治疗自身免疫性疾病的PantId制造技术

B和T细胞经常在自身免疫性疾病中靶向检查点受体及其同源配体，其中这些适应性免疫应答可能显著促进潜在的免疫病理。本文描述了靶向检查点受体及其配体的自身反应性B细胞的克隆消除的新技术。该技术的一个实施方案是与效应子结构域的检查点受体或配体胞外结构域分子嵌合体，其能够诱导B细胞凋亡、坏死和/或耐受/无反应：在本文中，该技术被称为PantId(多克隆抗独特型)。在其他实施方案中，该技术还包括与免疫调节细胞因子的效应分子嵌合体。还描述了新型的凋亡效应子。还描述了鉴定检查点受体/配体自身反应性B细胞反应、构建PantId及其体外和体内应用的方法。

Pantid for autoimmune diseases

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗自身免疫性疾病的PantId专利技术背景正常致耐受机制自身免疫性疾病的特征是耐受性的逐渐下降,通常是进行性下降,以及通常阻止对内源宿主蛋白的适应性免疫反应的致耐受机制。在正常B和T细胞发育过程中，自身反应性细胞分别在骨髓和胸腺中被消除，对宿主组织和蛋白质产生“中央耐受性”。对于B细胞，高亲和力B细胞受体(BCR)对骨髓(B细胞发育的位置)中存在的细胞表面蛋白的表达导致细胞凋亡。另外，对无处不在的可溶性配体有应答的B细胞因无反应性而失活。对于T细胞，在胸腺(T细胞发育的位置)中也发生类似的过程：T细胞受体(TCR)对MHC-I或MHC-II复合物中存在的自身抗原肽以高亲和力应答的T细胞也因细胞凋亡而删除。对于所述肽-MHC复合物具有中等或低亲和力的T细胞，这些细胞可发育为调节性T细胞(Tregs)，其有助于维持外周耐受性；或者，这些细胞可能变得无反应性或发生凋亡。外周耐受性是指一套机制，其阻止对中枢免疫系统之外的宿主蛋白的适应性免疫反应。如前所述，这些包括中枢产生的Treg细胞，其通过表达对自身抗原肽-MHC复合物的免疫抑制效应子来帮助维持外周耐受性。Treg抑制的机制仍在确定中，但包括可溶性免疫抑制效应子和细胞接触特异性免疫抑制剂的分泌。在前一种机制中，Treg细胞分泌TGF-β、IL-10、腺苷(由CD39和CD73产生)和IL-35，从而产生可以阻止T细胞和B细胞活化的免疫抑制环境，并产生耐受性APC1。在细胞接触机制中，CTLA-4、PD-L1、LAG-3、膜结合的TGF-β以及穿孔素和颗粒酶有助于免疫抑制1。同样在外周，自身反应性T细胞可以通过耐受性APC(例如BTLA+树突状细胞)被凋亡或转化为外周Treg2。这些外周Tregs(pTregs)通过许多针对中枢或胸腺Tregs(cTregs或tTregs)描述的机制促进了外周耐受性。外周耐受性的另外机制是对T细胞活化进行共同刺激的一般要求。当T细胞将其同源抗原作为肽-MHC复合物结合时，取决于共刺激的存在，有两种可能的结果：在共刺激激动剂的存在下，例如CD80或CD86与T细胞表达的CD28结合，T细胞变成激活，导致增殖和效应功能的参与；在另一种情况下，当缺乏共刺激或当T细胞代替共刺激信号或与共刺激信号结合而接受抑制信号时，T细胞可能发生凋亡、无反应性或转化为pTreg。对于B细胞，对于T细胞依赖性B细胞激活存在类似的共刺激要求，其中T细胞表达的CD40L必须与B细胞表达的CD40结合以进行B细胞激活。虽然对共刺激的这些规范模式(例如CD28和CD40)进行了最详尽的描述，但最近已阐明了其他共刺激剂和共抑制剂：这类受体及其配体(其累积决定抗原参与的结果)被指为免疫检查点受体或配体：目前，这些免疫检查点包括15个信号轴(图1)。在针对检查点受体的基线调节自身反应性的一个例子中，Andersen等人(2013年)展示了自然识别免疫检查点配体PD-L1的CD8T细胞的存在7。这些抗PD-L1细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答在健康患者中观察到，并且在更大范围内在肾细胞癌或恶性黑色素瘤患者中观察到：在炎症中，在肿瘤微环境中，推测天然存在的抗PD-L1CTL对高水平的PD-L1表达有应答，导致癌症患者中抗PD-L1CTL应答增加7。作者还指出，这些天然存在的抗PD-L1CD8T细胞可通过调节表达PD-L1的细胞的频率在健康患者中发挥免疫调节作用：例如，抗PD-L1CTL可通过消除了表达PD-L1的APC而降低自身免疫力。该同一小组观察到存在抗PD-L1Th17细胞，它是CD4T细胞的炎性子集：与抗PD-L1CTL的情况一样，这些细胞也被假定既调节基线免疫力又调节抗癌免疫力8。
技术实现思路
本文描述和要求保护的专利技术具有许多属性和方面，包括但不限于在本
技术实现思路
中阐述、描述或参考的那些。不旨在是全部包含性的，并且本文描述和要求保护的专利技术不限于或不受该
技术实现思路
中所标识的特征或实施方案的限制，其仅出于说明而非限制的目的被包括在内。一方面，本文描述的技术涉及PantId(多克隆抗独特型)、PantId的生产以及PantId用于特异靶向其同源抗原对应于检查点受体或其配体的自身反应性B细胞的用途：这些自身反应性B细胞是有贡献的，并且也许是自身免疫性疾病发病和进展的病因。在一个方面，PantId可以是分子嵌合体，其包含二至五个组分，例如两个、三个、四个或五个组分，例如，(1)选自检查点配体、受体或免疫调节细胞因子的第一组分；(2)包含效应子的第二成分，其中所述效应子引起白细胞凋亡、坏死、耐受或无反应性。PantId还可以在两个至五个，例如两个、三个、四个或五个组分中的每个组件之间包括接头，以为分子嵌合体提供柔性。PantId也可以包含额外的效应子和/或均二聚体、异二聚体、三聚体、四聚体或低聚结构域。在一些方面，本公开的特征在于使用包含已知抗原及其抗体或其片段的PantId靶向患者中自身反应性B细胞的方法和载体。例如，PantId可包含Ab的Fc(可结晶片段)部分-所述Fc包含两条重链，取决于抗体的种类，每条重链各自包含两个或三个恒定结构域。人类具有五类不同的Fc受体(FcR)，每类抗体一类。FcR单倍型或遗传变体也已有报道。Fc结构域与FcR和其他抗体亚类的相互作用介导其他免疫细胞的募集和募集的细胞类型。因此，改造与选择的FcR和/或免疫球蛋白的其他类别和亚类结合的Fc结构域并仅募集所需类型的免疫细胞的能力对于治疗可能是重要的。一方面，可以将IgG的Fc区改造成与自身反应性B细胞上的IgD、IgM、IgG1-4等的跨膜同工型结合。当B细胞受体结合自身抗原-Fc融合蛋白时，B细胞靶向细胞溶解。在其他方面，本公开的PantId可以排除Fc结构域。在本公开的一些方面，PantId组分靶向相同的细胞。在本公开的一些方面，PantId组分靶向相同的自反应性B细胞。在一些方面，PantId包含分子嵌合体，其包含检查点受体或其同源配体的细胞外结构域，以及效应子或效应子结构域，其中效应子或效应子结构域促进B细胞凋亡、坏死或耐受/无反应性。在一些方面，用PantId治疗导致自身反应性B细胞的克隆缺失。例如，在一个实施方案中，分子嵌合体包含PD-L1细胞外结构域和FasL细胞外结构域，其介导多克隆抗PD-L1自身反应性B细胞凋亡。在该实施方案中，施用PantId导致抗PD-L1自身反应性B细胞的克隆缺失。在一些实施方案中，本专利技术的PantId是无颗粒的。一方面，包含PantId的治疗组合物可用于治疗或改善以自身反应性B细胞为特征的自身免疫疾病，所述自身反应性B细胞表现出对免疫检查点受体或其配体或免疫调节细胞因子的响应性。一方面，这些PantId将通过其B细胞受体(BCR)靶向自身反应性B细胞，导致克隆缺失。一方面，抗检查点蛋白自身反应性B细胞的克隆缺失将导致自身免疫相关的炎症、发病率和死亡率的显著减轻。在某些方面，施用PantId将导致与自身反应性B细胞在基础免疫病理学中的核心作用有关的自身免疫疾病症状的临床改善。更具体地，对于其中这些抗检查点自身反应性B细胞在自身免疫性疾病中起关键作用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗自身免疫性疾病或病症的PantId分子，其中自身反应性B细胞对免疫检查点受体、免疫检查点配体和/或免疫调节细胞因子有反应，所述分子包含：二、三、四或五个蛋白质、结构域或肽的分子嵌合体：/n其中所述蛋白质、结构域或肽中的第一个是免疫检查点受体、检查点配体或免疫调节细胞因子中的一种；和/n其中所述蛋白质、结构域或肽中的第二个是效应子。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170324 US 62/476,371;20170823 US 62/549,313;20171.一种用于治疗自身免疫性疾病或病症的PantId分子，其中自身反应性B细胞对免疫检查点受体、免疫检查点配体和/或免疫调节细胞因子有反应，所述分子包含：二、三、四或五个蛋白质、结构域或肽的分子嵌合体：
其中所述蛋白质、结构域或肽中的第一个是免疫检查点受体、检查点配体或免疫调节细胞因子中的一种；和
其中所述蛋白质、结构域或肽中的第二个是效应子。


2.根据权利要求1所述的PantId分子，其中所述蛋白质、结构域或肽中的第一个是免疫检查点受体。


3.根据权利要求2所述的PantId分子，其中所述免疫检查点受体是与配体结合并在白细胞或淋巴样组织相关细胞内引发信号传导的细胞内、跨膜或膜相关的蛋白。


4.根据权利要求3所述的PantId分子，其中白细胞或淋巴样组织相关细胞内的信号转导通过NF-κB、NFAT、JAK-STAT、PI-3K、PLC、PKC、cAMP-PKA、cGMP-PKG、MAPK、胱天蛋白酶、SMAD、Rho家族GTP酶、酪氨酸激酶或磷酸酶、脂质激酶或磷酸酶途径；或通过T和B细胞、自然杀伤(NK)细胞、树突状细胞(DC)、自然杀伤T(NKT)细胞、粒细胞(嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细胞)、单核细胞、巨噬细胞或淋巴组织相关细胞中的其他信号传导途径，介导免疫调节作用。


5.根据权利要求2所述的PantId分子，其中所述免疫检查点受体是以下之一：PD-1(序列038)；CD28(序列039)；CTLA-4(序列040)；ICOS(序列041)；BTLA(序列042)；杀死免疫球蛋白受体(KIR)，包括：KIR2DL1(序列043)、KIR2DL2(序列044)、KIR2DL3(序列045)、KIR2DL4(序列046)、KIR2DL5A(序列047)、KIR2DL5B(序列048)、KIR2DS1(序列049)、KIR2DS2(序列050)、KIR2DS3(序列051)、KIR2DS4(序列052)、KIR2DS5(序列053)、KIR3DL2(序列054)、KIR3DL3(序列055)和KIR3DS1(序列056)；LAG-3(序列057)；CD137(序列058)；OX40(序列059)；CD27(序列060)；CD40(序列061)；TIM-3(序列062)和其他T细胞免疫球蛋白以及包含1-结构域的(TIM)受体，包括TIM-1(序列063)、TIM-2(序列064)和TIM-4(序列065)；A2aR(序列066)；或者任何包含ITAM(基于免疫受体酪氨酸的活化基序，序列067)、ITIM(基于免疫受体酪氨酸的抑制基序，序列068)或ITSM(基于免疫受体酪氨酸的开关基序，序列069)基序、结构域或肽例如CD244(2B4，序列070)和TIGIT受体(序列071)的跨膜、外周膜、膜相关或胞质蛋白。


6.根据权利要求1所述的PantId分子，其中所述蛋白质、结构域或肽中的第一个包括免疫检查点配体。


7.根据权利要求6所述的PantId分子，其中所述免疫检查点配体是能够引发免疫检查点受体中信号传导的蛋白质、结构域或肽。


8.根据权利要求7所述的PantId分子，其中所述信号传导是反向信号传导，通过该反向信号传导，与检查点配体结合的检查点受体与表达配体的细胞信号传导相关联。


9.根据权利要求6所述的PantId分子，其中所述免疫检查点配体是源自以下任何一种的全部、部分或肽：PD-L1(序列072)和PD-L2(序列073)；CD80(序列074)和CD86(序列075)；B7RP1(序列076)；B7-H3(序列B7-H3)；B7-H4(序列B7-H4)；HVEM(序列079)；任何等位基因的MHC-I(序列080)和MHC-II(序列081)；CD137L(序列082)；OX40(序列083)；CD70(序列084)；GAL9(序列085)；或与包含ITAM；ITIM或ITSM基序的跨膜、外周膜、膜相关或胞质受体/蛋白结合的蛋白质、肽、脂质、聚糖、糖脂、糖蛋白、脂蛋白、核酸、核糖核蛋白或脱氧核糖核蛋白。


10.根据权利要求1所述的PantId分子，其中所述蛋白质、结构域或肽中的第一个是免疫调节细胞因子。


11.根据权利要求10所述的PantId分子，其中所述免疫调节细胞因子是能够在白细胞中引起信号传导的蛋白质、结构域或肽。


12.根据权利要求11所述的PantId分子，其中所述免疫调节细胞因子是白介素。


13.根据权利要求12所述的PantId分子，其中所述白介素(IL)是：IL-1家族的成员，包括IL-1α(序列086)、IL-1β(序列087)、IL-1Ra(序列088)、IL-33(序列089)、IL-18(序列090)、IL-36Ra(序列091)、IL-36α(序列092)、IL-36β(序列093)、IL-36γ(序列094)、IL-37(序列095)和IL-38(序列096)；IL-2(序列097)、IL-3(序列098)、IL-4(序列099)、IL-5(序列100)、IL-6(序列101)、IL-7(序列102)、IL-8(序列103)、IL-9(序列104)、IL-10(序列105)、IL-11(序列106)、IL-12(序列107)、IL-13(序列108)、IL-14(序列109)、IL-15(序列110)、IL-16(序列111)、IL-17(序列112)、IL-19(序列113)、IL-20(序列114)、IL-21(序列115)、IL-22(序列116)、IL-23(序列117)、IL-24(序列118)、IL-25(序列119)、IL-26(序列120)、IL-27(序列121)、IL-28(序列122)、IL-29(序列123)、IL-30(序列124)、IL-31(序列125)、IL-32(序列126)、或IL-35(序列127)。


14.根据权利要求10所述的PantId分子，其中所述免疫调节细胞因子是干扰素。


15.根据权利要求14所述的PantId分子，其中所述干扰素是I型、II型或III型干扰素。


16.根据权利要求10所述的PantId分子，其中所述免疫调节细胞因子是趋化因子。


17.根据权利要求16所述的PantId分子，其中所述趋化因子是C、CC、CXC或CX3C趋化因子。


18.根据权利要求10所述的PantId分子，其中所述免疫调节细胞因子是TNF受体超家族配体。


19.根据权利要求18所述的PantId分子，其中所述TNF受体超家族配体是OX40L、CD40L、TNF-α和CD70或4-1BBL之一。


20.根据权利要求10所述的PantId分子，其中所述免疫调节细胞因子是非经典的化学动力学剂或趋化剂。


21.根据权利要求20所述的PantId分子，其中所述非经典的化学动力学剂或趋化剂是Slit1、Slit2和Slit3之一。


22.根据权利要求1所述的PantId分子，其中所述效应子包含在白细胞——可选地T细胞和B细胞——中能够诱导凋亡、坏死、细胞凋亡、耐受或无反应的蛋白质、结构域、肽、聚糖、脂质、核酸、糖蛋白、脂蛋白、核糖核蛋白、脱氧核糖核蛋白、共价修饰的肽或小于10,000道尔顿的小分子或其组合或分子嵌合体。


23.根据权利要求22所述的PantId分子，其中所述效应子包含死亡受体配体，其包含CD95L(又名FasL，序列001)、TRAIL(又名Apo2L，序列002)或TWEAK(又名肿瘤坏死因子配体超家族成员12，序列003)。


24.根据权利要求22所述的PantId分子，其中所述效应子是修饰的细菌毒素。


25.根据权利要求24所述的PantId分子，其中所述修饰的细菌毒素是A-B毒素或自转运蛋白，用于在细胞内递送细胞毒性效应子，其中所述细胞毒性效应子可以是胱天蛋白酶、细菌毒素或其他酶。


26.根据权利要求22所述的PantId分子，其中所述效应子是NK活化受体配体。


27.根据权利要求26所述的PantId分子，其中所述NK活化受体配体包括结合NKG2D的MICA(序列023)或MICB(序列024)；结合NKG2D的ULBP1-6(序列025-030)、Rae-1(序列031)、MULT1(序列032)或H60(序列033)；DNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·格尔贝尔，M·斯皮克，J·埃博里斯，
申请(专利权)人：奥菲斯生物科学公司，
类型：发明
国别省市：美国;US