新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡，包括样品垫、结合垫、分析膜以及吸收垫；所述的结合垫上包被有标记物标记的新布尼亚病毒重组抗原；所述的分析膜上设置有第一检测线和第二检测线，其中，所述的第一检测线上包被有抗人IgG，所述的第二检测线上包被有抗人IgM。本发明专利技术采用免疫层析技术，可以实现新布尼亚病毒IgG和IgM的同时快速免疫分析。

【技术实现步骤摘要】
新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡及其制备方法
本专利技术涉及一种新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡及其制备方法。
技术介绍
布尼亚病毒(Bunyavirus)是具球形、有包膜和分节段负链RNA的1目病毒。因首先从乌干达西部的布尼亚韦拉分离到本目而得名。代表种-布尼亚韦拉病毒。直径90～100纳米，从包膜伸出许多糖蛋白突起，内有3个螺旋对称的核壳，分别含大(L)、中(M)、小(S)3个RNA节段，其总分子量为(6～7)×106。多数具有3种主要的病毒粒蛋白质。，病毒粒成熟时芽生细胞高尔基区表面光滑的小泡内或其附近。其中S片段属于双义RNA，分别编码核蛋白(nucleocapsidprotein，NP)和非结构蛋白。在布尼亚病毒感染的临床病例中，病毒NP是主要的免疫原，患者体内相应的抗体水平较高。发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)是布尼亚病毒的一个新发现病毒种类，简称新布尼亚病毒。该病毒感染人体引起的发热伴血小板减少综合征(SFTS)以发热、血小板和白细胞减少为主要临床表现，多数病例有乏力，消化道症状，肌肉酸痛和淋巴结肿大等临床症状。病情危重者可发生休克、呼吸衰竭、弥漫性血管内凝血等多脏器功能衰竭而死亡。SFTS是一种新发出血热，为急性传染性疾病，SFTS感染的全国平均死亡率为5.3％在部分流行地区该病的病死率高达30％。当人体受病毒侵害时，人体免疫系统启动应答机制，血液浆细胞产生抗体，根据结构的不同将免疫球蛋白分为五种，IgM、IgA、IgG、IgD和IgE。其中，IgM是胎儿合成的第一种Ig，主要存在于生物体血液中，对防止菌血症起主要作用，IgM抗体是免疫应答中首先分泌的抗体，一经感染快速产生，经过一段时间，IgM抗体量逐渐减少而消失，IgM占血清免疫球蛋白总量的5％～10％，IgM阳性可作为病毒早期感染的诊断指标。因此，新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测有助于新布尼亚病毒感染的诊断。目前新布尼亚病毒检测方法主要采用胶体金法、酶联免疫法和PCR-荧光探针法。申请号201711468267.3公开了用胶体金法测试新布尼亚病毒IgG、IgM，该专利可以同时测定新布尼亚病毒IgG、IgM，但是仅是定性，且胶体金检测灵敏度仍有待提高。申请号201210121489.9公开了用酶联免疫法测试新布尼亚病毒IgM，该专利仅测试新布尼亚病毒IgM，因此其检测结果仅针对新布尼病毒的早期感染情况进行评估，且酶联免疫法操作繁琐，特异性和灵敏性也有待提高。PCR-荧光探针法灵敏度和特异性都比较好，但检测物为病毒RNA，使用PCR-荧光探针法无法得到新布尼亚病毒IgG、IgM半定量结果，而且一般耗时较长，虽可同时检测较多样本，但需要大型仪器，检测过程复杂步骤多。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡及其制备方法，该试剂卡可以同时对新布尼亚病毒IgG、IgM含量进行半定量检测，检测灵敏度高，特异性好，并且操作简单、快捷。为了达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术一方面提供一种新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡，包括样品垫、结合垫、分析膜以及吸收垫；其中，所述的结合垫上包被有标记物标记的新布尼亚病毒重组抗原；所述的分析膜上设置有第一检测线和第二检测线，其中，所述的第一检测线上包被有抗人IgG，所述的第二检测线上包被有抗人IgM。本专利技术中的标记物为易测定且具有高度敏感性的物质，优选地，所述的标记物为荧光素、磷光素、荧光微球、磷光微球、磁性微球、发光底物、量子点中的一种或多种。优选地，所述的标记物的粒径为纳米级。优选地，所述的抗人IgG抗体和所述的抗人IgM抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。进一步优选地，所述的抗人IgG抗体和所述的抗人IgM抗体为单克隆抗体。优选地，所述的新布尼亚病毒重组抗原为真核表达和/或原核表达。进一步优选地，所述的新布尼亚病毒重组抗原为真核表达。优选地，所述样品垫和所述的结合垫采用玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜或纤维素滤纸或无纺布。优选地，所述的分析膜材采用硝酸纤维素膜或者尼龙膜。优选地，所述的分析膜上还设置有质控线。本专利技术中，所述的结合垫上还包被有标记物标记的羊抗鸡IgY，所述的质控线上包被有抗鸡IgY。优选地，所述的试剂卡采用荧光免疫分析仪进行检测或通过肉眼判读。荧光免疫层析法灵敏度高，特异性好，能半定量检测到痕量的新布尼亚病毒IgG抗体和新布尼亚病毒IgM抗体，因而有较大的技术优势。优选地，所述的试剂卡的长度为5～10cm，宽度为2～8mm。本专利技术的新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡可以对样本直接进行新布尼亚病毒IgG、IgM检测，也可以将样本稀释后加样，也可以是先加样本，然后再加稀释液进行检测。所述的样本包括血清、血浆、全血和末梢血样本。本专利技术的另一个方面是提供一种所述的新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡的制备方法，包括如下步骤：(1)制备标记物标记的新布尼亚病毒重组抗原，其中，所述的标记物标记的新布尼亚病毒重组抗原的浓度为0.05mg/mL～5mg/mL；(2)将步骤(1)制得物按照0.25～15μL/cm喷涂在所述的结合垫上；(3)制备浓度独立为0.1～5mg/mL的抗人IgG和抗人IgM，然后用点膜仪以0.25～4.0μL/cm的喷量喷涂在分析膜材上分别形成所述的第一检测线和所述的第二检测线；(4)将所述的样品垫、所述的结合垫、所述的分析膜以及所述的吸收垫组装在底板上制得所述的试剂卡。本专利技术的制备方法中，在步骤(1)中可同时制备标记物标记的羊抗鸡IgY，并按步骤(2)喷涂在结合垫上，在步骤(3)中制备抗鸡IgY溶液并使用抗鸡IgY溶液在分析膜上形成质控线。优选地，所述的底板可为PVC或其他替代板材。本专利技术的检测原理为：基于免疫层析技术，采用捕获法原理：样本(血清/血浆/全血/末梢血)加入试剂卡后，样本中待测物(IgG抗体、IgM抗体)分别与结合垫上的新布尼亚病毒重组抗原微球荧光探针结合形成复合物(即待测物-抗原纳米微球荧光探针复合物)，并通过毛细管作用层析至分析膜上与包被的二抗(两条检测线分别包被的二抗是抗人IgM抗体和抗人IgG抗体)形成复合物，即二抗-待测物-抗原纳米微球荧光探针复合物(T线)。另外，结合垫上的质控标记物同样通过毛细管作用层析至分析膜上与包被的质控线抗体形成控制线(C线)。当检测到样本中含有新布尼亚病毒IgG、IgM抗体时，含量越高信号越强，当无法检测到样本中新布尼亚病毒IgG、IgM抗体时，检测结果显示为阴性。使用本专利技术的新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡，可以简化操作步骤，减少样本用量，节约时间和成本；并且可检样本种类多，包含血清、血浆、全血和末梢血样本，无需对样本进行前处理，操作简单，方便快捷。由于采用上述技术方案，本专利技术与现有技术相比具有如下优点：本专利技术采用免疫层析技术，可以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡，其特征在于：包括样品垫、结合垫、分析膜以及吸收垫；所述的结合垫上包被有标记物标记的新布尼亚病毒重组抗原；所述的分析膜上设置有第一检测线和第二检测线，其中，所述的第一检测线上包被有抗人IgG，所述的第二检测线上包被有抗人IgM。/n

【技术特征摘要】
1.一种新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡，其特征在于：包括样品垫、结合垫、分析膜以及吸收垫；所述的结合垫上包被有标记物标记的新布尼亚病毒重组抗原；所述的分析膜上设置有第一检测线和第二检测线，其中，所述的第一检测线上包被有抗人IgG，所述的第二检测线上包被有抗人IgM。


2.根据权利要求1所述的联合检测试剂卡，其特征在于：所述的标记物为荧光素、磷光素、荧光微球、磷光微球、磁性微球、发光底物、量子点中的一种或多种。


3.根据权利要求1所述的联合检测试剂卡，其特征在于：所述的新布尼亚病毒重组抗原为真核表达和/或原核表达。


4.根据权利要求1所述的检测试剂卡，其特征在于：所述的抗人IgG和所述的抗人IgM为单克隆抗体和/或多克隆抗体。


5.根据权利要求1所述的检测试剂卡，其特征在于：所述的样品垫和所述的结合垫采用玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜或纤维素滤纸或无纺布；所述的分析膜材采用硝酸纤维素...

【专利技术属性】
技术研发人员：何爱民，陆一泓，于利平，
申请(专利权)人：光景生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32