白介素-2的部分激动剂制造技术

本文尤其提供了人白介素2(IL‑2)突变蛋白或其变体。具体地，本文提供了具有降低的对IL‑2Rγ的结合能力的IL‑2突变蛋白。此类IL‑2突变蛋白可以作为例如IL‑2部分激动剂用于如下应用中：在所述应用中减少或抑制一种或多种IL‑2和/或IL‑15功能是有用的(例如，在自身免疫性疾病或病症的治疗中)。还提供了编码此类IL‑2突变蛋白的核酸、制备此类IL‑2突变蛋白的方法，包含此类IL‑2突变蛋白的药物组合物，以及使用此类药物组合物的治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】白介素-2的部分激动剂相关申请的交叉引用本申请要求2017年11月21日提交的美国临时专利申请序列号62/589,497的优先权权益。以上引用的申请的公开内容通过引用以其整体(包括任何附图)明确并入本文。关于联邦政府资助研发的声明本专利技术是在由美国国立卫生研究院授予的R37AI051321下在美国政府支持下完成的。政府享有本专利技术的某些权利。对序列表的引用本申请是与电子格式的序列表一起提交的。序列表以2018年11月14日创建的名为“Sequence_Listing_078430-503001WO.txt”的文件提供，其大小为约32KB。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其整体并入本文。
本文尤其公开了一种展现出对IL-2受体信号的部分激动特性的白介素-2突变蛋白，以及使用所述白介素-2突变蛋白治疗自身免疫性疾病的方法。
技术介绍
白介素2(IL-2)是主要由激活的CD4+T细胞产生的多能细胞因子，其在产生正常免疫应答中起着至关重要的作用。IL-2促进激活的T淋巴细胞的增殖和扩增、增强B细胞生长，并且激活单核细胞和自然杀伤细胞。IL-2除了在正常免疫应答中的生理作用外，还可以促进病理反应，并且治疗目标是在阻断不希望的自身免疫或免疫抑制反应的同时维持该细胞因子的所需作用。两种针对人IL-2Rα的单克隆抗体(mAb)达克珠单抗(Daclizumab)和巴利昔单抗(Basiliximab)被FDA批准并且展现出在肾移植排斥(Vincenti等人,NEnglJMed338:161(1998))、心脏移植(Hershberger等人,NEnglJMed352:2705(2005))、多发性硬化(Gold等人,Lancet381:2167(2013))和哮喘(Bielekova等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA101:8705(2004)；和Busse等人,AmJRespirCritCareMed178:1002(2008))中的功效，但它们不是通过在NK和记忆CD8+细胞上表达的中等亲和力IL-2Rγ受体阻断IL-2信号传导(Tkaczuk等人,AmJTransplant2:31(2002))。尽管抗人IL-2RβmAbMikβ1可以阻断IL-2和IL-15向表达IL-2Rγ受体的细胞的反式呈递(Morris等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA103:401(2006))，但是它在阻断IL-2或IL-15通过它们的高亲和力异三聚受体复合物进行顺式信号传导方面相对无效(Morris等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA103:401(2006)；以及Waldmann等人,Blood121:476(2013))。因此，需要新的IL-2突变蛋白，其可以促进该细胞因子的治疗有益效应，但是也阻断与不希望的自身免疫或免疫抑制反应相关的一种或多种IL-2功能。
技术实现思路
本公开文本总体上涉及免疫学和医学领域，包括用于调节有需要的受试者中由白介素2(IL-2)介导的信号转导途径的组合物和方法。更具体地，在一些实施方案中，本公开文本提供了新型IL-2突变蛋白，其对IL-2受体(例如白介素2α受体(IL-2Rα)、白介素2β受体(IL-2Rβ)、白介素2γ受体(IL-2Rγ))中的至少一种具有经调节的亲和力。本公开文本的一些实施方案提供了IL-2部分激动剂，其不促进引起不期望的不利自身免疫性事件(诸如炎症)的免疫细胞的激活。本公开文本的一些实施方案涉及可用于产生此类IL-2突变蛋白的组合物和方法，以及用于治疗与由IL-2信号传导途径介导的信号转导的扰动相关的健康病症和障碍的方法。在一个方面，提供了一种白介素2(IL-2)突变蛋白，其具有：(a)与由SEQIDNO:2编码的IL-2多肽相比降低的对白介素2受体γ(IL-2Rγ)的结合亲和力；和(b)与由SEQIDNO:2编码的多肽相比15-95％E最大。在一些实施方案中，IL-2突变蛋白包含：(i)与由SEQIDNO:1编码的多肽相比增大IL-2Rβ结合亲和力的一种或多种氨基酸取代，所述一种或多种氨基酸取代选自根据SEQIDNO:1的氨基酸序列编号的L80F、R81D、L85V、I86V和I92F；和/或(ii)与由SEQIDNO:2编码的多肽相比降低IL-2Rγ受体结合亲和力并导致15-95％的E最大的一种或多种氨基酸取代，所述一种或多种氨基酸取代选自根据SEQIDNO:2的氨基酸序列编号的(A)L18R和Q22E；和(B)氨基酸位置126。在一些实施方案中，SEQIDNO:2的位置126处的氨基酸取代选自Q126A、Q126C、Q126D、Q126E、Q126G、Q126H、Q126I、Q126K、Q126M、Q126R、Q126S、或Q126T。在一些实施方案中，IL-2突变蛋白包含氨基酸取代Q126H、Q126K或Q126M。在一些实施方案中，IL-2突变蛋白包含氨基酸取代Q126H。在一些实施方案中，IL-2突变蛋白在结构上经修饰以延长半衰期。在一些实施方案中，修饰包括选自以下的一种或多种修饰：与人Fc抗体片段的融合、与白蛋白的融合和PEG化。在一些实施方案中，IL-2突变蛋白引起Treg细胞的扩增，并且不促进潜在炎性T细胞和自然杀伤(NK)细胞或粒细胞的扩增。在一些实施方案中，与由SEQIDNO:1或SEQIDNO:2编码的多肽相比，IL-2突变蛋白诱导较少的潜在炎性T细胞增殖。在一些实施方案中，与由SEQIDNO:1或SEQIDNO:2编码的多肽相比，IL-2突变蛋白使Treg细胞的增殖增加至少3倍和/或诱导更少的IFNγ分泌。在一些实施方案中，潜在炎性T细胞是CD4+IFNγ+T细胞，或者是CD8+IFNγ+T细胞。在本文公开的任何实施方案中的一些实施方案中，突变蛋白不诱导从CD8+T细胞和/或其他炎性免疫细胞子集分泌IFNγ。在一些实施方案中，与由SEQIDNO:1编码的多肽相比，所述突变蛋白具有70-95％E最大。在一个方面，本文提供了一种白介素2(IL-2)突变蛋白，其具有与由SEQIDNO:1编码的多肽相比：(a)降低的对白介素2受体γ(IL-2Rγ)的结合亲和力；以及(b)15-95％E最大。在一些实施方案中，突变蛋白包含与由SEQIDNO:1编码的多肽相比降低IL-2Rγ受体结合亲和力并导致15-95％E最大的一种或多种氨基酸取代，所述一种或多种氨基酸取代选自根据SEQIDNO:1的氨基酸序列编号的(A)L18R和Q22E；和(B)氨基酸位置126。在一些实施方案中，IL-2突变蛋白包含在SEQIDNO:1的位置126处的氨基酸取代，所述氨基酸取代选自Q126A、Q126C、Q126D、Q126E、Q126G、Q126H、Q126I、Q126K、Q126M、Q126R、Q126S、或Q126T。在一些实施方案中，IL-2突变蛋白包含氨基酸取代Q126H、Q126K或Q126M。在一些实施方案中，IL-2突变蛋白包含氨基酸取代Q126H。在一些实施方案中，IL-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种白介素2(IL-2)突变蛋白，所述白介素2(IL-2)突变蛋白具有：/n(a)与由SEQ ID NO:2编码的IL-2多肽相比降低的对白介素2受体γ(IL-2Rγ)的结合亲和力；和/n(b)与由SEQ ID NO:2编码的IL-2多肽相比15-95％E

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171121 US 62/589,4971.一种白介素2(IL-2)突变蛋白，所述白介素2(IL-2)突变蛋白具有：
(a)与由SEQIDNO:2编码的IL-2多肽相比降低的对白介素2受体γ(IL-2Rγ)的结合亲和力；和
(b)与由SEQIDNO:2编码的IL-2多肽相比15-95％E最大。


2.根据权利要求1所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白包含：
(i)与由SEQIDNO:1编码的多肽相比增加IL-2Rβ结合亲和力的一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自根据SEQIDNO:1的氨基酸序列编号的L80F、R81D、L85V、I86V和I92F；和/或
(ii)与由SEQIDNO:2编码的多肽相比降低IL-2Rγ受体结合亲和力并导致15-95％的E最大的一种或多种氨基酸取代，所述一种或多种氨基酸取代选自根据SEQIDNO:2的氨基酸序列编号的(A)L18R和Q22E；和(B)氨基酸位置126。


3.根据权利要求2所述的IL-2突变蛋白，其中SEQIDNO:2的位置126处的氨基酸取代选自Q126A、Q126C、Q126D、Q126E、Q126G、Q126H、Q126I、Q126K、Q126M、Q126R、Q126S、或Q126T。


4.根据权利要求3所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白包含氨基酸取代Q126H、Q126K或Q126M。


5.根据权利要求3所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白包含氨基酸取代Q126H。


6.一种白介素2(IL-2)突变蛋白，其具有与由SEQIDNO:1编码的多肽相比：(a)降低的对白介素2受体γ(IL-2Rγ)的结合亲和力；以及(b)15-95％E最大。


7.根据权利要求6所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白包含与由SEQIDNO:1编码的多肽相比降低IL-2Rγ受体结合亲和力并导致15-95％E最大的一种或多种氨基酸取代，所述一种或多种氨基酸取代选自根据SEQIDNO:1的氨基酸序列编号的(A)L18R和Q22E；和(B)氨基酸位置126。


8.根据权利要求7所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白包含SEQIDNO:1的位置126处的氨基酸取代，所述氨基酸取代选自Q126A、Q126C、Q126D、Q126E、Q126G、Q126H、Q126I、Q126K、Q126M、Q126R、Q126S、或Q126T。


9.根据权利要求8所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白包含氨基酸取代Q126H、Q126K或Q126M。


10.根据权利要求9所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白包含氨基酸取代Q126H。


11.根据权利要求1-10中任一项所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白在结构上经修饰以延长半衰期。


12.根据权利要求11所述的IL-2突变蛋白，其中所述修饰包括选自以下的一种或多种修饰：与人Fc抗体片段的融合、与白蛋白的融合和PEG化。


13.根据权利要求1-12中任一项所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白增加调节性T(Treg)细胞的增殖和/或诱导潜在炎性T细胞的最小增殖。


14.根据权利要求1-13中任一项所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白引起Treg细胞的扩增，并且不促进潜在炎性T细胞和自然杀伤(NK)细胞或粒细胞的扩增。


15.根据权利要求14所述的IL-2突变蛋白，其中与由SEQIDNO:1或SEQIDNO:2编码的多肽相比，所述突变蛋白诱导较少的潜在炎性T细胞增殖。


16.根据权利要求15所述的IL-2突变蛋白，其中所述潜在炎性T细胞是CD4+IFNγ+T细胞，或者是CD8+IFNγ+T细胞。


17.根据权利要求1-16中任一项所述的IL-2突变蛋白，其中与由SEQIDNO:1或SEQIDNO:2编码的所述多肽相比，所述突变蛋白使Treg细胞的增殖增加至少3倍和/或诱导更少的IFNγ分泌。


18.根据权利要求1-17中任一项所述的IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白不诱导从CD8+T细胞和/或其他炎性免疫细胞子集分泌IFNγ。


19.根据权利要求1-18中任一项所述的IL-2突变蛋白，其中与由SEQIDNO:1编码的所述多肽相比，所述突变蛋白具有70-95％E最大。


20.一种核酸，所述核酸编码根据权利要求1-19中任一项所述的IL-2突变蛋白。


21.一种载体，所述载体包含根据权利要求20所述的核酸。


22.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求20所述的核酸或根据权利要求21所述的载体。


23.一种无菌药物组合物，所述无菌药物组合物包含根据权利要求1-19中任一项所述的IL-2突变蛋白和药学上可接受的赋形剂。


24.一种注射器，所述注射器包含：(a)根据权利要求1-19中任一项所述的IL-2突变蛋白；(b)根据权利要求20所述的核酸；(c)根据权利要求21所述的载体；(d)根据权利要求22所述的宿主细胞；和/或(e)根据权利要求23所述的药物组合物。


25.一种导管，所述导管包含：(a)根据权利要求1-19中任一项所述的IL-2突变蛋白；(b)根据权利要求20所述的核酸；(c)根据权利要求21所述的载体；(d)根据权利要求22所述的宿主细胞；和/或(e)根据权利要求23所述的药物组合物。


26.一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)以下中的一种或多种：(i)根据权利要求1-19中任一项所述的IL-2突变蛋白；(ii)根据权利要求20所述的核酸；(i...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·C·加西亚，S·S·玛吉，C·R·格拉斯曼，L·LR·苏，
申请(专利权)人：小利兰·斯坦福大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US