小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin突变的免疫荧光试剂盒及方法技术

本发明专利技术提供了一种小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞E‑Cadherin突变的免疫荧光试剂盒及方法，属于分子生物学技术领域。该试剂盒包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、甲醇200μl、2%PFA 200μl、10%山羊血清100μl、一抗工作液100μl、二抗工作液100μl、DAPI封片剂。本发明专利技术提供的检测方法，不用穿刺活检获取组织标本即可检测到晚期或复发小细胞肺癌患者E‑Cadherin表达情况。该技术属于微创，并能够实时检测。本发明专利技术提供的方法，能够避免染色过程中可能产生的边缘效应导致的假阳性结果，稳定性好，降低细胞的损失，提高检测的准确性。

【技术实现步骤摘要】
小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin突变的免疫荧光试剂盒及方法
本专利技术提供了一种检测小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的免疫荧光试剂盒及检测方法，属于分子生物学

技术介绍
肺癌是导致癌症患者死亡的主要恶性肿瘤之一，在我国，肺癌的发病率和死亡率均居第一位。小细胞肺癌（smallcelllungcancer，SCLC）约占肺癌发生率的15％～20％，相较非小细胞肺癌，具有更快的肿瘤倍增时间，快速生长以及易于早期转移的特点。循环肿瘤细胞（Circulatingtumorcell，CTC）是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临床意义。因CTC检测具有微创、实时检测等特点，被称为肿瘤的“液态活检”。目前，山东省第一医科大学、山东省药物研究院联合山东凯歌智能机器有限公司就循环肿瘤细胞检测鉴定关键技术、检测设备本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、甲醇200μl、2% PFA 200μl 、10%山羊血清100μl 、一抗工作液100μl、二抗工作液100μl、DAPI封片剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A0.5mL、染色液B1mL、甲醇200μl、2%PFA200μl、10%山羊血清100μl、一抗工作液100μl、二抗工作液100μl、DAPI封片剂。


2.根据权利要求1所述的免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述一抗工作液是由小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E-Cadherin组成，分别采用BDwashbuffer按1:100&1:500&1:400稀释混匀；所述二抗工作液是由荧光标记的小鼠抗羊、荧光标记的大鼠抗羊和荧光标记的兔抗羊组成，分别采用BDwashbuffer按1:500稀释混匀2。


3.根据权利要求1所述的免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述稀释液是由1mmol/LEDTA+0.1%BSA+0.1%海藻糖+0.2%聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物组成，所述基础液为Tris-HCl缓冲剂。


4.根据权利要求1所述的免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述脱色液是由95%酒精与100%二甲苯按容积比1:1组成。


5.根据权利要求1所述的免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述染色液A为DAB染色液；所述染色液B为苏木素染色液。


6.一种利用权利要求1-5任一项所述的免疫荧光试剂盒非诊断目的检测小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发小细胞肺癌患者外周血中的CTC：采集无法获取组织标本的晚期或复发小细胞肺癌患者外周血：肘正中静脉外周血5ml；
（2）外周血样预处理：将采集的外周血样采用稀释液进行10倍稀释，稀释后加多聚甲醛固定外周血样...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪瑛，侯景阳，李文涛，李琛琛，
申请(专利权)人：山东凯歌智能机器有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37