一种利用HPLC测定爱普列特片中杂质含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用HPLC测定爱普列特片中杂质含量的方法，属于药物分析技术领域。该方法包括以下步骤：1)配置供试品溶液和对照溶液；2)设置高效液相检测条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，规格为250mm×4.6mm，填料粒径为5μm，柱温为35℃，以水、冰醋酸、二乙胺的混合液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速为1.0mL/min进行梯度洗脱；3)分别精密吸取供试品溶液和对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。本申请能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出爱普列特片中有关物质，有利于提高爱普列特片的产品质量，提高患者用药安全性。

【技术实现步骤摘要】
一种利用HPLC测定爱普列特片中杂质含量的方法
本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种利用HPLC测定爱普列特片中杂质含量的方法。
技术介绍
良性前列腺增生是男性最为常见的一种泌尿系统疾病，是由前列腺实质细胞数量增多导致前列腺体积增大所致，临床上以排尿困难、尿频、尿急、尿线无力、尿间断或滴沥等为主要表现，严重者可导致急性尿潴留、充盈性尿失禁，严重影响患者的生活质量。目前手术治疗是最为有效的治疗方法，然而良性前列腺增生患者一般都为高龄老人，其生理功能较弱，易给患者生理心理带来负担。因此，寻找积极有效的治疗措施是极为重要的。爱普列特片为新型的非竞争性5α还原酶抑制剂，可专一性或选择性抑制II型酶，而对I型酶作用较弱，因此该药主要在前列腺发挥作用，可有效降低双氢睾酮含量。根据爱普列特工艺路线，在制备中间体过程中会产生工艺副产物杂质A和杂质B；终产品爱普列特片在生产和贮存过程中可能会产生杂质C和杂质D，而针对杂质A、B、C、D分离测定的相关文献报道极少，因此，提供一种测定爱普列特片中杂质含量的方法对于原料制剂的生成和贮存具有重要意义。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种利用HPLC测定爱普列特片中杂质含量的方法，能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出爱普列特片中有关物质，有利于提高爱普列特片的产品质量，提高患者用药安全性。为了解决上述问题，本专利技术采用的技术方案为：一种利用HPLC测定爱普列特片中杂质含量的方法，包括以下步骤：<br>1)配置供试品溶液和对照溶液；2)设置高效液相检测条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，规格为250mm×4.6mm，填料粒径为5μm，柱温为35℃，以水、冰醋酸、二乙胺的混合液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速为1.0mL/min进行梯度洗脱；3)分别精密吸取供试品溶液和对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。进一步的，水、冰醋酸、二乙胺的体积比为1000∶25∶1。进一步的，梯度洗脱的条件为：0-30min，流动相A的体积百分比为30％，流动相B的体积百分比为70％；30-50min，流动相A的体积百分比为17％，流动相B的体积百分比为83％。进一步的，供试品溶液与对照溶液的进样量为10μL。进一步的，液相色谱仪的紫外检测器的的检测波长为260nm。进一步的，供试品溶液的制备方法为：精密称定爱普列特细粉，加甲醇溶解稀释成每mL含爱普列特2mg的溶液，离心，取上清液作为供试品溶液；所述对照溶液的制备方法为：精密量取供试品溶液，加甲醇稀释成每mL含爱普列特4μg的溶液，作为对照溶液。进一步的，供试品溶液的色谱图中，如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液的主峰面积，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的5倍。有益效果：与现行检测标准WS1-(X-075)-2003Z相比，采用本申请方法，在260nm检测波长下，爱普列特与各杂质之间能很好分离；辅料峰及溶剂峰不干扰主成分及杂质的检测；且各条件下破坏样品经峰纯度检测，光谱纯度均大于990，各条件下破坏产生的杂质均能与主峰很好地分离，有关物质检测专属性良好；同时对色谱条件参数发生微小变化时对爱普列特片有关物质杂质分离与检查结果没有影响，耐用性良好；使用该高效液相色谱法能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出爱普列特片中有关物质，有利于提高爱普列特片的产品质量，提高患者用药安全性。附图说明图1是使用不同方法检测爱普列特片有关物质的色谱图，其中，图1a为爱普列特片有关物质-现行标准方法-系统适用性(无辅料)色谱图，图1b为爱普列特片有关物质-本申请方法-系统适用性(无辅料)色谱图，图1c为爱普列特片有关物质-现行标准方法-辅料色谱图，图1d为爱普列特片有关物质-本申请方法-无辅料色谱图，图1e为爱普列特片有关物质-现行标准方法-系统适用性(加辅料)色谱图，图1f为爱普列特片有关物质-本申请方法-系统适用性(加辅料)色谱图；图2是本专利技术测定爱普列特片中杂质含量的系统适用性溶液图谱；图3是破坏性试验中测试色谱图，其中，图3a为爱普列特片-酸破坏图谱，图3b为爱普列特片-碱破坏图谱；图3c为爱普列特片-光破坏图谱，图3d为爱普列特片-热解破坏图谱，图3e为爱普列特片-高温坏图谱，图3f为爱普列特片-氧化破坏图谱；图4是爱普列特片-对照品溶液稳定性色谱图，其中，图4a为0H爱普列特片-对照品溶液稳定性图谱；图4b为14H爱普列特片-对照品溶液稳定性图谱；图5是爱普列特片-供试品溶液稳定性色谱图，其中，图5a为0H爱普列特片-供试品溶液稳定性图谱；图5b为14H爱普列特片-供试品溶液稳定性图谱；图6是爱普列特片-耐用性色谱图，其中，图6a为爱普列特片-耐用性-正常条件色谱图，图6b为爱普列特片-耐用性-不同初始比例(水相∶甲醇＝32∶68)色谱图，图6c为爱普列特片-耐用性-不同初始比例(水相∶甲醇＝28∶72)色谱图，图6d为爱普列特片-耐用性-不同流速(0.95mL/min)色谱图，图6e为爱普列特片-耐用性-不同流速(1.05mL/min)色谱图，图6f为爱普列特片-耐用性-不同柱温(30℃)色谱图，图6g为爱普列特片-耐用性-不同柱温(37℃)色谱图，图6h为爱普列特片-耐用性-不同色谱柱(LC-125)色谱图。具体实施方式下面结合具体实施例进一步说明本专利技术，但这些实施例并不用来限制本专利技术。实施例1爱普列特原料生产工艺过程中会产生工艺副产物杂质A和杂质B；终产品爱普列特片在生产和贮存过程中可能会产生杂质C和杂质D，通过HPLC法同时检测爱普列特及其杂质A、B、C、D的含量。1、杂质的限度制定爱普列特每日最大使用剂量为20mg，根据ICHQ3D及《化学药物杂质研究的指导原则》我们将杂质A、杂质B、杂质C、杂质D及最大单杂限度初步拟定为0.2％。2、现行标准与本申请HPLC方法的比较表1物质检测方法的比较本申请方法中，梯度洗脱的条件为：0-30min，流动相A的体积百分比为30％，流动相B的体积百分比为70％；30-50min，流动相A的体积百分比为17％，流动相B的体积百分比为83％。3、取分别使用爱普列特工艺变更前原料和工艺变更后原料生产的各三批样品，分别按照现行标准方法和本申请方法进行了有关物质检样，结果见表2，详见附图1。表2本申请方法与现行标准检测结果比较由图谱可以看出，现行标准中杂质B和杂质C无法有效分离，且杂质B和杂质C与未知杂质无法有效分离，且现行标准方法的色谱图中空白辅料峰与杂质峰无法有效分离，在计算杂质时将空白辅料峰均归属为杂质，因此，现行标准方法中单个杂质和总杂检查结果均高于本申请方法检查结果(空白辅料约有0.08％，见附图1)；本申请方法采用梯度洗脱方式，各杂质分离效果更好，杂质与辅料均能有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用HPLC测定爱普列特片中杂质含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)配置供试品溶液和对照溶液；/n2)设置高效液相检测条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，规格为250mm×4.6mm，填料粒径为5μm，柱温为35℃，以水、冰醋酸、二乙胺的混合液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速为1.0mL/min进行梯度洗脱；/n3)分别精密吸取供试品溶液和对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用HPLC测定爱普列特片中杂质含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)配置供试品溶液和对照溶液；
2)设置高效液相检测条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，规格为250mm×4.6mm，填料粒径为5μm，柱温为35℃，以水、冰醋酸、二乙胺的混合液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速为1.0mL/min进行梯度洗脱；
3)分别精密吸取供试品溶液和对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。


2.根据权利要求1所述的利用HPLC测定爱普列特片中杂质含量的方法，其特征在于，所述水、冰醋酸、二乙胺的体积比为1000∶25∶1。


3.根据权利要求1所述的利用HPLC测定爱普列特片中杂质含量的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的条件为：0-30min，流动相A的体积百分比为30％，流动相B的体积百分比为70％；30-50min，流动相A的体积百分比为17％，流动相B的体积百分比为83％。

【专利技术属性】
技术研发人员：褚青松，牛犇，贾志祥，赵杰，
申请(专利权)人：江苏联环药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32