一种促进蛋白二聚体形成的拉链扣结构及其应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程领域，涉及一种促进蛋白二聚体形成的拉链扣结构及其应用，该拉链扣可用于同种蛋白的二聚，异种蛋白的二聚，也可用于多肽成环，二聚多肽及多肽的延伸。一些实例可以得到接近天然构象的ESAT6‑CFP10二聚体，该二聚体具有更好的可溶性，对记忆性T细胞刺激效果要好于线性融合表达的ESAT6‑CFP10蛋白。发明专利技术人还发现，二聚体拉链扣可帮助形成更稳定的环型多肽，添加了二聚体扣的CCP多肽可以增加对类风湿关节炎病人血清中瓜氨酸化自身抗体的检出率。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种促进蛋白二聚体形成的拉链扣结构及其应用
本专利技术涉及生物领域，特别具体涉及蛋白领域，特别涉及一种促进蛋白二聚体形成的拉链扣结构及其应用。
技术介绍
蛋白二聚体是一种蛋白质四级结构。同源双聚体是由两个相同的蛋白分子组合而成(此过程称为同源二聚作用homodimerization)，而异源二聚体则是由两种不同的蛋白质所形成(称为异源二聚作用heterodimerization)。生物化学中的大部分双聚体都不是用共价键相连结的。例如，反转录酶为一种非共价键连接的异源二聚体酵素，是由两种不同的氨基酸链连结的。另一个例外为双聚体蛋白NEMO，由双硫键连结的双聚体。有些蛋白会包含特殊的区域，确保二聚作用(二聚区域)的形成。在细胞的生长，繁殖，信号传导中，蛋白的二聚对功能的实现有重要的作用。研究蛋白的二聚体对了解蛋白的功能，生产应用十分重要。设计蛋白质二聚体是一项挑战性十足的任务。目前公布的设计蛋白二聚体的方法有半胱氨酸结设计，3个以上的成不对称的奇数的半胱氨酸残基，位于目标蛋白的C端(SherilynL，2001)，这种方法亲和力高，但蛋白不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种促进蛋白二聚体或环肽形成的方法，包括在肽链的末端引入二聚体拉链扣，所述二聚体拉链扣具有如下特性：/n1)含有至少2个，优选2～9个，3～8个，3～7个，4～6个荷电氨基酸残基；/n2)具有无电荷的间隔区，间隔区的长度为1～5个氨基酸，优选1～4、1～3个、1～2个；/n3)所述间隔区中的至少一个含有至少一个半胱氨酸残基；优选的，半胱氨酸残基的数量为1～4，1～3个，1～2个；/n4)两段二聚体拉链扣之间可以通过荷电氨基酸的静电作用相互亲和并通过间隔区的半胱氨酸残基形成二硫键。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20190428 CN 20191034816841.一种促进蛋白二聚体或环肽形成的方法，包括在肽链的末端引入二聚体拉链扣，所述二聚体拉链扣具有如下特性：
1)含有至少2个，优选2～9个，3～8个，3～7个，4～6个荷电氨基酸残基；
2)具有无电荷的间隔区，间隔区的长度为1～5个氨基酸，优选1～4、1～3个、1～2个；
3)所述间隔区中的至少一个含有至少一个半胱氨酸残基；优选的，半胱氨酸残基的数量为1～4，1～3个，1～2个；
4)两段二聚体拉链扣之间可以通过荷电氨基酸的静电作用相互亲和并通过间隔区的半胱氨酸残基形成二硫键。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述间隔区两侧的荷电氨基酸对称排列或非对称排列。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述荷电氨基酸为荷正电的氨基酸或荷负电的氨基酸，所述荷正电的氨基酸选自赖氨酸、精氨酸或组氨酸；所述荷负电的氨基酸选自天冬氨酸或谷氨酸。


4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于：至少一条肽链的N端和C端分别连接有二聚体拉链扣；特别的，肽链的N端和C端分别连接有二聚体拉链扣。


5.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于：至少一条肽链上有标签序列；优选的，两肽链各带一个标签序列；
优选的，所述标签序列包括Flag标签序列和组氨酸序列。


6.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于：
所述蛋白二聚体其中的一条肽链为结核蛋白ESAT6，另一条肽链为结核蛋白CFP10；
优选的，所述二聚体拉链扣位于结核蛋白ESAT6和结核蛋白CFP10的C端；
所述环肽包括CCP线性氨基酸序列，所述二聚体拉链扣分别位于CCP线性氨基酸序列的N端和C端；
优选的，所述二聚体拉链扣具有4个荷电氨基酸残基，荷电氨基酸优选分别为赖氨酸和天冬氨酸，所述二聚体拉链扣中间具有1或2个半胱氨酸；
优选的，环肽的整体结构为：KKCK-CCP线性氨基酸序列-DCDD。


7.一种带有二聚体拉链扣的蛋白或多肽，其特征在于：所述蛋白或多肽的至少一个末端连接有二聚体拉链扣，所述二聚体拉链具有如下特性：
1)含有至少2个，优选2～9个，3～8个，3～7个，4～6个荷电氨基酸残基；
2)具有无电荷的间隔区，间隔区的长度为1～5个氨基酸，优选1～4、1～3个、1～2个；
3)所述间隔区中的至少一个含有至少一个半胱氨酸残基；优选的，半胱氨酸残基的数量为1～4，1～3个，2～3个；
4)两段二聚体拉链扣之间可以通过荷电氨基酸的静电作用相互亲和并通过间隔区的半胱氨酸残基形成二硫键。


8.根据权利要求7所述的蛋白或多肽，其特征在于：所述间隔区两侧的荷电氨基酸对称排列或非对称排列。


9.根据权利要求7所述的蛋白或多肽，其特征在于：
所述蛋白为结核蛋白ESAT6和结核蛋白CFP10；所述二聚体拉链扣分别位于结核蛋白ESAT6和结核蛋白CFP10的C端；
所述蛋白CCP线性氨基酸序列，所述二聚体拉链扣分别位于CCP线性氨基酸序列的N端和C端；
优选的，所述二聚体拉链扣具有4个电荷的荷电氨基酸残基，荷电氨基酸优选分别为K和D，所述二聚体拉链扣中间具有1或2个半胱氨酸；
优选的，环肽的整体结构为：KKCK-CCP线性氨基酸序列-DCDD。


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【专利技术属性】
技术研发人员：杨翔，楼建荣，谢桂华，
申请(专利权)人：广州市雷德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44