一种高通量筛选真核生物细胞与农药互作的靶点基因的方法技术

本发明专利技术涉及一种高通量筛选真核生物细胞与农药互作的靶点基因的方法，首先是构建真核生物CRISPR/Cas全基因组编辑载体文库，然后将构建好的载体库稳定转染真核生物细胞，构建真核生物全基因组编辑突变体细胞文库。然后取该细胞文库，均匀的分成两部分培养，收集并且抽提基因组DNA，分别用高通量测序法检测两组细胞的sgRNA丰度，根据两组细胞sgRNA丰度变化来筛选真核生物与农药互作的靶点基因。本发明专利技术的最大优点是在全基因组范围内筛选真核生物细胞与农药互作的靶点基因，能够最大限度的筛选真核生物细胞与农药互作的靶点基因，成本低，效率高，范围广。对筛选真核生物细胞与农药互作的靶点基因具有极大地意义。

【技术实现步骤摘要】
一种高通量筛选真核生物细胞与农药互作的靶点基因的方法
本专利技术属于基因编辑和高通量测序
，涉及一种高通量筛选真核生物细胞与农药互作的靶点基因的方法。
技术介绍
我国是一个农业大国，农业一直是国民经济的命脉。农药的使用，为现代农业生产带来了便利，极大的提升了农产品质量和产量。但也由于农药的广泛应用，导致农药残留污染土壤和水源，破坏农业生态系统的多样性，并且严重威胁到人类健康。于是，人们把更多的目光投向了无毒无害的生物源农药，但是，越来越多的实践发现，大家一贯认为低毒的生物源农药对环境中的多种非靶标生物均具有毒性。另一方面，昆虫对农药的耐受力增强而产生抗药性的现象也日渐突出。这不仅成为害虫防治的一大障碍，同时，害虫抗药性增强致使人们加大农药的使用剂量，对昆虫抗药性的遏制已经成为近年来农林业发展的重大课题。除此以外，农药也给诸如家蚕、蜜蜂等重要经济昆虫的生产带来了巨大威胁。具体到蚕桑产业，每年由于农药中毒造成大量减产，严重限制了蚕桑产业的发展，培育高抗农药的家蚕品种亟待解决。基因编辑是研究功能基因组的重要遗传操作技术，目前已经本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高通量筛选真核生物细胞与农药互作的靶点基因的方法，其特征在于，具体步骤如下：/n(1)构建转基因系统递送的真核生物CRISPR/Cas全基因组编辑载体文库；/n(2)将步骤(1)构建的载体文库稳定整合到真核生物细胞基因组上，得到一种真核生物CRISPR/Cas全基因组编辑细胞文库；/n(3)将步骤(2)所构建的细胞文库均匀分成两份，其中一份用含有农药的培养基培养作为实验组，另一份用不含农药的培养基培养作为对照组，然后同时将两组细胞收集，并分别抽提基因组DNA；/n(4)以步骤(3)抽提的全部基因组作为模板，设计引物扩增各组细胞的sgRNA片段，执行高通量测序，统计sgRNA丰度，筛选真...

【技术特征摘要】
1.一种高通量筛选真核生物细胞与农药互作的靶点基因的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)构建转基因系统递送的真核生物CRISPR/Cas全基因组编辑载体文库；
(2)将步骤(1)构建的载体文库稳定整合到真核生物细胞基因组上，得到一种真核生物CRISPR/Cas全基因组编辑细胞文库；
(3)将步骤(2)所构建的细胞文库均匀分成两份，其中一份用含有农药的培养基培养作为实验组，另一份用不含农药的培养基培养作为对照组，然后同时将两组细胞收集，并分别抽提基因组DNA；
(4)以步骤(3)抽提的全部基因组作为模板，设计引物扩增各组细胞的sgRNA片段，执行高通量测序，统计sgRNA丰度，筛选真核生物细胞与农药互作的靶点基因，靶点基因的筛选标准为p-value<0.05。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述真核生物为家蚕、果蝇、人，所述农药为有机磷类农药、生物碱类农药、菊酯类农药、生物源农药等。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：马三垣，常珈菘，夏庆友，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50