用于评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的标志物及其应用，属于细胞技术领域。所述标志物包括：CD4+的T细胞、CD8+的T细胞、Tfh细胞和Th细胞。上述标志物可以较精准的反映HBV感染患者的免疫功能状态，最后分析若判断免疫功能低下，则提示可能需要免疫干预，如通过药物、功能食品或生物治疗的方法提高机体的免疫功能，从而达到提高HBV感染患者治疗有效率的目的。

【技术实现步骤摘要】
用于评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的标志物及其应用
本专利技术涉及细胞
，特别是涉及一种用于评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的标志物及其应用。
技术介绍
肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是最常见的肝脏恶性肿瘤，占比高达约90％，从而严重威胁着人类的健康。乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染和非酒精脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)均是HCC发生的高危因素。在我国，引起HCC的一个主要因素即为HBV。目前，国内外研究证明HBV感染与病毒、肝脏微环境以及宿主抗病毒的免疫应答密切相关。其中免疫机制包括天然免疫、获得性免疫，在这个过程中极为重要。获得性免疫系统可分为细胞免疫和体液免疫，分别由T淋巴细胞和B淋巴细胞介导，T淋巴细胞则主要分为CD4+T细胞和CD8+T细胞，CD4+T细胞可在抗原刺激下产生细胞因子，发挥重要的免疫调节作用。效应性CD8+T细胞可通过杀伤病毒感染的肝细胞，或释放细胞因子的非杀伤性机制清除病毒。综上所述，HBV感染进程与患者机体免疫系统功能息息相关。但基于免疫系统的复杂性以及HBV疾病谱多样性，目前关于HBV感染的免疫学研究尚不明确，而在临床方面，HBV感染患者主要检查项为乙肝五项，其次则检测较为常见的化验指标，如血常规、电解质、肝功、肾功、凝血功能等，以及通过重要的指标病毒定量检测，来确定外周血液中是否存在明显的病毒复制。而究竟如何做到在HBV感染的整个疾病进程中更为系统且精准的评估HBV感染患者的免疫功能，也正是亟待解决的关键问题。目前文献报道的能检测免疫功能的方法有：1、通过免疫细胞受体(TCR)的多样性分析免疫功能，这种方法属于间接的方法，方法复杂，需要专门仪器设备，对分析人员要求极高，数据分析难度大，成本高，不利于推广应用；2、通过分析血液的血清中细胞因子水平，间接分析免疫功能，这种方法成本极高，需要专门仪器设备，操作难度高，对人员的技术水平要求高，不利于临床推广应用。迄今为止，市场上还没有能对HBV感染患者免疫细胞功能进行全面分析、检测的技术或产品，临床上缺乏一个详细的能量化的、快速的且耗费较低的免疫功能检测评估方案，即，目前还没有针对HBV感染患者的免疫细胞功能评价方法，更没有可供参考的参数。
技术实现思路
基于此，有必要针对上述问题，提供一种免疫细胞功能分析系统及应用，采用该分析系统对肝病患者进行分析，能够为临床对HBV感染患者后期治疗方案的调整提供可靠依据。一种用于评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的标志物，所述标志物包括：CD4+的T细胞、CD8+的T细胞、Tfh细胞和Th细胞。由于HBV感染与T细胞功能失调等密切相关，故专利技术主要针对T细胞进行功能检测。本专利技术对比分析了健康人样本(健康对照组)和肝病样本(患者组，可细分为HBV+HCC-组，HCC+HBV-组，HBV+HCC+组)的外周免疫功能，主要是对外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、NK细胞等免疫细胞的各项功能指标进行了分析，发现了9项免疫功能指标与该疾病具有高度相关性。比如，CD4+T细胞在HBV感染患者中显著上升，而CD8+T细胞则明显下降，这些指标与HBV感染患者疾病进程中免疫功能的发展变化均具有高度相关性。而前期研究显示，乙肝病毒的清除是依赖于T细胞活性的，T细胞反应低下的原因之一，是由于通过抑制Notch信号的激活而大量产生的调节性T细胞(Tregs)抑制了CD4/CD8T细胞。这其中指向的指标变化结果与上述分析结果相吻合，据此，可以上述标志物作为HBV感染患者的免疫功能指标。基于指标组合的设计性及精准性，本专利技术人又在上述9项免疫功能指标中进行了筛选，最终选定以上4项标志物作为检测指标，可用于HBV感染患者的辅助治疗及预后监测。在其中一个实施例中，所述CD4+的T细胞为CD3+和CD4+的免疫细胞，所述CD8+的T细胞为CD3+和CD8+的免疫细胞，所述Tfh细胞为CD3+、CD4+和CD185+的免疫细胞，所述Th细胞为CD3+、CD4+和CD185-的免疫细胞。在其中一个实施例中，所述标志物在乙型肝炎患者免疫细胞功能的评估中，所述CD4+的T细胞在T细胞中的占比参考值为40～67％，所述CD8+的T细胞在T细胞中的占比参考值为31～58％，所述Tfh细胞在CD4+的T细胞中的占比参考值为23～41.2％，所述Th细胞在CD4+的T细胞中的占比参考值为……本专利技术还公开了上述的标志物在诊断、治疗和/或预后评估乙型肝炎中的应用。本专利技术还公开了检测生物样本中上述的标志物的试剂在制备乙型肝炎患者免疫细胞功能评估试剂中的应用。本专利技术还公开了一种评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的试剂盒，包括有检测生物样本中上述的标志物的试剂。在其中一个实施例中，包括抗人CD3抗体，抗人CD4抗体，抗人CD8抗体和抗人CD185抗体。在其中一个实施例中，所述试剂盒用于流式细胞仪检测，所述抗人CD3抗体，抗人CD4抗体，抗人CD8抗体和抗人CD185抗体均为带荧光的抗人单克隆流式抗体，所述抗人单克隆流式抗体标记的荧光染料包括：FITC，VioGreen，PE/Cy7，PerCP/Cy5.5。在其中一个实施例中，所述生物样本为人外周血。本专利技术还公开了一种科研用途的乙型肝炎患者免疫细胞功能评估方法，包括以下步骤：取外周血，提取分离得到外周血单核细胞，与抗人CD3抗体，抗人CD4抗体，抗人CD8抗体和抗人CD185抗体进行孵育，随后以流式细胞仪进行检测，得到上述的标志物的含量，对免疫细胞功能进行评估。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的一种用于评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的标志物，可以较精准的反映HBV感染患者的免疫功能状态，若分析判断免疫功能低下，则提示可能需要免疫干预，如通过药物、功能食品或生物治疗的方法提高机体的免疫功能，从而达到提高HBV感染患者治疗有效率的目的。本专利技术的用于评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的标志物适用于所有HBV感染患者，从而在免疫细胞功能状态的角度上，精准评估HBV感染患者现阶段免疫功能状态是否适合某种临床治疗方案以及在选择更适宜治疗方案上提供一定的可靠依据。且将上述标志物用于评估乙型肝炎患者免疫细胞功能中，具有专属性好，特异性强，准确度高的优势，对免疫细胞亚群的测定精准度可达90％以上。因此，采用本专利技术提供的标志物以及方法，能够简便，准确，高效地评价HBV感染患者免疫细胞功能的状态。对于提高HBV感染患者治疗有效率(即辅助治疗)，以及后期治疗方案的制定都具有重要的临床意义。本专利技术的评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的试剂盒，通过流式细胞仪检测4种免疫功能指标(biomarker)，虽然也需要专门的仪器设备，但优势极其显著，如测得的数据直接反映了外周免疫细胞的功能，并且具有操作简单，对人员要求相对较低，检测成本低的优势，利于推广应用。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的标志物，其特征在于，所述标志物包括：CD4+的T细胞、CD8+的T细胞、Tfh细胞和Th细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于评估乙型肝炎患者免疫细胞功能的标志物，其特征在于，所述标志物包括：CD4+的T细胞、CD8+的T细胞、Tfh细胞和Th细胞。


2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述CD4+的T细胞为CD3+和CD4+的免疫细胞，所述CD8+的T细胞为CD3+和CD8+的免疫细胞，所述Tfh细胞为CD3+、CD4+和CD185+的免疫细胞，所述Th细胞为CD3+、CD4+和CD185-的免疫细胞。


3.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物在乙型肝炎患者免疫细胞功能的评估中，所述CD4+的T细胞在T细胞中的占比参考值为40～67％，所述CD8+的T细胞在T细胞中的占比参考值为31～58％，所述Tfh细胞在CD4+的T细胞中的占比参考值为23～41.2％，所述Th细胞在CD4+的T细胞中的占比参考值为22.6％～39.6％。


4.权利要求1-3任一项所述的标志物在诊断、治疗和/或预后评估乙型肝炎中的应用。


5.检测生物样本中权利要求1-3任一项所述的标志物的试剂在制备乙型肝炎患者免疫细胞功能评估试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：高伊昉，何晓顺，窦浪，黄文勇，何文婧，李佩玲，叶倩雨，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东;44