本发明专利技术提供了一种用于血清中叶酸含量检测的释放剂、制备及应用，其能有效释放样本中结合态的叶酸分子，提高检测的准确度及重复性。一种用于血清中叶酸含量检测的释放剂，其特征在于，包括稳定剂、变性剂、中和剂；稳定剂为含有0.67%2‑氯乙酰胺、2.66%维生素C及0.21%TCEP的水溶液；变性剂为含有4.82%氢氧化钠、2.97%硼酸的水溶液；中和剂为含有13.60%磷酸二氢钾、0.05%碘酸钾的水溶液。上述释放剂的制备方法，其特征在于：稳定剂、变性剂、中和剂分别按量称取原料后、混匀。
【技术实现步骤摘要】
一种用于血清中叶酸含量检测的释放剂、制备及应用
本专利技术属于医疗器械生物类免疫体外诊断领域，具体涉及一种用于血清中叶酸含量检测的释放剂、制备及应用。
技术介绍
叶酸在体内的主要活性形式为四氢叶酸，含量缺乏时，细胞内DNA合成减少导致细胞的分裂成熟发生障碍，可引起巨幼红细胞性贫血、皮肤病变、神经病变与精神障碍、高同型半胱氨酸血症（增加心血管病风险）、阿尔兹海默症等疾病，也有报道认为与肿瘤有密切的关系，其机理主要与基因多态性及一碳代谢有关；甚至也有报道认为过量的叶酸可能会改变人的基因。此外，叶酸是胎儿生长发育不可缺少的营养素，孕妇缺乏叶酸有可能导致胎儿出生时出现低体重、唇腭裂、心脏缺陷等。如果在孕期前3个月内缺乏叶酸，可引起胎儿神经管发育缺陷，而导致畸形。需要注意的是过量的叶酸，非但不能预防胎儿畸形，还可能会掩盖维生素缺乏症状，干扰锌代谢，引起机体锌缺乏，加重妊娠反应及增加分娩合并症。由于叶酸对人体的多种生理功能具有非常重要的意义，特别是针对妇幼群体及老年群体，临床上对其含量的检测相对较为重视。因人类肠道细菌能合成叶酸，故一般不易缺乏。但是当吸收不良、代谢失常或长期使用肠道抑菌药物时，可造成叶酸缺乏。叶酸在体内多与叶酸结合蛋白以复合物的形式存在，在对人体样本进行检测时，如不对样本进行预处理释放出结合态的叶酸分子，则检测结果准确度及重复性均较差。本专利技术旨在阐述一种高效、简单、快速的释放剂，并应用于相应的免疫检测方法中。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供了一种用于血清中叶酸含量检测的释放剂、制备及应用，其能有效释放样本中结合态的叶酸分子，提高检测的准确度及重复性。一种用于血清中叶酸含量检测的释放剂，其特征在于，包括稳定剂、变性剂、中和剂；所述稳定剂为含有0.67%2-氯乙酰胺、2.66%维生素C及0.21%TCEP的水溶液；所述变性剂为含有4.82%氢氧化钠、2.97%硼酸的水溶液；所述中和剂为含有13.60%磷酸二氢钾、0.05%碘酸钾的水溶液。上述释放剂的制备方法，其特征在于：所述稳定剂、所述变性剂、所述中和剂分别按量称取原料后、混匀。上述释放剂在叶酸含量检测中的应用，包括以下步骤：（1）将50μL的样本、15μL的稳定剂和35μL的变性剂先后加入至样本处理管中，混匀并反应，得到第一溶液；（2）向所述第一溶液中加入50μL中和剂混匀并反应。进一步的，步骤（1）中所述反应的条件为37℃下反应10分钟；步骤（2）中所述反应的条件为37℃下反应1分钟。本专利技术的释放剂，可有效、完全释放样本中的叶酸，检测结果准确度高，重复性好，检测结果与国际一线产品一致性较好，能够应用于血清样品的叶酸含量检测，该方法具有广泛的应用前景。附图说明图1为本专利技术的释放剂与贝克曼公司试剂盒检测结果线性回归图。图2为本专利技术的释放剂与贝克曼公司试剂盒检测结果的相对偏差图。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。以下实施例中，所使用的标准品、链霉亲和素包被板、生物素化捕获蛋白、酶结合物、洗液、底物均为江苏拜明生物技术有限公司提供的叶酸检测试剂盒（苏械注准20172400543号）中的组分。对照为江苏拜明生物技术有限公司的释放剂（苏盐械备20150021号）、购自贝克曼库尔特公司的叶酸检测试剂盒（国械注进20172400011）。本专利技术下述高中低血清样本均来自无锡市第一人民医院，浓度已由贝克曼的叶酸检测试剂盒（国械注进20172400011）检测浓度。实施例1（1）一种用于血清中叶酸含量检测的释放剂，包括稳定剂、变性剂、中和剂；稳定剂为含有0.67%2-氯乙酰胺、2.66%维生素C及0.21%TCEP的水溶液；变性剂为含有4.82%氢氧化钠、2.97%硼酸的水溶液；中和剂为含有13.60%磷酸二氢钾、0.05%碘酸钾的水溶液。（2）释放剂的制备稳定剂：称取1440g纯化水，加入9.93g2-氯乙酰胺、39.77g维生素C、2.98gTCEP，混合均匀。变性剂：称取1440g纯化水，加入75.28g氢氧化钠、46.37g硼酸，混合均匀。中和剂：称取1440g纯化水，加入226.84g磷酸二氢钾、0.83g碘酸钾，混合均匀。（3）重复性实验1检测组1：采用江苏拜明生物技术有限公司提供的叶酸检测试剂盒的标准品、链霉亲和素包被板、生物素化捕获蛋白、酶结合物、洗液、底物以及本专利技术上述释放剂。对照组1：江苏拜明生物技术有限公司提供的叶酸检测试剂盒的标准品、链霉亲和素包被板、生物素化捕获蛋白、酶结合物、洗液、底物和江苏拜明生物技术有限公司的释放剂（苏盐械备20150021号）。取高中低三份血清，用检测组1、对照组1分别按照以下方法对样本中叶酸浓度进行检测，各浓度样本重复10次。实验组采用如下方法进行检测：取50μL血清样本或标准品，加入15μL的叶酸稳定剂和35μL的叶酸变性剂，混匀后于37℃孵育10分钟，再加入50μL的叶酸中和剂，混合均匀，于37℃孵育1分钟。取50μL经过预处理的样本或标准品，加入至链霉亲和素包被孔中，再加入50μL的生物素捕获蛋白溶液于37℃反应10分钟；孵育完成后，加入50μL的酶结合物溶液于37℃再反应10分钟，用300μL洗液洗涤5次后加入100μL发光底物，反应1分钟后用化学发光仪读取光信号值。结果如表1所示，样本经本专利技术的方法处理后，高中低值血清样本重复性结果均优于市售产品。（4）重复性实验2检测组1：采用江苏拜明生物技术有限公司提供的叶酸检测试剂盒的标准品、链霉亲和素包被板、生物素化捕获蛋白、酶结合物、洗液、底物以及本专利技术上述释放剂。对照组2：贝克曼库尔特公司的叶酸检测试剂盒（国械注进20172400011）。取高中低三份血清，检测组1按照对照实验1中的方法对样本中叶酸浓度进行检测，对照组2按照试剂盒自带说明方法进行检测，各浓度样本重复10次。实验结果如表2所示，本专利技术的叶酸释放剂与对应的实验方法可有效、完全释放样本中的叶酸，检测结果准确度高，重复性好，性能达到国际一线产品水平。（5）一致性检测实验从无锡第一人民医院收集127份临床血清样本，用检测组1、对照组2分别对样本中叶酸浓度进行检测。检测组1按照对照实验1中的方法对样本中叶酸浓度进行检测，对照组2按照试剂盒自带说明方法进行检测。如图1所示，贝克曼公司产品的检测结果（x）与本专利技术所述的方法检测结果（y）的线性回归方程为y=0.9955*x-0.055,r2=0.9593。相对偏倚结果如图2所示，超过90%以上的样本的偏差在本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于血清中叶酸含量检测的释放剂，其特征在于，包括稳定剂、变性剂、中和剂；/n所述稳定剂为含有0.67% 2-氯乙酰胺、2.66%维生素C及0.21% TCEP的水溶液；/n所述变性剂为含有4.82% 氢氧化钠、2.97%硼酸的水溶液；/n所述中和剂为含有13.60% 磷酸二氢钾、0.05%碘酸钾的水溶液。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于血清中叶酸含量检测的释放剂，其特征在于，包括稳定剂、变性剂、中和剂；
所述稳定剂为含有0.67%2-氯乙酰胺、2.66%维生素C及0.21%TCEP的水溶液；
所述变性剂为含有4.82%氢氧化钠、2.97%硼酸的水溶液；
所述中和剂为含有13.60%磷酸二氢钾、0.05%碘酸钾的水溶液。
2.如权利要求1所述的释放剂的制备方法，其特征在于，所述稳定剂、所述变性剂、所述中和剂分别按量称取原料后、...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈祥，龚芳，陆安黎，刘倩，白仲虎，
申请(专利权)人：江苏拜明生物技术有限公司，江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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