一种胰腺癌的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种胰腺癌的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。该标志物包括序列为SEQ ID NO.1～100所示的蛋白中的至少一种。本发明专利技术基于高通量测序方法，只需要采取少量外周血，提取RNA，通过对样本的处理建立免疫图谱文库，再经过高通量测序和TCR数据分析，首先确定胰腺癌外周血中特征性TCR序列，然后将待测样本测试结果与该特征性TCR序列比对，从而确定是否患有胰腺癌。本发明专利技术能够同时比较巨大数量的胰腺癌特异性TCR序列，相比单独检测一种或几种标记物，具有更高的特异性和准确性，提高了诊断效率。

【技术实现步骤摘要】
一种胰腺癌的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种胰腺癌的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。
技术介绍
胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90％起源于腺管上皮的导管腺癌。胰腺癌的发病率因地区而异，平均约为5.1/10万人。男性发病率比女性较高，比例约为1.5-2:1。总体发病率近年来呈现上升趋势。中国国家癌症中心最新统计数据显示，胰腺癌位居中国城市男性恶性肿瘤发病率的第8位，居北京市和上海市人群恶性肿瘤死亡率的第5位。胰腺癌的病因尚不十分清楚。其发生与吸烟、饮酒、高脂肪和高蛋白饮食、过量饮用咖啡、环境污染及遗传因素有关；近年来的调查报告发现糖尿病人群中胰腺癌的发病率明显高于普通人群；也有人注意到慢性胰腺炎病人与胰腺癌的发病存在一定关系，发现慢性胰腺炎病人发生胰腺癌的比例明显增高；另外还有许多因素与此病的发生有一定关系，如职业、环境、地理等。胰腺癌的常见临床表现如下：1、腹痛：疼痛是胰腺癌的主要症状，不管癌位于胰腺头部或体尾部均有疼痛。除中腹或左上腹、右上腹部疼痛外，少数病例主诉为左右下腹、脐周或全腹痛，甚至有睾丸痛，易与其他疾病相混淆。当癌累及内脏包膜、腹膜或腹膜后组织时，在相应部位可有压痛。2、黄疸：黄疸是胰腺癌，特别是胰头癌的重要症状。黄疸属于梗阻性，伴有小便深黄及陶土样大便，是由于胆总管下端受侵犯或被压所致。3、消化道症状：最多见的为食欲不振，其次有恶心、呕吐，可有腹泻或便秘甚至黑便，腹泻常常为脂肪泻。4、消瘦、乏力：胰腺癌和其他癌不同，常在初期即有消瘦、乏力。5、腹部包块：胰腺深在，于后腹部难摸到，腹部包块系癌肿本身发展的结果，位于病变所在处，如已摸到肿块，多属进行期或晚期。慢性胰腺炎也可摸到包块，与胰腺癌不易鉴别。6、症状性糖尿病：少数病人起病的最初表现为糖尿病的症状，即在胰腺癌的主要症状如腹痛、黄疸等出现以前，先患糖尿病，以至伴随的消瘦和体重下降被误为是糖尿病的表现，而不去考虑胰腺癌。7、血栓性静脉炎：晚期胰腺癌患者出现游走性血栓性静脉炎或动脉血栓形成。8、精神症状：部分胰腺癌患者可表现焦虑、急躁、抑郁、个性改变等精神症状。9、腹水：一般出现在胰腺癌的晚期，多为癌的腹膜浸润、扩散所致。10、其他：此外，患者常诉发热、明显乏力。可有高热甚至有寒战等类似胆管炎的症状，故易与胆石症、胆管炎相混淆。胰腺癌的临床特点是整个病程短，早期诊断困难容易于其它疾病混淆，中晚期病情发展快且迅速恶化。因此，胰腺癌的治疗非常困难，且预后极差。因为早期诊断困难，只有10％到15％病人有手术切除的机会。胰腺癌的平均生存期为诊断后2-3个月，一年生存为8％，五年生存率仅有3％。因此，亟需寻找有效的诊断和治疗方法。目前针对胰腺癌的诊断手段主要分为生物化学及分子生物学检测、基因检测、影像学检测和病理学检测四大类。1、生物化学及分子生物学检测：1)糖类抗原CA19-9是目前最常用的胰腺癌诊断标志物，具有以下临床特征：将血清CA19-9>37U/ml作为阳性指标，诊断胰腺癌的灵敏度和特异度分别达到78.2％和82.8％。约10％的胰腺癌患者Lewis抗原阴性，CA19－9不升高，此时需结合其他肿瘤标志物如CA125和(或)癌胚抗原(CarcinoEmbryonicAntigen，CEA)等辅助诊断。对于CA19-9升高者，在排除胆道梗阻或胆道系统感染等因素后应高度怀疑胰腺癌。2)血糖变化监测：a)老年、体重指数低、无糖尿病家族史的新发糖尿病者，应警惕胰腺癌的发生；b)既往长期罹患糖尿病，短期出现血糖波动且难以控制者，亦应警惕胰腺癌的发生；c)前瞻性研究结果显示，空腹血糖每升高0.56mmol/L，胰腺癌发病风险增加14％；2)其他生物标志物：外周血内microRNA、ctDNA、外泌体内Glypican-1等也具有潜在临床应用前景，但临床应用尚待高级别循证医学证据的证实。2、基因检测：CDKN2A、BRCA1/2、PALB2等基因突变被证实与家族性胰腺癌发病密切相关。但这种基因检测只能评估患癌风险，不能作为诊断标准。3、影像学检查1)增强三维动态CT薄层扫描：目前诊断胰腺癌最常用的手段，能清晰显示肿瘤大小、位置、密度及血供情况，并依此判断肿瘤与血管【必要时采用CT血管成像(ComputedTomographyAngiography，CTA)检查】、邻近器官的毗邻关系，指导术前肿瘤的可切除性及新辅助化疗效果评估。2)核磁共振成像(MRI)：除显示胰腺肿瘤解剖学特征外，还可清晰地显示胰腺旁淋巴结和肝脏内有无转移病灶；且在与水肿型或慢性肿块型胰腺炎鉴别方面优于CT检查。磁共振胰胆管造影(MagneticResonanceCholaniopancreatography，MRCP)与MRI薄层动态增强联合应用，有助于明确胰腺囊性和实性病变(尤其是囊腺瘤、胰腺导管内乳头状黏液肿瘤的鉴别诊断)，并进一步明确胰管、胆管的扩张及侵犯情况，诊断价值更高。3)正电子发射断层显像(PositronEmissionTomography，PET)-CT检查：可显示肿瘤的代谢活性和代谢负荷，在发现胰外转移和评价全身肿瘤负荷方面具有明显优势。4)超声内镜(EndoscopicUltraSonography，EUS):在内镜技术的基础上结合了超声成像，提高了胰腺癌诊断的灵敏度和特异度；特别是EUS引导细针穿刺活检(FineNeedleAspiration，EUS－FNA)，已成为胰腺癌定位和定性诊断最准确的方法。另外，EUS也有助于判断肿瘤分期，诊断T1～2期胰腺癌的灵敏度和特异度分别为72％和90％，诊断T3～4期胰腺癌的灵敏度和特异度分别为90％和72％。4、病理学检查：组织病理学和(或)细胞学检查是诊断胰腺癌的"金标准"。除拟行手术切除的患者外，其余患者在制订治疗方案前均应力争明确病理学诊断。目前获得组织病理学或细胞学标本的方法包括：1)EUS或CT引导下穿刺活检；2)腹水脱落细胞学检查；3)腹腔镜或开腹手术下探查活检。但以上的现有检测方法，都有其局限性。如生物化学及分子生物学检测，因为标志物种类较少，难以同时保证特异性及灵敏度；影像学检测价格昂贵；病理学检查需要穿刺或抽取腹水，病人痛苦大等等。而且，所有现有检测方法，都难以区分早期胰腺癌与其他类型疾病，病人往往错过早期诊断机会。因此，亟需一种更高灵敏度和特异性，且简便易行的胰腺癌诊断方法。
技术实现思路
针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种胰腺癌的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用，能准确快速的判断待测样本中是否有较高胰腺癌风险患者。为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种胰腺癌的外周血TCR标志物，该标志物包括序列为SEQIDNO.1～100所示的蛋白中的至少一种，具体序列见表1。表1标志物序列...

【技术保护点】
1.一种胰腺癌的外周血TCR标志物，其特征在于，所述标志物包括序列为SEQ ID NO.1～100所示的蛋白中的至少一种。/n

【技术特征摘要】
1.一种胰腺癌的外周血TCR标志物，其特征在于，所述标志物包括序列为SEQIDNO.1～100所示的蛋白中的至少一种。


2.根据权利要求1所述的胰腺癌的外周血TCR标志物，其特征在于，所述标志物的蛋白序列为SEQIDNO.1～100所示的序列经取代、缺失和/或替换一个或多个碱基后，能表达相同功能的蛋白。


3.权利要求1所述的标志物在制备治疗胰腺癌的制剂中的应用。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述制剂包...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志新，杨鑫，卓越，文学平，张勇，
申请(专利权)人：成都益安博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51