一种耐盐米曲霉及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，具体涉及一种耐盐米曲霉及其应用。所述的耐盐米曲霉保藏名称为米曲霉TN‑37，已于2019年12月19日，保藏至中国典型培养物保藏中心，分类命名为米曲霉(Aspergillus oryzae)，保藏编号为CCTCC NO：M20191067；米曲霉TN‑37单独应用于酱油渣的生物处理，或与德巴利汉逊酵母、海洋酵母混合应用于酱油渣的生物处理。本发明专利技术的耐盐米曲霉，具有良好的耐盐性和产酶特性，其对酱油渣进行生物处理，能够有快速消除异味，同时改善酱油渣中胞外酶的种类，提高酱油渣的酶活性，将处理后的酱油渣添加到饲料中，可以有效提高饲料的利用率。

【技术实现步骤摘要】
一种耐盐米曲霉及其应用
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种耐盐米曲霉及其应用。
技术介绍
酱油渣又称酱油渣，是制作酱油后的残渣，其营养丰富，粗蛋白含量约为25％，粗脂肪9.7％、粗纤维13.5％、灰分10.5％，其中食盐含量较高，约10％，有的高达25％，还含有丰富的异黄酮及高生物活性物质等(阎杰，宋光泉，值得开发的“废物”一酱油渣，中国调味品，2006年10月，10:14-17)。但是酱油渣水分含量大，极易腐败变质，长途运输困难，常常怪味扰民。正常生产的企业每天都要产生大量的废渣，需要立刻处理，否则环境污染极其严重，特别是夏季，处理不及时会产生强烈刺鼻的酸臭味，熏得周围的居民头晕、恶心。生产厂家常以低价售给农民作搭配饲料利用，处理不当会造成环境污染，而且没有处理的酱油渣动物适口性差，其中食盐含量较高，长期饲喂酱油渣或一次喂量过多，极易引起食盐中毒，轻者进食锐减、体重减轻，重则动物死亡。因此，酱油渣不宜直接作为动物饲料直接应用。对于酱油渣的处理，通过烘干或进一步提取活性物质的方法，成本高，投入大，收益相对较小，还容易造成环境问题，而利用微生物对酱油渣进一步处理，经济方便，节能环保，性价比高。对于微生物处理酱油渣，目前主要针对酱油渣残余蛋白的有效利用角度，如开发做饲料、栽培用复合基质、蛋白质酶解再利用三个方面进行研究，而开发饲料研究较多。但由于酱油渣中的盐分含量高，严重影响微生物的生长，一般需要添加大量的辅料，如麸皮、饼粕等，稀释降低含盐量，再经高温灭菌，作为发酵的基质，然后再外加菌种发酵，从而使粗纤维下降，适口性改善，也有对酱油渣直接发酵，但发酵时间较长，一般需要几周的发酵周期。目前酱油渣的生物处理，研究主要集中在怎样利用其中的蛋白上，而对酱油渣的异味造成的环境污染问题关注严重不足。为了降低高盐对微生物生长的抑制作用，需要大量添加价值高的营养物质，还要经过灭菌处理后再发酵，大大增加了成本，处理后的产物也比较单一。
技术实现思路
为了解决以上技术问题，本专利技术提供一种耐盐米曲霉，其对酱油渣进行生物处理，能够有快速消除异味，同时改善酱油渣中胞外酶的种类，提高酱油渣的酶活性；本专利技术还提供其应用。本专利技术所述的耐盐米曲霉，该菌株的保藏名称为米曲霉TN-37，已于2019年12月19日，保藏至中国典型培养物保藏中心，分类命名为米曲霉(Aspergillusoryzae)，保藏编号为CCTCCNO：M20191067。米曲霉TN-37是从内蒙古自治区呼和浩特市土默特左旗的土壤中分离(北纬40.6197，东经110.7988)。所述米曲霉TN-37的ITS序列如SEQIDNO.1-SEQIDNo.6所示。在NCBI网站上，将将扩增的ITS的核苷酸序列用BLAST在GenBank数据库中查找和比对同源或相似的核苷酸序列。对比结果显示，此序列与登录号为MK503967、MN421000、MN410607等覆盖率100％，相似度达到100％。ITS序列在曲霉属真菌中，不能很好地区分到种，只能鉴定到群(group，许多相似的种组成的群)。而要鉴定到种，需要根据微管蛋白Tubulin基因(Ben)、钙调蛋白CAM基因、RNA聚合酶结合蛋白RPB2基因综合鉴定。将所得序列与GenBank数据库中的核苷酸序列进行Blastn比对，从GenBank数据库中下载相似的序列，通过Bioedit对三种序列分别进行排列后校正，然后将三种合并为一个序列，采用PAUP4.0b10软件的非加权简约法进行系统树的构建。通过1000次的bootstrap评估系统树分支的稳定性。我们以Aspergillusmuricatus作为外群，构建系统发育树，分离到的菌株TN-37与Aspergillusoryzae聚类在一起，而与A.flavus明显区分开来，boostrap分析得到98％的支持。菌株TN-37的形态特征为：在PDA培养基上生长迅速，菌落每天生长达到1.2厘米，气生菌丝发达，菌落边缘白色，菌落上产生黄绿色分生孢子。分生孢子头放射状，直径150-300μm。分生孢子梗2mm左右。分生孢子梗直立，分生长约0.1-2mm，近顶囊处直径达12-25μm，壁较薄，粗糙。顶囊烧瓶形，直径通常40-50μm。小梗一般为单层，12-15μm，偶尔有双层，也有单、双层小梗同时存在于一个顶囊上。分生孢子幼时洋梨形或卵圆形，成熟时大多变为球形或近球形，一般4.5μm，粗糙或近于光滑。形态特征与米曲霉形态特征相符。根据生物学的形态特征及其ITS序列鉴定，本专利技术提供的菌株为米曲霉菌种。本专利技术所述的米曲霉TN-37具有良好的耐盐性和产酶特性，其可以应用于酱油渣的生物处理，米曲霉TN-37接种量为4×105-2×106CFU/mL，处理温度为20-30℃。本专利技术所述的米曲霉TN-37也可以与德巴利汉逊酵母(Debaryomyceshansenii，Y9)、海洋酵母(Kodamaeaohmeri，Y155)混合应用于酱油渣的生物处理，米曲霉TN-37、德巴利汉逊酵母、海洋酵母的接种量相同，均为4×105-2×106CFU/mL，处理温度为20-30℃。上述酱油渣的盐含量为10-25wt％。与现有技术相比，本专利技术有以下有益效果：(1)本专利技术的米曲霉TN-37具有良好的耐盐性和产酶性能，单独应用于高盐含量的酱油渣的生物处理，能够快速消除异味，同时改善酱油渣中胞外酶的种类，提高酶活性；(2)本专利技术的米曲霉TN-37与德巴利汉逊酵母、海洋酵母混合应用于高盐含量的酱油渣的生物处理，处理后的酱油渣带有一定的香味，酱油渣的蛋白酶活性、纤维酶活性、淀粉酶活性和植酸酶活性大大提高，将处理后的酱油渣添加到饲料中，可以有效提高饲料的利用率。附图说明图1为米曲霉菌株TN-37的形态特征图；图1中：A、在直径6厘米的PDA上生长5天的菌落特征；B、分生孢子；C、生长在次生孢子梗上的分生孢子；D、分生孢子梗顶端和次生分生孢子梗；标尺＝10μm；图2为米曲霉菌株TN-37与曲霉属flavus组中相关种类的聚类分析图；图3为不同含盐量的YPD培养基上米曲霉菌株TN-37的生长情况图；图3中：M1-M6分别是米曲霉菌株Mi在含盐量分别为6％、8％、10％、12％、14％、16％的YPD培养基上的菌落形态；T1-T6：分别是米曲霉菌株TN-37在含盐量分别为6％、8％、10％、12％、14％、16％的YPD培养基上的菌落形态；图4为米曲霉菌株TN-37分别和德巴利汉逊酵母(Debaryomyceshansenii)、海洋酵母(Kodamaeaohmeri)在6％NaCl的YPD培养基上25℃共培养5天的生长情况图；图4中：Y9为Debaryomyceshansenii，Y155为Kodamaeaohmeri；图5为在5％含盐量的条件下，不同含盐量培养基上的蛋白酶活性检测；图5中：M1-M5分别是米曲霉菌株Mi在含盐量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种耐盐米曲霉，其特征在于：该菌株的保藏名称为米曲霉TN-37，保藏编号为CCTCCNO：M20191067。/n

【技术特征摘要】
1.一种耐盐米曲霉，其特征在于：该菌株的保藏名称为米曲霉TN-37，保藏编号为CCTCCNO：M20191067。


2.根据权利要求1所述的耐盐米曲霉，其特征在于：该菌株的ITS序列如SEQIDNO.1-SEQIDNo.6所示。


3.一种权利要求1所述的耐盐米曲霉的应用，其特征在于：米曲霉TN-37单独应用于酱油渣的生物处理。


4.一种权利要求1所述的耐盐米曲霉的应用，其特征在于：米曲霉TN-37与德巴利汉逊酵母、海洋酵母混合应用于酱油渣的生物处理。

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪凯，李洪涛，晁伯成，高嘉慧，
申请(专利权)人：山东巧媳妇食品集团有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37