一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法，其中，一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测条的制备方法，包括以下步骤：S1：制备反应膜；S2：制备金结合物垫；S3：切割装配，反应膜上包被甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原和肺炎衣原体抗原形成六条检测线，反应膜上包被山羊抗鼠IgG多克隆抗体形成质控线。本发明专利技术提供的一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测试剂盒可以同时检测样本中的甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、肺炎支原体病毒和肺炎衣原体病毒六种呼吸道病毒，具有操作简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法
本专利技术是一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法，属于体外诊断

技术介绍
呼吸道感染(Respiratorytractinfection，RTI)是人类最常见的一类疾病，可以在任何性别、年龄和地域中发生，是全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统器官所引起的感染性疾病，临床上根据感染发生的部位常分为上呼吸道感染和下呼吸道感染。其中最常见的病菌包括甲型/乙型流感病毒、呼吸道腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体和肺炎衣原体六种呼吸道疾病病原体。如何快速、准确的对呼吸道感染病原体进行检测，通过提高早期诊断率和扩大病原体检测应用范围，避免不必要的抗生素滥用，提高早期治愈率，防止病情恶化和加强呼吸道传染病防控是目前临床亟待解决的问题。目前，临床实验室对呼吸道感染病原体检测的方法有多种，主要有培养法(包括细菌的分离培养和病毒的组织细胞培养)、酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术、利用PCR扩增技术的分子生物学诊断、基因芯片技术和快速胶体金检测等方法。经临床应用表明，不同的检测方法虽然都有一定的优点，但也存在着一定的局限性，快速区别出感染的病原体类型非常困难。鉴于以上方法的不足，有必要开发出一种操作简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高，可以多通道同时检测多种呼吸道病原体，并且能够快速区别出感染的病原体类型的检测试剂盒。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提供一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题，本专利技术具有操作简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高，可以多通道同时检测六种呼吸道病原体IgM抗体，快速区别出感染的病原体类型的优点。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测条的制备方法，包括以下步骤：S1：制备反应膜S1.1：将甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原和山羊抗鼠IgG多克隆抗体稀释至一定浓度；S1.2：将稀释后的甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原溶液喷涂至反应膜上分别形成第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线、第五检测线、第六检测线；S1.3：将稀释后的山羊抗鼠IgG多克隆抗体溶液喷涂在反应膜上形成质控线，干燥备用；S2：制备金结合物垫S2.1：制备胶体金标记的鼠抗人IgM单克隆抗体溶液；S2.2：将胶体金标记的鼠抗人IgM单克隆抗体溶液调整至合适浓度，浸泡金结合物垫，铺金，干燥备用；S3：切割装配将反应膜、金结合物垫、粗纤维滤纸和样品垫装配至反应板上，切割形成检测条。采用上述方案，在反应膜上包被甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原和肺炎衣原体抗原形成六条检测线，用于检测六种呼吸道病原体IgM抗体，从而判断感染的病原体类型，在反应膜上包被和山羊抗鼠IgG多克隆抗体形成质控线，用于判断检测结果的有效性，将鼠抗人IgM单克隆抗体与胶体金偶联，从而将鼠抗人IgM单克隆抗体进行标记。优选的，步骤S1.1中，稀释前的甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原、山羊抗鼠IgG多克隆抗体溶液浓度分别为2.0-10.0mg/mL、2.0-10.0mg/mL、2.0-10.0mg/mL、2.0-10.0mg/mL、2.0-10.0mg/mL、2.0-10.0mg/mL、4.0-10.0mg/mL，稀释后的甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原、山羊抗鼠IgG多克隆抗体溶液浓度分别为1.0mg/mL、1.0mg/mL、1.0mg/mL、1.0mg/mL、1.0mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL。采用上述方案，检测呼吸道病原体IgM抗体的准确性和灵敏度高。优选的，步骤S1.2中，反应膜为硝酸纤维素膜。采用上述方案，有利于滴加的样本在反应膜内流动，从而快速检测出呼吸道病原体的类型。优选的，步骤S2.1中，胶体金标记的鼠抗人IgM单克隆抗体溶液的制备方法包括以下步骤：(1)使用0.1M碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.5-9.0；(2)加入60.0μg/mL鼠抗人IgM单克隆抗体，搅拌40min；(3)加入10％牛血清白蛋白溶液至溶液最终浓度为1％，搅拌15min；(4)12000rpm/min，4℃，离心15min，弃去上清液；(5)加入原体积的1/2体积的胶体金结合物稀释液，其中原体积以胶体金体积计算。优选的，步骤(1)中，PH值为8.5。优选的，步骤(5)中，胶体金结合物稀释液的制备方法为：将5.372g磷酸氢二钠、0.78g磷酸二氢钠、5.0g牛血清白蛋白、8.5g氯化钠和0.5g酪蛋白溶于1L去离子水中，搅拌均匀获得。采用上述方案，胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与鼠抗人IgM单克隆抗体的正电荷通过静电作用结合，这种结合不影响鼠抗人IgM单克隆抗体的生物特性，牛血清蛋白溶液作为稳定剂，能够使胶体金与鼠抗人IgM单克隆抗体的结合的更牢固。本专利技术提供了一种由上述制备方法制得的呼吸道病原体IgM抗体联合检测条，包括样品垫、金结合物垫、反应膜、反应板和粗纤维滤纸，所述样品垫、金结合物垫、反应膜、反应板和粗纤维滤纸依次搭接组成。采用上述方案，设置第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线、第五检测线和第六检测线分别用于检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、肺炎支原体和肺炎衣原体的病原体IgM抗体，设置质控线用于判断检测结果是否有效，该检测条可以多通道同时检测六种呼吸道病原体IgM抗体，快速区别出感染的病原体类型，操作简单，使用方便。本专利技术提供了一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测卡，包括上述检测条和放置检测条的卡体，所述卡体上设置有样品孔和检测孔，样品孔对准样品垫的位置，检测孔对准六条检测线和六条质控线的位置。采用上述方案，样品孔用于滴加样本，检测孔用于观察检测线和质控线的变化。本专利技术提供了一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测试剂盒，包括上述检测卡和放置检测卡的盒体。优选的，还包括取样滴管和样本稀释液，样本稀释液为磷酸盐缓冲液。采用上述方案，检测卡放置在试剂盒中，检测时本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：制备反应膜(4)/nS1.1：将甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原和山羊抗鼠IgG多克隆抗体稀释至一定浓度；/nS1.2：将稀释后的甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原溶液喷涂至反应膜(4)上分别形成第一检测线(6)、第二检测线(7)、第三检测线(8)、第四检测线(10)、第五检测线(11)、第六检测线(12)；/nS1.3：将稀释后的山羊抗鼠IgG多克隆抗体溶液喷涂在反应膜(4)上形成质控线(9)，干燥备用；/nS2：制备金结合物垫(3)/nS2.1：制备胶体金标记的鼠抗人IgM单克隆抗体溶液；/nS2.2：将胶体金标记的鼠抗人IgM单克隆抗体溶液调整至合适浓度，浸泡金结合物垫(3)，铺金，干燥备用；/nS3：切割装配/n将反应膜(4)、金结合物垫(3)、粗纤维滤纸(5)和样品垫(2)装配至反应板(1)上，切割形成检测条。/n

【技术特征摘要】
1.一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：制备反应膜(4)
S1.1：将甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原和山羊抗鼠IgG多克隆抗体稀释至一定浓度；
S1.2：将稀释后的甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原溶液喷涂至反应膜(4)上分别形成第一检测线(6)、第二检测线(7)、第三检测线(8)、第四检测线(10)、第五检测线(11)、第六检测线(12)；
S1.3：将稀释后的山羊抗鼠IgG多克隆抗体溶液喷涂在反应膜(4)上形成质控线(9)，干燥备用；
S2：制备金结合物垫(3)
S2.1：制备胶体金标记的鼠抗人IgM单克隆抗体溶液；
S2.2：将胶体金标记的鼠抗人IgM单克隆抗体溶液调整至合适浓度，浸泡金结合物垫(3)，铺金，干燥备用；
S3：切割装配
将反应膜(4)、金结合物垫(3)、粗纤维滤纸(5)和样品垫(2)装配至反应板(1)上，切割形成检测条。


2.根据权利要求1所述的一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测条的制备方法，其特征在于，步骤S1.1中，稀释前的甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原、山羊抗鼠IgG多克隆抗体溶液浓度分别为2.0-10.0mg/mL、2.0-10.0mg/mL、2.0-10.0mg/mL、2.0-10.0mg/mL、2.0-10.0mg/mL、2.0-10.0mg/mL、4.0-10.0mg/mL，稀释后的甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、呼吸道腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原、山羊抗鼠IgG多克隆抗体溶液浓度分别为1.0mg/mL、1.0mg/mL、1.0mg/mL、1.0mg/mL、1.0mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL。


3.根据权利要求1所述的一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测条的制备方法，其特征在于，步骤S1.2...

【专利技术属性】
技术研发人员：于晓永，周晟，
申请(专利权)人：天津健博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12