用于将药剂递送至肌肉的方法技术

本发明专利技术提供用于使肌组织、特别是由骨骼肌或心肌构成的肌组织高效地摄取药剂的技术，该药剂是应在肌组织中发挥功能的药剂，并且在给药至生物体内时不能保持原样地被充分摄取至肌组织。一种结合体，其为抗人转铁蛋白受体抗体与药剂的结合体，该药剂为应在肌组织中发挥功能的具有生理活性的药剂，例如酸性α‑葡糖苷酶、α‑半乳糖苷酶A等溶酶体酶。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于将药剂递送至肌肉的方法
本专利技术涉及应在肌肉中发挥生理活性的药剂向肌肉的输送，详细而言，涉及使所期望的药剂与抗转铁蛋白抗体结合而成的结合体、以及通过给药该结合体而在肌肉中发挥该所期望的药剂的生理活性的方法。
技术介绍
近年来，针对因溶酶体酶的功能缺陷而发病的溶酶体病，建立了酶补充疗法，患者的生命预后和生活质量(QOL)提高。作为在酶补充疗法中使用的含有溶酶体酶作为有效成分的药品，正在销售的有：以人酸性α-葡糖苷酶(hGAA)作为主剂的糖原贮积病Ⅱ型(庞贝氏症)的治疗药、以人艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(hI2S)作为主剂的粘多糖贮积症Ⅱ型(亨特氏病)的治疗药、以人α-半乳糖苷酶A(hα-GalA)作为主剂的法布里病的治疗药、以人葡糖脑苷脂酶作为主剂的戈谢病的治疗药等。在酶补充疗法中给药于患者的溶酶体酶被摄取到细胞内而发挥其功能。例如，人酸性α-葡糖苷酶(hGAA)、人艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(hI2S)和人α-半乳糖苷酶A(hα-GalA)被含有甘露糖-6-磷酸(M6P)的N型糖链修饰，通过M6P与M6P受体的结合被摄取到细胞内。另外，作为戈谢病治疗药的人葡糖脑苷脂酶的还原末端被作为甘露糖的N型糖链修饰，通过甘露糖与甘露糖受体被摄取到作为标靶的巨噬细胞等网状内皮系统的细胞中。以M6P与M6P受体的结合所介导的向细胞内的摄取来看，含有2个M6P的二磷酸(bis-phosphate)型糖链对M6P受体的亲和性比含有1个M6P的单磷酸(mono-phosphate)型高100倍以上，糖链中含有的M6P对溶酶体酶向细胞内的摄取效率有很大影响。酶补充疗法中使用的人溶酶体酶是通过使用基因重组技术将编码人溶酶体酶的基因导入CHO细胞等宿主细胞中进行表达而制造的重组蛋白质。对于以重组蛋白质形式制造的重组人溶酶体酶而言，为了发挥其药效，需要适当进行糖链修饰。即，对于hGAA、hα-GalA和hI2S而言，利用含有甘露糖-6-磷酸的糖链进行修饰在药效发挥的方面是不可或缺的，对于人葡糖脑苷脂酶而言，还原末端由作为甘露糖的糖链适当进行修饰在药效发挥的方面是不可或缺的。在重组人酸性α-葡糖苷酶(rhGAA)的情况下，应发挥药效的主要靶器官为肌肉、特别是骨骼肌。但是，酶补充疗法中使用的rhGAA的糖链中所含的M6P的数量为每1分子平均1个以下，因此糖链多为单磷酸型，由M6P进行的糖链修饰不充分(非专利文献1)。因此，靶器官中的rhGAA的摄取效率低，其每一次的给药量非常大，为20mg/kg。根据患者的症状，给药量可增量至40mg/kg，但即使如此，认为仍无法充分发挥给药的酶的功能。作为使靶器官高效地摄取rhGAA的方法，开发了利用M6P-M6P受体以外的配体-受体系统的方法。例如，已知将作为低密度脂蛋白受体家族(LDL受体)的配体的RAP(受体相关蛋白，receptor-associatedprotein)与hGAA融合而成的融合蛋白在使用培养细胞的实验中以M6P非依赖的方式被摄取到细胞内(非专利文献2)。根据该方法，认为即使是由含有M6P的糖链所进行的修饰不充分的rhGAA，通过RAP与其受体的结合，也能够摄取到细胞内。现有技术文献非专利文献非专利文献1：ZhuY.etal.,BiochemJ.389,619-28(2005)非专利文献2：PrinceWS.etal.,JBiol.Chem.279,35037-46(2004)
技术实现思路
专利技术所要解决的问题本专利技术的目的在于提供在将应在肌肉中发挥功能的药剂给药至生物体内时使肌肉高效地进行摄取的方法及其相关技术。用于解决问题的方法在面向上述目的的研究中，本专利技术人反复进行了深入研究，结果发现，对于应在肌肉中发挥药效、但无法保持原样地被充分输送至肌肉的重组人酸性α-葡糖苷酶而言，通过制成与抗人转铁蛋白受体的结合体，可被高效地输送至肌肉，从而完成了本专利技术。即，本专利技术包括下述专利技术。1.一种结合体，其为抗人转铁蛋白受体抗体与药剂的结合体，该药剂为应在肌肉中发挥功能的具有生理活性的药剂。2.如上述1所述的结合体，其中，该抗人转铁蛋白受体抗体为Fab抗体、F(ab’)2抗体或F(ab’)抗体。3.如上述1所述的结合体，其中，该抗人转铁蛋白受体抗体为选自由scFab、scF(ab’)、scF(ab’)2和scFv组成的组中的单链抗体。4.如上述3所述的结合体，其中，该单链抗体是通过接头序列将该抗人转铁蛋白受体抗体的轻链与重链结合而成的单链抗体。5.如上述4所述的结合体，其中，通过该接头序列使该抗人转铁蛋白受体抗体的轻链与重链在该轻链的C末端侧结合。6.如上述4所述的结合体，其中，通过该接头序列使该抗人转铁蛋白受体抗体的轻链与重链在该重链的C末端侧结合。7.如上述4～6中任一项所述的结合体，其中，该接头序列由8～50个氨基酸残基构成。8.如上述7所述的结合体，其中，该接头序列包含选自由氨基酸序列(GlySer)、氨基酸序列(GlyGlySer)、氨基酸序列(GlyGlyGly)、序列号3和序列号4所示的氨基酸序列组成的组中的氨基酸序列。9.如上述8所述的结合体，其中，该接头序列由序列号4所示的氨基酸序列接续3次而成的15个氨基酸残基构成。10.如上述1～9中任一项所述的结合体，其中，该抗人转铁蛋白受体抗体在轻链可变区中包含序列号22所示的氨基酸序列，在重链可变区中包含序列号23所示的氨基酸序列。11.如上述10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是与序列号22所示的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列，该重链可变区的氨基酸序列是与序列号23所示的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列。12.如上述10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是与序列号22所示的氨基酸序列具有90％以上的同源性的氨基酸序列，该重链可变区的氨基酸序列是与序列号23所示的氨基酸序列具有90％以上的同源性的氨基酸序列。13.如上述10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是构成序列号22所示的氨基酸序列的1～10个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列。14.如上述10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是构成序列号22所示的氨基酸序列的1～3个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列。15.如上述10所述的结合体，其中，该重链可变区的氨基酸序列是构成序列号23所示的氨基酸序列的1～10个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列。16.如上述10所述的结合体，其中，该重链可变区的氨基酸序列是构成序列号23所示的氨基酸序列的1～3个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列。17.如上述10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是构成序列号22所示的氨基酸序列的1～10个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列，该重链可变区的氨基酸序列是构成序列号23所示的氨基酸序列的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种结合体，其为抗人转铁蛋白受体抗体与药剂的结合体，该药剂为应在肌肉中发挥功能的具有生理活性的药剂。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180205 JP 2018-0186521.一种结合体，其为抗人转铁蛋白受体抗体与药剂的结合体，该药剂为应在肌肉中发挥功能的具有生理活性的药剂。


2.如权利要求1所述的结合体，其中，该抗人转铁蛋白受体抗体为Fab抗体、F(ab’)2抗体或F(ab’)抗体。


3.如权利要求1所述的结合体，其中，该抗人转铁蛋白受体抗体为选自由scFab、scF(ab’)、scF(ab’)2和scFv组成的组中的单链抗体。


4.如权利要求3所述的结合体，其中，该单链抗体是通过接头序列将该抗人转铁蛋白受体抗体的轻链与重链结合而成的单链抗体。


5.如权利要求4所述的结合体，其中，通过该接头序列使该抗人转铁蛋白受体抗体的轻链与重链在该轻链的C末端侧结合。


6.如权利要求4所述的结合体，其中，通过该接头序列使该抗人转铁蛋白受体抗体的轻链与重链在该重链的C末端侧结合。


7.如权利要求4～6中任一项所述的结合体，其中，该接头序列由8～50个氨基酸残基构成。


8.如权利要求7所述的结合体，其中，该接头序列包含选自由氨基酸序列(GlySer)、氨基酸序列(GlyGlySer)、氨基酸序列(GlyGlyGly)、序列号3和序列号4所示的氨基酸序列组成的组中的氨基酸序列。


9.如权利要求8所述的结合体，其中，该接头序列由序列号4所示的氨基酸序列接续3次而成的15个氨基酸残基构成。


10.如权利要求1～9中任一项所述的结合体，其中，该抗人转铁蛋白受体抗体在轻链可变区中包含序列号22所示的氨基酸序列，在重链可变区中包含序列号23所示的氨基酸序列。


11.如权利要求10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是与序列号22所示的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列，该重链可变区的氨基酸序列是与序列号23所示的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列。


12.如权利要求10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是与序列号22所示的氨基酸序列具有90％以上的一致性的氨基酸序列，该重链可变区的氨基酸序列是与序列号23所示的氨基酸序列具有90％以上的一致性的氨基酸序列。


13.如权利要求10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是构成序列号22所示的氨基酸序列的1～10个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列。


14.如权利要求10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是构成序列号22所示的氨基酸序列的1～3个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列。


15.如权利要求10所述的结合体，其中，该重链可变区的氨基酸序列是构成序列号23所示的氨基酸序列的1～10个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列。


16.如权利要求10所述的结合体，其中，该重链可变区的氨基酸序列是构成序列号23所示的氨基酸序列的1～3个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列。


17.如权利要求10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是构成序列号22所示的氨基酸序列的1～10个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列，该重链可变区的氨基酸序列是构成序列号23所示的氨基酸序列的1～10个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列。


18.如权利要求10所述的结合体，其中，该轻链可变区的氨基酸序列是构成序列号22所示的氨基酸序列的1～3个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列，该重链可变区的氨基酸序列是构成序列号23所示的氨基酸序列的1～3个氨基酸被置换为其他氨基酸而得到的氨基酸序列。


19.如权利要求10所述的结合体，其中，该抗人转铁蛋白受体抗体在轻链中包含序列号24所示的氨基酸序列，在重链中包含序列号25所示的氨基酸序列。


20.如权利要求19所述的结合体，其中，该轻链的氨基酸序列是与序列号24所示的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列，该重链的氨基酸序列是与序列号25所示的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列。


21.如权利要求19所述的结合体，其中，该轻链的氨基酸序列是与序列号24所示的氨基酸序列具有90％以上的一致性的氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：高桥健一，园田启之，
申请(专利权)人：JCR制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP