液-质联用鉴定异戊烯基二氢茋的方法及新化合物的结构和应用技术

本发明专利技术公开了鉴定异戊烯基二氢茋的液相色谱‑质谱方法及用该方法发现新化合物的结构和应用。根据二氢茋类化合物容易在α‑α′键之间断裂，在负电离模式下，含酚基团较多的片段(邻酚除外)表现出较强的离子峰，而在正电离模式下，含酚基团较少的片段表现出较强的离子峰的特点，以及正电离模式下，异戊烯基二氢茋的中性丢失为56道尔顿的规律。本发明专利技术利用中性丢失(56道尔顿)与子离子扫描相结合的液相色谱‑质谱联用技术从被测物中发现异戊烯基二氢茋的方法及其在动植物提取物、组织和细胞及制剂中分析异戊烯基二氢茋的应用，以及新的异戊烯基二氢茋类化合物‑‑甘草茋D(glycytilbene D)和甘草茋E(glycytilbene E)的结构及生物活性及它们在药品、食品、化妆品、家畜饲料等方面的应用。

【技术实现步骤摘要】
液-质联用鉴定异戊烯基二氢茋的方法及新化合物的结构和应用
本专利技术属于天然药物化学
，特别涉及液-质联用在动植物提取物及制剂中发现异戊烯基二氢茋(dihydrostilbenes)成分的技术方法。也涉及新的异戊烯基二氢茋成分-甘草茋D(glycytilbeneD)、甘草茋E(glycytilbeneE)的制备、结构及生物活性，以及它们在药品、(功能)食品、化妆品、家畜饲料等方面的应用。
技术介绍
茋(二苯乙烯)类化合物，如白藜芦醇，是存在于许多药用植物、蔬菜和水果中的天然产物。有些植物，如甘草中含有异戊烯基二氢茋类成分，即α-α′键饱和并联有异戊烯基取代基[BiondiDM，RoccoC，RubertoG.DihydrostilbenederivativesfromGlycyrrhizaglabraleaves.JNatProd，2005，68：1099-1102；SiracusaL，SaijaA，CristaniM，CiminoF，D′ArrigoM，TrombettaD，RaoF，RubertoG.Phytocomplexesfromliquorice(glycyrrhizaglabraL.)leaves--chemicalcharacterizationandevaluationoftheirantioxidant，anti-genotoxicandanti-inflammatoryactivity.Fitoterapia，2011，82：546-556.]。最近，Wang等人[WangL，ZhangK，HanS，ZhangL，BaiH，BaoF，ZengY，WangJ，DuH，LiuY，YangZ.ConstituentsisolatedfromtheleavesofGlycyrrhizauralansisandtheiranti-inflammatoryactivitiesonLPS-inducedRAW264.7cells.Molecules，2019，24：1923.]从乌拉尔甘草叶中分离出四种新的异戊烯基二氢茋，发现这些化合物有很强的抗炎活性。基于异戊烯基二氢茋的生物活性，有必要开发其快速的检测方法。本专利技术首先展现异戊烯基二氢茋的裂解模式，即56道尔顿的中性丢失是异戊烯基二氢茋类的特征，α-α′键断裂生成的碎片为取代基种类、数量和位置提供信息。随后，以甘草叶提取物为例，通过56道尔顿的中性丢失扫描和子离子扫描，对其中的异戊烯基二氢茋进行挖掘，鉴定了10种异戊烯基二氢茋成分。对推测的新化合物，用色谱法分离纯化，并用核磁共振波谱分析确证2种新的二氢茋衍生物--甘草茋D(glycytilbeneD)、甘草茋E(glycytilbeneE)的结构。这些结果表明，中性丢失扫描与子离子扫描结合的液-质联用技术是从样品中发现新的异戊烯基二氢茋的可行方法。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种从动植物提取物、组织和细胞代谢物、制剂或相关食品、药品、化妆品、饲料等中鉴定异戊烯基二氢茋的方法(基于液-质联用的中性丢失扫描结合子离子扫描发现异戊烯基二氢茋成分的方法)，及新天然产物--甘草茋D和甘草茋E的结构、制备方法及抑制α-葡萄糖苷酶活性。为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下方案：对纯品异戊烯基二氢茋进行子离子扫描，寻找其裂解规律；用56道尔顿的中性丢失扫描，获得提取物中含异戊烯基成分的色谱图；利用子离子扫描鉴定异戊烯基二氢茋的结构；对其中的新异戊烯基二氢茋进行针对性的分离纯化并用核磁共振法确定结构；本专利技术还提供2种新异戊烯基二氢茋成分--甘草茋D和甘草茋E化学结构：本专利技术的另一个方面，提供甘草茋D和/或甘草茋E的组合物；本专利技术还提供含有甘草茋D和/或甘草茋E的药物制剂；甘草茋D和甘草茋E有较强的抑制α-葡萄糖苷酶活性。α-葡萄糖苷酶抑制剂可以延缓碳水化合物吸收，降低餐后血糖水平。有的α-葡萄糖苷酶抑制剂还有抗病毒作用(KellyL.Warfield.TargetingEndoplasmicReticulumα-GlucosidaseIwithaSingle-DoseIminosugarTreatmentProtectsagainstLethalInfluenzaandDengueVirusInfections.JMedChem，2020.https：//dx.doi.org/10.1021/acs.jmedchem.0c00067)。因此，本专利技术还涉及含有甘草茋D和/或甘草茋E的组合物在治疗和/或预防糖尿病及病毒性疾病中的应用。在本专利技术利用液-质联用技术的中性丢失扫描结合子离子扫描发现样品中异戊烯基二氢茋的一个优选方案中，异戊烯基二氢茋成分的筛查和鉴定，包括以下步骤：1)样品用溶剂，优选甲醇或70％及以上浓度乙醇提取。提取液通过微滤器过滤后作为液-质分析用样液；2)用液-质联用分析，优选三重四极杆质谱检测仪，反相硅胶C18分析柱，水-甲醇或水-乙腈梯度洗脱，优化色谱洗脱程序；3)使用上面第2步优化的色谱洗脱程序联用正电离模式的质谱检测器对样品液进行56道尔顿的中性丢失扫描，以挖掘联有异戊烯基的化合物，得到色谱图；4)使用上述第3步相同的色谱洗脱程序，在碎片电压为20-200V，优选60-170V，碰撞能为0-40eV，优选5-20eV条件下对上面第3)步所得色谱峰对应的母离子进行了负电离和正电离的子离子扫描；5)根据二氢茋类化合物容易在α-α′键间断裂，在负电离模式下，含酚基团较多的片段(邻酚除外)表现出较强的离子峰，而在正电离模式下，含酚基团较少的片段表现出较强的离子峰的规律，对上面第3-4)得到的质谱图进行分析，推测样品中的异戊烯基二氢茋化合物数量和结构，根据峰面积定量。本专利技术的优点和新发现为：专利技术了一种发现新的异戊烯基二氢茋的液-质鉴定方法，即利用中性丢失(56道尔顿)与子离子扫描相结合的液-质联用技术从样品中发现新的异戊烯基二氢茋类成分的方法。利用的规律是：二氢茋类化合物容易在α-α′键之间断裂，在负电离模式下，含酚基团较多的片段(邻酚除外)表现出较强的离子峰，而在正电离模式下，含酚基团较少的片段表现出较强的离子峰。正电离模式下，异戊烯基二氢茋的中性丢失为56道尔顿。本专利技术为挖掘更多的含异戊烯基二氢茋动植物资源及新异戊烯基二氢茋化合物的发现提供了依据和方法。得到了新结构的异戊烯基二氢茋衍生物--甘草茋D及甘草茋E，有望对肥胖及糖尿病或病毒感染有活性。附图说明图1是异戊烯基二氢茋类化合物(1-5)在负电离模式下的质谱图和裂解途径(A-E)；图2是正电离模式下代表性异戊烯基二氢茋化合物(5)在不同碰撞能量40eV(A)、30eV(B)、20eV(C)、10eV(D)时的MS/MS图和裂解途径；图3是异戊烯基二氢茋化合物(1-4)在正电离模式碰撞能量10eV下的MS/MS图(A-D)；图4是甘草叶提取物的液-质联用中性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.液-质联用鉴定异戊烯基二氢茋的方法，其特征在于：用中性丢失(56道尔顿)与子离子扫描(或二级质谱)结合的液相色谱-质谱联用技术从动植物提取物、组织和细胞及制剂等中发现异戊烯基二氢茋的方法。/n

【技术特征摘要】
1.液-质联用鉴定异戊烯基二氢茋的方法，其特征在于：用中性丢失(56道尔顿)与子离子扫描(或二级质谱)结合的液相色谱-质谱联用技术从动植物提取物、组织和细胞及制剂等中发现异戊烯基二氢茋的方法。


2.新化合物的结构，其特征在于：新的异戊烯基二氢茋类化合物--甘草茋D(glycytilbeneD)的结构：





3.新化合物的结构，其特征在于：新的异戊烯基二氢茋类化合物--甘草茋E(glycytilbeneE)的结构：<...

【专利技术属性】
技术研发人员：马超美，小松加门子，蒙昊聪，朱姝，范宇红，叶日贵服部征雄，
申请(专利权)人：内蒙古大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15