一种快速检测血浆中头孢克肟浓度的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测血浆中头孢克肟浓度的方法，包括如下步骤：（1）血浆样品前处理：向血浆样品中加入内标溶液和乙腈，涡流振荡，离心，取出上清转移至96孔板中，进行LC‑MS/MS分析；（2）色谱分离：以含0.1%甲酸和5 mM醋酸铵的水溶液作为流动相A，以含0.5%甲酸的乙腈作为流动相B，流动相A:流动相B=50：50；等度洗脱，洗脱时间2.4min；（3）质谱检测。本发明专利技术检测方法灵敏度较高，能够定量的最低浓度可达到10.00 ng/mL。本发明专利技术适合头孢克肟胶囊生物等效性或人体药动学研究中使用。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测血浆中头孢克肟浓度的方法
本专利技术涉及药物分析
，具体涉及一种快速检测血浆中头孢克肟浓度的方法。
技术介绍
头孢克肟（Cefixime）是可口服的第三代头孢菌素类抗生素,临床上应用于敏感菌引起的肺炎、支气管炎、泌尿道感染、淋病、胆囊炎、胆管炎、猩红热、中耳炎、副鼻窦炎等。目前，测定头孢克肟的常用方法主要有HPLC法、化学发光法、紫外光谱法等；但这些方法均存在灵敏度低、专属性差以及操作繁琐费时等缺点。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种快速检测血浆中头孢克肟浓度的方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种快速检测血浆中头孢克肟浓度的方法，包括如下步骤：（1）血浆样品前处理：向血浆样品中加入内标溶液和乙腈，涡流振荡，离心，取出上清转移至96孔板中，进行LC-MS/MS分析；（2）色谱分离：以含0.1%甲酸和5mM醋酸铵的水溶液作为流动相A，以含0.5%甲酸的乙腈作为流动相B，流动相A:流动相B=50：50；等度洗脱，洗脱时间2.4min；（3）质谱检测：电喷雾电离源；检测方式为正离子；喷射电压5500V；Gas1和Gas2压力分别为65和65psi；扫描模式为+MRM；用于定量分析离子对：CFXm/z454.2®285.2，CE20eV，DP60V，CFX-13C,15N2m/z457.2®288.2，CE22eV，DP60V；扫描时间为200ms。优选的，步骤（1）中，所述内标溶液为200ng/mL的CFX-13C,15N2溶液。优选的，步骤（1）中，所述血浆样品、内标溶液和乙腈加入的体积比为1：1：4。优选的，步骤（1）中，涡流振荡时间2min，离心转速3900rpm，离心时间10min。优选的，步骤（1）中，取出上清100µL转移至96孔板中，取3.0µL进行LC-MS/MS分析。优选的，步骤（2）中，所述色谱分离还包括：色谱柱：ZOBAXSB-C8，5μm，4.6*150mm；进样量：3.0μL；柱温：40℃；自动进样器温度为4℃，流动相的流速为：0.8mL/min。本专利技术的有益效果：（1）本专利技术采用蛋白沉淀法处理血浆样品，相比与液-液提取法和固相萃取法，蛋白沉淀法具有操作简便、回收率高等特点，可最大程度提高处理通量和灵敏度。（2）本专利技术检测方法灵敏度较高，能够定量的最低浓度可达到10.00ng/mL。本专利技术适合头孢克肟胶囊生物等效性或人体药动学研究中使用。附图说明图1：头孢克肟子离子扫描图。图2：Cefixime-13C,15N2子离子扫描图。图3：空白基质样品图谱；图中，A：头孢克肟；B：Cefixime-13C,15N2。图4：零浓度样品图谱；图中，A：头孢克肟；B：Cefixime-13C,15N2。图5：定量下限图谱；图中，A：头孢克肟；B：Cefixime-13C,15N2。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。术语说明：缩写全文中文说明LLOQlowerlimitofquantification定量下限LQClowqualitycontrol低质控MQCmediumqualitycontrol中质控HQChighqualitycontrol高质控RSDrelativestandarddeviation相对标准偏差RErelativeError相对偏差正如
技术介绍
部分介绍的，现有技术中测定头孢克肟的方法存在灵敏度低、专属性差以及操作繁琐费时等缺点。基于此，在本专利技术的一种实施方案中，给出了一种快速检测人血浆中头孢克肟浓度的方法，包括以下步骤：步骤1：血浆样品前处理；在离心管中加入50.0μL血浆样品、50.0μL内标溶液（浓度为200ng/mL的CFX-13C,15N2溶液），加入200.0μL乙腈，涡流振荡，离心10min，取出100µL上清转移至已有100µL超纯水的96孔板中，涡流混匀，进行LC-MS/MS分析；步骤2：色谱分离；色谱条件，色谱柱：ZOBAXSB-C8，5μm，4.6*150mm，安捷伦；进样量：3.0μL；柱温：40℃；流动相A：含0.1%甲酸和5mM醋酸铵的水溶液，流动相B：含0.5%甲酸的乙腈，等度洗脱，流动相A：流动相B=50：50；自动进样器温度为4℃，流动相的流速为：0.8mL/min。步骤3：质谱检测；质谱条件：电喷雾电离源；检测方式为正离子；喷射电压5500V；Gas1和Gas2压力分别为65和65psi；扫描模式为+MRM；用于定量分析离子对：CFXm/z454.2®285.2，CE20eV，DP60V，CFX-13C,15N2m/z457.2®288.2，CE22eV，DP60V；扫描时间为200ms。由于头孢克肟水溶性强，在一些常用有机萃取剂中的溶解度很小，萃取率低。在样品前处理方法上，本专利技术采用血浆沉淀法并对提取溶剂进行了考察，发现用乙腈沉淀蛋白质的效果比其他溶剂好，其蛋白沉淀较完全，基质干扰小，稳定性好，其提取回收率也相对较高,因此采用乙腈沉淀蛋白质的方法处理血浆样品。本专利技术还对乙腈的用量进行了优化考察，发现采用4倍于样品体积的乙腈沉淀蛋白后取上清液直接进样，过程简单快速，既可以沉淀绝大多数蛋白,又能够保证血浆中头孢克肟的灵敏度。本专利技术的样品前处理条件中，共加样、涡旋、离心、转移上清4个步骤。与现有固相萃取或液-液提取技术相比，操作大大简化，1小时内可完成96个样本的前处理。上述色谱条件中选择的色谱柱为ZOBAXSB-C8，5μm，4.6*150mm，待测物在具备较好的色谱保留及色谱峰形，可以使色谱峰形更尖锐进而提升灵敏度，针对头孢克肟的极性特点，本专利技术选择以含0.1%甲酸和5mM醋酸铵的水溶液作为流动相A，选择含0.5%甲酸的乙腈作为流动相B，能够减少拖尾，改善峰形，在上述色谱条件下，能有效的将头孢克肟与血浆中的内源性物质有效的分离开来。等度色谱洗脱模式适合快速检测，色谱分析时间仅为2.4min。经本专利技术优化后的色谱条件具有优异的分离能力，在质谱检测时可有效减少样品基质的干扰，以及对待测组分离子化的抑制作用，有效提高了检测的灵敏度。为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。本专利技术实施例中所用的未进行具体说明试验材料均为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测血浆中头孢克肟浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n（1）血浆样品前处理：/n向血浆样品中加入内标溶液和乙腈，涡流振荡，离心，取出上清转移至96孔板中，进行LC-MS/MS分析；/n（2）色谱分离：/n以含0.1%甲酸和5 mM醋酸铵的水溶液作为流动相A，以含0.5%甲酸的乙腈作为流动相B，流动相A:流动相B=50：50；等度洗脱，洗脱时间2.4min；/n（3）质谱检测：/n电喷雾电离源；检测方式为正离子；喷射电压5500V；Gas1和Gas2压力分别为65和65psi；扫描模式为+MRM；用于定量分析离子对：CFX

【技术特征摘要】
1.一种快速检测血浆中头孢克肟浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）血浆样品前处理：
向血浆样品中加入内标溶液和乙腈，涡流振荡，离心，取出上清转移至96孔板中，进行LC-MS/MS分析；
（2）色谱分离：
以含0.1%甲酸和5mM醋酸铵的水溶液作为流动相A，以含0.5%甲酸的乙腈作为流动相B，流动相A:流动相B=50：50；等度洗脱，洗脱时间2.4min；
（3）质谱检测：
电喷雾电离源；检测方式为正离子；喷射电压5500V；Gas1和Gas2压力分别为65和65psi；扫描模式为+MRM；用于定量分析离子对：CFXm/z454.2®285.2，CE20eV，DP60V，CFX-13C,15N2m/z457.2®288.2，CE22eV，DP60V；扫描时间为200ms。


2.根据权利要求1所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：江翊国，钱晓萍，孙叶，
申请(专利权)人：苏州必宜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32