一种蛋白质表达纯化的方法技术

本发明专利技术涉及一种蛋白质表达纯化的方法，首先构建融合蛋白的表达载体：在目的蛋白的一端依次连接第一酶切位点、报告标记和第一纯化标签，另一端依次连接第二酶切位点、第二纯化标签；将该表达载体转入表达菌株进行表达培养，收集培养产物；根据第二纯化标签对产物进行纯化，然后对第一、第二酶切位点进行酶切；将酶切产物分别根据第一纯化标签、第二纯化标签进行纯化，即得到目标蛋白。该表达纯化方法增加了蛋白质的可溶性和产量，使得蛋白质的表达可视化；纯化步骤简单，在未增加纯化的流程的情况下，显著提高了目的蛋白的纯度。

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白质表达纯化的方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种蛋白质表达纯化的方法。
技术介绍
表达外源蛋白的一般策略是将目的基因连接到合适的载体上，然后将载体转入表达菌株中表达目的蛋白，最后将表达菌株进行破碎，富集、纯化需要的目的蛋白。该过程需要解决目的蛋白的表达和纯化两个问题：目的基因在表达菌株中表达足够量的蛋白质；2、选择合适的手段对目的蛋白进行纯化。此外，充足的表达量也有利于蛋白质的纯化。为了后续纯化的方便，技术人员常常利用6×His、MBP等标签来通过亲和层析纯化目的蛋白。但是这些标签往往带来新的问题，如6×His标签由于其特异性不好，往往带来纯化效率低的问题；而MBP-tag过于庞大，可能会影响蛋白的结构功能。除此之外，如何鉴定目的基因是否在表达菌株中表达也是一个问题。通常的手段是将表达菌株破碎后用合适的磁珠吸附、富集之后再通过SDS-PAGE胶来判定目的基因是否表达，而一个表达载体的构建往往不是一蹴而就的，需要不断地优化，这就造成了很多时间的浪费以及试剂的损失。为了解决这个问题，有技术人员提出在目的基因的末端连本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于表达纯化目的蛋白的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括：目的蛋白，于所述目的蛋白的一端依次连接的第一酶切位点、报告标记和第一纯化标签，于所述目的蛋白的另一端依次连接的第二酶切位点、第二纯化标签；/n其中，所述目的蛋白中不含有所述第一酶切位点或第二酶切位点。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于表达纯化目的蛋白的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括：目的蛋白，于所述目的蛋白的一端依次连接的第一酶切位点、报告标记和第一纯化标签，于所述目的蛋白的另一端依次连接的第二酶切位点、第二纯化标签；
其中，所述目的蛋白中不含有所述第一酶切位点或第二酶切位点。


2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述第一酶切位点与第二酶切位点相同，所述第一酶切位点和第二酶切位点选自凝血酶酶切位点、HRV3C酶切位点、TEV酶切位点、肠激酶酶切位点、SUMO蛋白酶酶切位点中的一种。


3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述第一纯化标签选自组氨酸标签、Flag标签、HA标签、SUMO标签中的一种。


4.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述第二纯化标签具有提高所述融合蛋白的表达量和/或可溶性的功能；和/或，
所述第二纯化标签选自麦芽糖结合蛋白标签、谷胱甘肽巯基转移酶标签中的一种或两种连接而成的融合标签。


5.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述报告标记选自氯霉素-乙酰转移酶、β-半乳糖苷转移酶、辣根过氧化物酶、荧光素酶、碱性磷酸酶和荧光蛋白中的一种；
优选地，所述荧光蛋白选自绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、mCherry、mTAGBFP2、mCLOVER3、EGFP、Venus、mTagBFP2、mIFP和TagRFP657中的一种。


6.编码权利要求1-5任一项所述融合蛋白的基因。


7.含有权利要求6所述基因的表达载体或表达盒。
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈郑，郑兰花，洪礼清，蒋奎胜，刘仁源，
申请(专利权)人：东莞市东阳光诊断产品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44