一种利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法技术

本发明专利技术属于底栖动物鉴定技术领域，公开了一种利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法，包括以下步骤：1)首先采集环境沉积物样本，清洗后保存；2)向步骤1)保存的环境沉积物样本中加入无水乙醇进行浸提处理，处理一段时间后取混合均匀的浸提液，将所述浸出液进行真空离心，弃上清液，获得干燥的组织残渣，进行DNA提取；3)利用提取得到的DNA条形码片段进行扩增，得到扩增产物；4)将扩增产物进行测序与分析。本发明专利技术的方法将样品首先采用无水乙醇浸提，使底栖动物DNA均匀释放到溶液中，达到均质的状态，通过采集含有DNA样品的乙醇溶液，离心浓缩后进行DNA提取，可实现大范围环境样品的准确监测。

【技术实现步骤摘要】
一种利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法
本专利技术属于底栖动物鉴定
，具体涉及一种利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法。
技术介绍
淡水大型底栖动物是流域生态健康评价的重点监测对象之一，目前的监测流程主要为采集沉积物样本、人工挑拣、形态学鉴定，这一流程有着耗时长、人力成本高、需要专家具有较高的鉴定水准等局限性。通过提取沉积物样品中的DNA，通过PCR扩增的方式对沉积物的种类进行溯源的方式可以有效克服现有技术中利用形态学鉴定存在的耗时长，人力成本高，操作繁琐的缺陷。经检索，针对沉积物样品中生物的DNA提取方式，现有技术已有相关的申请案公开，如中国专利申请号为200510079754.1，授权公告日期为2008年12月3日的申请案公开了一种从海洋沉积物中同时提取微生物宏基因组DNA和总RNA的方法，包括将海洋沉积物用变性溶液处理，加入沙子振荡，加入蛋白酶和溶菌酶进行裂解，再加入SDS和PVPP溶液进行进一步裂解，加入萃取剂进行处理，萃取液用异丙淀，最后用核酸吸附树脂进行纯化。再如中国专利申请号为CN200610136本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n1)首先采集环境沉积物样本，清洗后保存；/n2)向步骤1)保存的环境沉积物样本中加入无水乙醇进行浸提处理，处理一段时间后取混合均匀的浸提液，将所述浸出液进行真空离心，弃上清液，获得干燥的组织残渣，进行DNA提取；/n3)利用提取得到的DNA条形码片段进行扩增，得到扩增产物；/n4)将步骤3)得到的扩增产物进行测序与分析。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)首先采集环境沉积物样本，清洗后保存；
2)向步骤1)保存的环境沉积物样本中加入无水乙醇进行浸提处理，处理一段时间后取混合均匀的浸提液，将所述浸出液进行真空离心，弃上清液，获得干燥的组织残渣，进行DNA提取；
3)利用提取得到的DNA条形码片段进行扩增，得到扩增产物；
4)将步骤3)得到的扩增产物进行测序与分析。


2.根据权利要求1所述的利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法，其特征在于：所述步骤1)将清洗后的样本在-20℃～-80℃冷冻保存，保存时间为1-3天。


3.根据权利要求1或2所述的利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法，其特征在于：所述步骤2)中浸提处理的时间为3～30天。


4.根据权利要求3所述的利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法，其特征在于：所述步骤2)中，按照1g沉积物换算为1ml的换算方式向沉积物样本中加入3～5倍体积的无水乙醇。


5.根据权利要求4所述的利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法，其特征在于：所述真空离心条件为：300～1000rpm条件下离心2～3小时。


6.根据权利要求5所述的利用环境沉积物样品监测淡水底栖动物的方法，其特征在于：步骤2)中使用OMEGATissue试剂盒对所述组织残渣进行DNA提取。

【专利技术属性】
技术研发人员：金珂，杨江华，张效伟，
申请(专利权)人：南京易基诺环保科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32