一种游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于体外诊断技术领域，具体涉及一种游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒及其应用。本发明专利技术采用工业用气泡崩解剂的技术，配制试剂盒中的校准品和抗试剂，利用气泡崩解剂可以降低溶液的表面张力，防止气泡形成，解决试剂添加过程中出现加样量减少或漏加的情况，解决其他方法检测灵敏度低、准确性和稳定性差的问题，与进口试剂盒的相关性达0.99以上，同时降低了成本，适用于全自动化学发光仪，操作简单。操作简单。操作简单。

【技术实现步骤摘要】
一种游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于体外诊断
，具体涉及一种游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]三碘甲腺原氨酸(T3)是一种对各种靶器官起作用的重要甲状腺激素，分子量为651，血清中半衰期为1天，血清中大部分T3是由四碘甲腺原氨酸(T4)在外周组织中经脱碘作用代谢而来，其余的由甲状腺分泌释放，其活性为T4的3
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8倍。在外周血中，99.6％ T3通过与血清中的运载蛋白结合而被转运，只有0.4％的T3是游离存在的，只有游离的T3具有代谢活性。FT3可以通过细胞膜与受体结合发挥生理效应，因此它是甲状腺激素发生生理效应的真正活性部分，而且体内FT3的浓度不受甲状腺激素结合蛋白的浓度影响，能较确切地反映甲状腺的功能状态及其他对人体机能的影响。FT3含量的测定结果准确性，可为甲状腺疾病的辅助诊断提供依据，是临床评价甲状腺功能的重要指标。
[0003]气泡崩解剂能降低水、溶液、悬浮液等的表面张力，防止泡沫形成，或使原有泡沫减少或消灭的物质。气泡崩解剂的应用十分广泛，如食品工业、造纸工业、水处理、采油工业、印染工业、涂料工业、洗涤剂工业、橡胶胶乳工业、气溶胶工业、日化工业、医药工业、奶制品工业等。
[0004]目前体外诊断试剂的缓冲体系中存在大量的蛋白，极其容易产生气泡，在检测过程容易出现试剂加入量不一致以及在运输过程中会产生大量气泡，造成检测指标不准确，浪费人力等缺点。
[0005]将气泡崩解剂转用至体外诊断试剂中虽可以实现良好的消泡效果，但是大多数工业气泡消解剂对体外诊断试剂体系有破坏作用或其他影响。
[0006]因此寻找一种检测准确性高，方便快捷的游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)检测试剂盒是目前亟待解决的问题。

技术实现思路

[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)检测试剂盒，本专利技术采用工业用气泡崩解剂的技术，配制试剂盒中的校准品和抗试剂，利用气泡崩解剂可以降低溶液的表面张力，防止气泡形成，解决试剂添加过程中出现加样量减少或漏加的情况，解决其他方法检测灵敏度低、准确性和稳定性差的问题，与进口试剂盒的相关性达0.99以上，同时降低了成本，适用于全自动化学发光仪，操作简单。
[0008]具体的，本专利技术的技术方案如下：
[0009]一种游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)检测试剂盒，包括试剂A、磁微粒试剂、发光底物液和校准品；
[0010]所述的试剂A为ALP标记的FT3抗体溶液，所述FT3偶联物的浓度为0.2
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0.8μg/mL。
[0011]所述的磁微粒试剂为标记有FT3单克隆抗体与磁性微球粒的结合物；
[0012]进一步的，所述磁微粒的直径1μm
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3μm；所述磁微粒的溶液浓度为0.1
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1.0mg/mL。
[0013]所述发光底物液为金刚烷胺衍生物CSPD。
[0014]所述的试剂盒还包括FT3校准品，浓度分别为0.0pmol/L、1.5pmol/L、3.4pmol/L、7.7pmol/L、15.4pmol/L、30.8pmol/L的FT3溶液。
[0015]进一步的，所述试剂A的制备步骤为：将FT3抗体、碱性磷酸酶活化，混合活化后的碱性磷酸酶和活化后的FT3抗体，静置反应，凝胶纯化柱进行纯化，缓冲液A稀释至0.2～1.0μg/mL，得到酶标FT3抗体溶液；
[0016]优选的，所述缓冲液A的为含1
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2％牛血清白蛋白、5
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10％新生牛血清、0.001％
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0.05％气泡崩解剂、0.5
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1％酪蛋白、0.1
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0.5％Proclin300防腐剂，pH为8.0～9.0的Tris缓冲液，Tris缓冲液的浓度为0.1mol/L；
[0017]所述气泡崩解剂为含硅聚醚多元醇，所述含硅聚醚多元醇的制备方法为Pluronic P
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85中在碱性条件下滴加二甲基二氯硅烷得到含硅聚醚多元醇，加入1％(v/v)甘油。
[0018]本专利技术在使用此含硅聚醚多元醇时消泡效果优异，但是发现随着用量增加检测效果变差，这是由于c多元醇对试剂盒中的蛋白产生了影响，因此本专利技术通过复配微量甘油同含硅聚醚多元醇结合使用，避免吸水使得蛋白聚集破坏分散效果。
[0019]优选的，所述含硅聚醚多元醇的用量为0.001％
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0.01％；
[0020]进一步的，所述校准品的制备步骤为：将高值FT3抗原用缓冲液B稀释，用国家标准品重复标定5次，5次标定值，取均值作为标定的FT3抗原浓度；缓冲液B分别稀释至0.0pmol/L、1.5pmol/L、3.4pmol/L、7.7pmol/L、15.4pmol/L、30.8pmol/L，得到FT3校准品；
[0021]优选的，所述缓冲液B的为含0.05
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0.1mmol/L的磷酸氢二钠
‑
磷酸氢二钠、0.01
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0.5mmol/L的氯化钾的1％的BSA、0.001％
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0.05％气泡崩解剂及10％胎牛血清组成，pH值7.4；
[0022]优选的，所述气泡崩解剂的用量为0.001％
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0.01％；
[0023]本专利技术还提供一种游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)检测试剂盒在检测FT3中的应用；
[0024]所述应用包括但不限于将试剂A和待测样品孵育后，进行磁分离清洗，再加入发光底物液，得到待测液；检测所述待测液的发光值，根据发光值计算出FT3的含量。
[0025]本专利技术的有益效果在于：
[0026]本专利技术特有校准品和抗试剂中添加气泡崩解剂，具有灵敏度高，线性范围宽，检测平台期长等优点，无需进行校准品和抗试剂进行除泡，以及防止在运输过程中出现大量气泡，且使用简单、检测速度快，检测周期短、全自动程度更高，降低了检测成本与人力花费，提高了检测准确性。
附图说明
[0027]图1为实施例3参考组的浓度
‑
发光值标准曲线；
[0028]图2为实施例3待检1的浓度
‑
发光值标准曲线；
[0029]图3为实施例3待检2的浓度
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发光值标准曲线；
[0030]图4为实施例3待检3的浓度
‑
发光值标准曲线。
具体实施方式
[0031]在本专利技术的一些实施例中，一种FT3检测试剂盒包括：试剂A、磁微粒试剂、底物液和校准品。
[0032]进一步地，所述的试剂A包括ALP标记的FT3抗体，即酶标FT3抗体，所述试剂A的浓度为0.2～0.8μg/mL。
[0033]进一步地，所述的磁微粒试剂为标记有FT3包被抗体与磁性微球粒的结合物，即包被有FT3抗体的磁微粒；所述磁微粒的直径1μm～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒，其特征在于，包括试剂A、磁微粒试剂、校准品和发光底物液；所述试剂A包括酶标FT3抗体；所述磁微粒试剂包括包被有FT3抗体的磁微粒；所述试剂A的浓度为0.2～0.8μg/mL；所述磁微粒的粒径为1μm～3μm；所述磁微粒试剂的浓度为0.1～1.0mg/mL；所述发光底物液为金刚烷胺衍生物。2.如权利要求1所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒，其特征在于，还包括校准品，所述校准品为0.0pmol/L、1.5pmol/L、3.4pmol/L、7.7pmol/L、15.4pmol/L、30.8pmol/L的FT3抗体溶液。3.如权利要求1所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂A的制备步骤为：将FT3抗体、碱性磷酸酶活化，混合活化后的碱性磷酸酶和活化后的FT3抗体，静置反应，凝胶纯化柱进行纯化，缓冲液A稀释至0.2～0.8μg/mL，得到酶标FT3抗体溶液。4.如权利要求1所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂的制备步骤为：用MES缓冲液洗涤磁微粒3～5次后，活化30～40min，用MES缓冲液洗涤磁微粒1次，加入FT3抗体进行偶联，用MES缓冲液洗涤磁微粒3～5次，加...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨程，郭宣城，何春芹，谢清华，
申请(专利权)人：山东博科诊断科技有限公司，
类型：发明
国别省市：