的标记免疫测定技术，具有灵敏度高、特异性强、试剂价格低廉、试剂稳定且有效 期长、方法稳定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高等优点，正逐渐替代传统 的生物检测技术。本专利技术的试剂盒采用微孔板化学发光免疫分析技术，既利用了化学发光免疫分析 既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的测量系统，可实现大 批量快速检测，为临床诊断和科研工作提供一种非常有价值的检测手段。
技术实现思路
本专利技术克服了现有技术的不足，将化学发光免疫分析与捕获法原理有效地结合， 制备出一种灵敏高、特异性好、简便快速地检测风療IgM抗体的试剂盒，为我国风渗 IgM检测提供一种新型的试剂盒及制备方法。本专利技术消除了间接法检测血清标本中IgG、 RF的干扰，另外目前临床应用普遍的 ELISA试剂盒中样品一般为1: 100或者1: 1000稀释，操作繁瑣，而本专利技术样品为1:IO稀释，大大节约了时间与成本，操作更简便，可以较早地检测出病人急性感染期风渗IgM抗体，特别适合广大的中小医院推广使用。本专利技术的目的是提供一种检测风疹IgM抗体的试剂盒及其制备方法。 本专利技术的试剂盒包括阴、阳性对照，抗人IgMju链包被的微孔板，中和抗原，碱性磷酸酶标记风渗单抗，样品稀释液，浓缩洗涤液及化学发光底物。 本专利技术试剂盒是通过以下方案实现的1) 以抗人IgM p链包被微孔板将0. 02M pH值为4. 2的PB緩冲液与适当浓度 的风渗抗人IgMu链混合，并将混合液负载于固相载体上，封闭，抽湿干燥后用铝箔 袋密封。2) 制备阴、阳性对照将正常人血清用2%BSA的PBS緩冲液稀释后制成阴性对 照；将风渗IgM阳性血清经2%BSA的PBS緩冲液按一定比例稀释后制成阳性对照。3) 配制中和抗原用稀释液将纯化的风渗抗原按一定浓度稀释后配制而成。4 )以碱性磷酸酶标记风渗单抗用戊二醛交联法将风渗单克隆抗体与碱性磷酸酶 偶联。5) 配制样品稀释液:样品稀释液为含有0. 5%BSA、 0. 1%甘油、0. 1%吐温-20、 0. 05% 二巯基乙醇、0. 1。/。Proclin300的0. 02M pH值为7. 4的磷酸盐緩沖液。6) 配制浓缩洗涤液浓缩洗涤液为20倍浓缩的Tris-HCl緩冲液，其包含 2.4%Tris、 ,aCl、 0,躯l、 1.5%HC1、 0. "/。Proclin300， pH值为7. 4。7) 配制化学发光底物化学发光底物液为AMPPD溶液，其包含2. 4%Tris、16%NaCl、 0. 45KC1、 1. 5節、20%AMPPD、 0. l°/ Procl in300, pH值为8. 0 ~ 9. 0。8) 将上述各组分分装后组装为试剂盒。本专利技术试剂盒采用捕获法检测原理，克服了间接法测定IgM抗体时血清中IgG、 RF的干扰，直接捕获血清中特异性IgM抗体，继而加入中和抗原与酶标记的特异性 单克隆抗体，再与化学发光底物作用，测值即与标本中的风渗IgM抗体呈正相关。此法常用于风渗病毒急性感染的早期诊断。本试剂盒既具有化学发光免疫技术的高灵敏 性，又采用了捕获法不易受干扰的优点，灵敏度、特异性、准确性均有明显的提高。 具体实施例方式实施例1制备本专利技术的风渗病毒IgM抗体化学发光免疫分析测定试剂盒本专利技术的风渗病毒IgM抗体诊断试剂盒包括抗人IgM .u链包被微孔板(48孔或96孔)，阴、阳性对照(各1瓶)，中和抗原 (1瓶)，碱性磷酸酶标记单抗(1瓶)，样品稀释液(1瓶)，浓缩洗涤液(1瓶)及 化学发光底物(1瓶)。一、 风疹抗人IgM n链包被微孔板的制备(1) 将抗人IgMia链加至0. 02M pH值为4. 2的PB缓冲液中混匀制成浓度为1: 900的包被液，每孔100uL加至微孔板内，37。C过夜；具体地，所述PB緩冲液配制方法为磷酸二氢钠 0. 78g纯化水定容至1000mL，用NaOH调pH至4. 2(2) 甩干包被液后，每孔加入封闭液200uL， 4'C过夜，甩掉封闭液，拍干；室 温除湿干燥18-24小时，然后用铝箔袋密封。二、 中和抗原的制备 将纯化的风渗病毒抗原，用稀释液按l: 800稀释。 具体地，所述稀释液配制方法为BSA 2g TritonX-lOO lmL Proclin300 lmL 指示剂 0. lmL0. 01M的磷酸盐緩冲液定容至lOOOmL，调pH至7. 2三、碱性磷酸酶标记风渗单抗的制备用戊二醛交联法将风渗特异性单克隆抗体与碱性磷酸酶偶联在一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种风疹ＩｇＭ抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，包括：阴、阳性对照，抗人ＩｇＭμ链包被微孔板，中和抗原，样品稀释液，浓缩洗涤液，碱性磷酸酶标记单抗以及化学发光底物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵娟娟，应希堂，宋胜利，胡国茂，唐宝军，张坤，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]