一种用于免疫功能调节的间充质干细胞药物及制备方法技术

本发明专利技术公开一种用于免疫功能调节的间充质干细胞药物，其含有脐带疏松结缔组织间充质干细胞LCMSCs，所述LCMSCs为从新生儿脐带内胎儿与母体连接界面的疏松结缔组织中提取未分化的原始间充质干细胞，所述LCMSCs是胚外中胚层来源的原始未分化的间充质干细胞。LCMSCs最大限度地保存了原始MSCs生物学特性，其归巢迁移、分化增殖潜力远较成体来源MSCs更强，集落形成单位是骨髓源MSCs的300倍，分泌的生长因子、营养因子最丰富，分泌的肝细胞生长因子是BMSCs的31.3倍，能突出表达多种抑癌基因，体外与多种肿瘤细胞共培养无肿瘤细胞分化，无体内成纤维瘤样分化，可高表达免疫调节因子HGF、TSG‑6、PGE2、MCP1、VEGFA、IL‑6、IL‑10、IDO、TGF‑β、sVCAM1等，纯度远优于成体及脐带、胎盘、羊膜等来源的MSCs，安全性高。

【技术实现步骤摘要】
一种用于免疫功能调节的间充质干细胞药物及制备方法
本专利技术涉及生物工程
，具体涉及一种用于免疫功能调节的间充质干细胞药物及制备方法。
技术介绍
当前缺血性心脏病、脑卒中、糖尿病、多种免疫性疾病及退行病等发病率、致残率、死亡率仍居高不下。新冠肺炎(COVID-2019)所致的严重肺损伤导致呼吸衰竭(ARDS)已夺去了数以万计人的生命。这是因为目前医学领域还缺乏针对上述疾病的特异有效且副作用小的治疗手段。上述疾病对现代医学提出了巨大的挑战。近年来，大量科学证据表明，具有多向分化及自我更新的间充质干细胞(MSCs)通过其旁/自分泌效应，发挥着免疫调节、抗炎症、再生血管、修复组织等作用，在冠心病、心肌梗死、心力衰竭、脑卒中、老年痴呆、多种自身免疫性疾病、骨关节疾病等的临床硏究中已显示了良好的效果与前景。尤其是，在近期COVID-2019疫情中，面对细胞因子风暴所致的大面积肺损伤坏死渗出，激素应用受到一定限制的情况下，具有独特免疫调节功能的MSCs发挥了重要的抗炎症、抑制过度免疫应激、修复肺组织、恢复肺表面活性物质等，起到了重要作用。...

【技术保护点】
1.一种用于免疫功能调节的间充质干细胞药物，其特征在于，其含有脐带疏松结缔组织间充质干细胞LCMSCs，所述LCMSCs为从新生儿脐带内胎儿与母体连接界面的疏松结缔组织中提取的未分化的原始间充质干细胞，该间充质干细胞是胚外中胚层来源的原始未分化的间充质干细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于免疫功能调节的间充质干细胞药物，其特征在于，其含有脐带疏松结缔组织间充质干细胞LCMSCs，所述LCMSCs为从新生儿脐带内胎儿与母体连接界面的疏松结缔组织中提取的未分化的原始间充质干细胞，该间充质干细胞是胚外中胚层来源的原始未分化的间充质干细胞。


2.根据权利要求1所述的用于免疫功能调节的间充质干细胞药物，其特征在于，所述药物为注射液，该注射液中还含有人血白蛋白，人血白蛋白在注射液中的浓度为0.9-1.1％。


3.根据权利要求2所述的用于免疫功能调节的间充质干细胞药物，其特征在于，所述注射液的规格为2mL/管，每管中细胞总数量为1.9～2.1×107；注射液以生理盐水配制。


4.根据权利要求1或2所述的用于免疫功能调节的间充质干细胞药物，其特征在于，所述间充质干细胞MSCs纯度为：所述间充质干细胞MSCs中，代表MSCs纯度的CD24+～CD108+细胞的百分比达70％以上，代表MSCs中杂质细胞的CD40+细胞占百分比≤20％。


5.一种用于免疫功能调节的间充质干细胞药物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括间充质干细胞的制备和药物的制备，所述间充质干细胞的制备过程包括：剥离脐带内疏松结缔组织，将剥离下来的疏松结缔组织采用连贯阶梯式培养法培养，该连贯阶梯式培养法包括结缔组织培养、细胞传代扩增培养、3D培养和低氧培养。


6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞的制备过程包括如下步骤：
S1:剥离脐带内疏松结缔组织：
所述疏松结缔组织为体蒂分化的黏液性结缔组织，包括脐带动脉、静脉周围，脐带动静脉之间的黏液性结缔组织；
S2:连贯阶梯式培养法获得原始间充质干细胞LCMSCs，具体包括：
S21:组织培养：将剥离下来的疏松结缔组织，剪成细块状，放入无菌培养瓶中贴壁培养，加入无血清细胞培养基，在35-37℃、体积分数为4-6％的二氧化碳、饱和湿度培养箱中培养；
S22:传代扩增培养：待细胞铺满瓶底80％后，弃培养基，加入磷酸盐缓冲液清洗细胞培养瓶底，弃清洗液，在培养瓶中加入0.125％胰蛋白酶消化0.5-2分钟，待细胞收缩后加入无血清细胞培养基终止消化，形成细胞悬液，把细胞悬液移入离心管中，在100-200g离心力下离心，弃上清，再加入无血清细胞培养基混匀，计数，按照每75cm2底面积的培养瓶接种0.75-0.85×106细胞的浓度接种到新的无菌细胞培养瓶中，放置在35-37℃、体积分数为4-6％的二氧化碳、饱和湿度培养箱扩增培养3-4天；
S23:3D培养：待细胞铺满瓶底90％后，弃培养基，加入磷酸盐缓冲液清洗细胞培养瓶底，弃清洗液，在培养瓶中加入0.12～0.13％胰蛋白酶消化0.5-2分钟，待细胞收缩后加入基无血清细胞培养基终止消化，形成细胞悬液，把细胞悬液移入离心管中，在100-200g离心力下离心，离心后弃上清，加入水凝胶培养基混匀，使细胞浓度为每毫升0.8-1×105细胞，此为水凝胶细胞悬液，在新的细胞培养瓶中加入水凝胶细胞悬液，每个培养瓶中接种细胞数量为0.8-1×106细胞，在培养瓶中加入交联剂，促进水凝胶形成胶胨状，在培养瓶中水凝胶液面上加入无血清细胞培养基，将含水凝胶细胞悬液的培养瓶放置于35-37℃、体积分数为4-6％的二氧化碳、饱和湿度培养箱扩增培养；3D培养6-7天后，细胞融合70-80％时加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：高连如，张宁坤，
申请(专利权)人：高连如，
类型：发明
国别省市：北京;11