本发明专利技术涉及一种1H‑苯并[d]咪唑‑2‑基)甲基)‑3‑(吗啉磺酰基)苯甲酰胺在制备治疗Th17细胞介导自身免疫病药物中的应用。本发明专利技术从Chembridge化合物库中筛选得到化合物，经实验表明：所述化合物在体外具有抑制Th17细胞分化的作用；在体内可以抑制Th17细胞的分化及IL‑17的产生，并减轻Th17细胞介导的实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)、实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)、1型糖尿病等自身免疫病的临床症状，具有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
CQMU151在制备治疗Th17细胞介导自身免疫病药物中的应用
本专利技术属于医药领域，特别涉及一种N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺(命名简称CQMU151)在制备治疗Th17细胞介导自身免疫病药物中的应用。
技术介绍
作为Th细胞发现的第三个子集，Th17细胞是有效的组织炎症诱导细胞，参与了许多炎症和自身免疫性疾病的发病机制。Th17细胞不仅在宿主防御细菌和真菌感染方面发挥着重要作用，也在许多免疫相关疾病中发挥着重要作用，包括葡萄膜炎、银屑病、类风湿关节炎、多发性硬化症、炎性肠病和哮喘/气道炎症性疾病等。抗IL-17已被证明对多种人类疾病有良好的治疗效果。在Th17细胞中，IL-17转录受Th17特异性转录调节因子RORγt调控。RORγt是一种配体依赖的转录因子，属于核激素受体超家族。目前非甾体类小分子RORγt反向激动剂的发现已成为治疗Th17介导的自身免疫性疾病的热门研究领域之一。其中，地高辛和熊果酸，作为两种天然产物，均通过选择性抑制RORγt来抑制IL-17的产生。但是，地高辛具有致癌和毒性副作用；熊果酸还可作用于RORγt以外的其他靶点如糖皮质激素受体等。因此，需要进一步的研究来寻找更加特异性的RORγt反向激动剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺在制备治疗Th17细胞介导的自身免疫病的用途。经实验表明：所述化合物在体外具有抑制Th17细胞分化的作用；在体内可以抑制Th17细胞的分化及IL-17的产生，并减轻Th17细胞介导的实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)、实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)、1型糖尿病等自身免疫病的临床症状，具有良好的应用前景。本专利技术所述的Th17细胞介导自身免疫病为葡萄膜炎症，或所述Th17细胞介导自身免疫病为1型糖尿病，或所述Th17细胞介导自身免疫病为脑脊髓炎。用N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺制备的药物以注射剂或输液剂给药。用N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺制备的药物用药量为每公斤体重每天20-50mg。本专利技术所述的N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺，英文名称为：N-((1H-benzo[d]imidazol-2-yl)methyl)-3-(morpholinosulfonyl)benzamide，分子式为：C19H20N4O4S，分子量为400.45，结构式为：其类似物及衍生物也有类似性能。本专利技术以RORγt为靶点，用N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺，进行体外及体内验证。申请人的实验验证，N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺在体外具有抑制Th17细胞分化的作用；在体内可以抑制Th17细胞的分化及IL-17的产生，并减轻Th17细胞介导的自身免疫病如实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)、实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)、1型糖尿病的临床症状，并且靶点明确，毒副反应小，可用于制备治疗Th17细胞介导自身免疫病的药物。附图说明图1为Th17细胞流式比例结果图，其中，Control组表示未干预，CQMU151表示化合物干预后的流式结果；图2为化合物的双荧光素酶计算结果，图中，纯黑柱表示空白组，横条纹表示DMSO对照组，竖条纹表示化合物干预组；图3为化合物体内干预后EAU小鼠的临床及病理评分结果，图中，圆点表示空白组，方块表示安慰剂组，三角形表示化合物干预组。图4为化合物干预后EAU小鼠的脾脏Th17细胞比例结果，图中，圆点表示空白组，方块表示安慰剂组，三角形表示化合物干预组。图5为化合物干预后EAE小鼠的临床及病理评分结果，图中，圆点表示空白组，方块表示安慰剂组，三角形表示化合物干预组。图6为两种化合物干预后1型糖尿病小鼠的进食量，饮水量及造模后第7天糖尿病发病率，图中，圆点表示空白组，方块表示安慰剂组，三角形表示化合物干预组；纯黑柱表示空白组，横条纹表示安慰剂组，竖条纹表示化合物干预组。具体实施方式本专利技术所述实施例的试剂、细胞、仪器：实施例1N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺体外抑制初始CD4+T细胞向Th17细胞分化结果1.实验方法：1)小鼠处死后75％乙醇浸泡，超净台内解剖分离出脾脏至滤网。2)用5ml注射器橡胶头研磨后用PBS冲洗过滤。收集过滤液至15ml离心管。3)以350*g离心力在4℃下离心10分钟，弃上清，加入细胞体积5倍量的红细胞裂解液，轻轻吹散后，放置2分钟，再以350*g的离心力在4℃下离心5分钟，弃上清。4)加入与红细胞裂解液同等量的冷PBS，轻轻吹散后，以350*g的离心力在4℃下离心2分钟，弃上清，计数，并重复清洗一次。5)避光操作，按照Miltenyi的小鼠naiveCD4+T细胞分离试剂盒的说明书步骤分离初始T细胞计数，按每孔0.5*10^6个细胞量种于用小鼠抗CD3和小鼠抗CD28包被的24孔板中，加入IL-1β(20ng/ml)，IL-6(25ng/ml)，IL-23(20ng/ml)，TGF-β(3ng/ml)诱导分化Th17细胞，并同时加入化合物干预。培养3天后收集细胞进行Th17细胞流式检测。2.实验结果：CQMU151可以在体外稳定抑制初始CD4+T细胞向Th17细胞的分化，抑制率达50％以上。结果参见图1。实施例2N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺与靶点RORγt的结合测试结果1.实验方法：采取双荧光素酶的方法(YangXO,etal.Thelper17lineagedifferentiationisprogrammedbyorphannuclearreceptorsRORalphaandRORgamma.Immunity28,29-39(2008))，构建RORγt过表达质粒及IL-17启动子报告质粒。分未加报告基因的空载组，报告基因+RORγt过表达质粒+DMSO的对照组及报告基因+RORγt过表达质粒+化合物干扰的实验组三组，将质粒转导如293T工程细胞中。16小时后换液加入DMSO/化合物干扰。表达2天。48小时后按照promega的双荧光素酶检测试剂盒步骤裂解细胞，检测萤火虫及海肾荧光值，进行计算统计。2.实验结果：该化合物均被证明以RORγt为靶点。结果参见图2。实施例3N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺体内对小鼠EAU的疾病严重程度的影响1.实验方法：抗原制备：用微量天平称取5mg的I本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺在制备治疗Th17细胞介导自身免疫病药物中的应用。/n
【技术特征摘要】
1.一种N-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉磺酰基)苯甲酰胺在制备治疗Th17细胞介导自身免疫病药物中的应用。
2.权利要求1所述的应用，其特征在于：所述Th17细胞介导自身免疫病为葡萄膜炎症。
3.权利要求1所述的应用，其特征在于：所述Th17细胞介导自身...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯胜平，谭珺，刘焕，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：重庆;50
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