一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术的目的在于提供一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测方法及试剂盒，其采用竞争结合免疫法测定血清中游离T3的含量，具有高灵敏度、宽线性范围，能够满足现有的检测需求，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：步骤1、将30μL待测样本和60μL FT3试剂R1加入至包被孔中混匀，进行反应，反应后用洗液洗涤，所述FT3试剂R1为辣根过氧化物酶标记的T3检测抗体；步骤2、向包被孔中加入100μL发光底物并进行反应，测发光强度；步骤3、利用已知浓度的校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤2得到的发光强度对照所述发光强度标准曲线，计算得出待测样本中的游离三碘甲状腺原氨酸含量。待测样本中的游离三碘甲状腺原氨酸含量。待测样本中的游离三碘甲状腺原氨酸含量。

【技术实现步骤摘要】
一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于游离三碘甲状腺原氨酸检测相关
，具体涉及一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]近年来，我国甲状腺疾病发病率急速攀升，根据中华医学会内分泌学会进行的《社区居民甲状腺疾病流行病学调查》结果显示，甲亢的患病率为1.3％，甲减的患病率是6.5％，甲状腺结节的患病率是18.6％，甲状腺结节中有5％
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15％是恶性的，也就是甲状腺癌。由于公众对甲状腺疾病的认识远远不足，大概只有不到5％接受了规范治疗。甲状腺疾病会严重影响人们的生活质量，而且甲状腺疾病和妊娠甲亢或加减如果没有得到及时诊治，会对妊娠女性及其后代造成严重的负面影响(如增加胎儿早产风险，孩子智力生长发育障碍等)。早期诊断能够使患者尽早发现自身潜在疾病，做到早诊断早治疗，大大降低疾病恶化的风险。
[0003]三碘甲状腺原氨酸(Triiodothyronine，T3)是一种由甲状腺合成和分泌或在外周由甲状腺素T4脱碘形成的激素。甲状腺接受促甲状腺激素(TSH)的刺激后释放T3和T4进入血液循环，它们在新陈代谢的调节中起非常重要的作用。甲状腺、脑垂体腺和下丘脑参与T3、T4分泌的负反馈调节。在循环中，99.7％ T3可逆性地结合在运转蛋白上，其中主要是甲状腺素结合球蛋白(TBG)，少量和白蛋白和前白蛋白。剩余的T3不与运转蛋白结合，在循环中处于游离状态。总T3(TT3)中的这部分未结合的T3就是游离T3(Free triiodothyronine，FT3)。FT3本身就具有代谢活性。体内游离T3水平的高低与T3的分泌及代谢有关。在甲状腺机能减退和甲状腺机能亢进的患者中，其体内游离T3水平的变化跟随总T3水平的变化水平。当由于甲状腺素结合蛋白(特别是甲状腺结合球蛋白)浓度变化而引起TT3浓度发生改变时，测定FT3浓度具有重要临床意义。妊娠、哺乳、肝硬化、肾病综合征等可使血清甲状腺素结合球蛋白浓度及其结合力发生改变，可使FT3浓度发生变化。FT3的测定不受血清结合蛋白(主要是TBG)的影响，是甲状腺功能体外试验的灵敏指标，即使在生理及病理情况下引起血清甲状腺素结合球蛋白浓度和结合力改变时，也能较准确地反映甲状腺的功能。
[0004]当前FT3的测定方法包括：放射免疫测定法(Radioimmunoassary RIA)是放射免疫法是利用同位素标记的与未标记的抗原，同抗体发生竞争性抑制反应的方法，研究机体对抗原物质反应的发生、发展和转化规律。此方法检测结果准确可靠，灵敏度高等，但其采用放射元素，易污染，危害技术人员的健康。酶联免疫吸附测定法(Enzyme
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Linked Immunosorbent Assay，ELISA)是从酶标记抗体技术发展起来的，其结合了免疫荧光法和放射免疫测定法两种技术的优点。利用抗原抗体的特异性反应进行血清中抗体的检测，具有可定量、反应灵敏准确、标记物稳定、选择性好、样品处理量大、实用性强、适用范围宽、检测速度快、费用低等优点，得到了日益广泛的应用。该方法虽然技术成熟，但通量低、所需要的样品量(如血清的体积)大、消耗的试剂等耗材量也大，且仪器自动化程度低、操作比较繁琐，临床应用受到一定限制。
[0005]因此当前亟需设计一种新型的FT3的测定方法来满足临床的需求。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测方法及试剂盒，其采用竞争结合免疫法测定血清中游离T3的含量，具有高灵敏度、宽线性范围，能够满足现有的检测需求。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案。
[0008]一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：
[0009]步骤1、将30μL待测样本和60μL FT3试剂R1加入至包被孔中混匀，进行反应，反应后用洗液洗涤，
[0010]所述FT3试剂R1为辣根过氧化物酶标记的T3检测抗体；
[0011]步骤2、向包被孔中加入100μL发光底物并进行反应，测发光强度；
[0012]步骤3、利用已知浓度的校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤2得到的发光强度对照所述发光强度标准曲线，计算得出待测样本中的游离三碘甲状腺原氨酸含量。
[0013]进一步的，所述包被孔为包被有T3
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抗原衍生物和链霉亲和素的偶联产物。
[0014]进一步的，所述包被孔的制备方式为：Tris
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HCL缓冲液(pH8.0)加入1.5μg/g的T3抗原衍生物制备成包被液，将包被液加入包被孔后2℃
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8℃孵育18
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24小时，洗板加入封闭液，2℃
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8℃冷藏封闭16
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20小时；所述封闭液为0.41％氯化钠、4.57％蔗糖、3.65％牛血清白蛋白溶于Tris
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HCL缓冲液，其pH8.5。
[0015]进一步的，所述FT3试剂R1的制备方式为：取7.1g二水合磷酸二氢钠、49.49g十二水合磷酸氢二钠、0.9g牛血清白蛋白、0.9g明胶、42.12g蔗糖、0.9mL PC300抑菌剂、0.45mL/吐温
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20和0.01g铁氰化钾加入1L水中，调pH为7.0，再加入0.03mgT3
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抗体(鼠源)
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辣根过氧化物酶配置成FT3试剂R1。
[0016]进一步的，所述校准品的制备方式为：将T3抗原添加至去T3、T4人血清中，配置成浓度约为0pmol/L、2pmol/L、5pmol/L、10pmol/L、25pmol/L和50pmol/L的校准品。
[0017]进一步的，所述发光底物包括溶液A和溶液B，所述溶液A为含有0.4％鲁米诺，pH 9.0的水溶液，所述溶液B为含有0.06％四硼酸钠，pH 5.0的水溶液；所述洗液为含1％吐温20和0.1％Proclin300的0.05M、pH值为7.5的Tris
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HCl溶液。
[0018]进一步的，所述步骤1中的反应条件为37℃下反应22分钟；所述步骤2中的反应条件为37℃下反应1分钟。
[0019]基于上述检测方法，本专利技术还提供了一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括包被孔、FT3试剂R1、校准品、发光底物和洗液。
[0020]进一步的，所述发光底物和洗液均为独立包装。
[0021]与现有技术相比，本专利技术具备以下有益效果：
[0022]1、本专利技术采用竞争结合免疫法测定血清中游离T3的含量；反应时将样本和抗T3抗体
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辣根过氧化酶(HRP)结合物加入到T3
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抗原衍生物包被孔中一起温育，样本中游离T3和T3
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抗原衍生物与抗T3抗体
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HRP结合物竞争结合，在微孔内溫育完成后，洗涤除去未与T3
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抗原衍生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：步骤1、将待测样本和FT3试剂R1加入至包被孔中混匀，进行反应，反应后用洗液洗涤，所述FT3试剂R1为辣根过氧化物酶标记的T3检测抗体；步骤2、向包被孔中加入发光底物并进行反应，测发光强度；步骤3、利用已知浓度的校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤2得到的发光强度对照所述发光强度标准曲线，计算得出待测样本中的游离三碘甲状腺原氨酸含量。2.根据权利要求1所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测方法，其特征在于：所述包被孔为包被有T3
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抗原衍生物和链霉亲和素的偶联产物。3.根据权利要求2所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测方法，其特征在于：所述包被板的制备方式为：Tris
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HCL缓冲液加入1.5μg/g的T3抗原衍生物制备成包被液，将包被液加入包被孔后2℃
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8℃孵育18
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24小时，洗板加入封闭液，2℃
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8℃冷藏封闭16
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20小时；所述封闭液为0.41％氯化钠、4.57％蔗糖、3.65％牛血清白蛋白溶于Tris
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HCL缓冲液，其pH8.5。4.根据权利要求1所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸的检测方法，其特征在于：所述FT3试剂R1的制备方式为：取7.1g二水合磷酸二氢钠、49.49g十二水合磷酸氢二钠、0.9g牛血清白蛋白、0.9g明胶、42.12g蔗糖、0.9...

【专利技术属性】
技术研发人员：李帅鹏，刘萌，任和，白仲虎，
申请(专利权)人：江苏拜明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：