一种用于血清或血浆中抗精神药物的液质检测方法技术

本发明专利技术涉及一种用于血清或血浆中抗精神药物液质检测方法及其特异性净化材料的前处理，包括如下步骤：血清或血浆样品经过一定比例有机试剂蛋白沉淀，离心沉淀所得上清液经过特异性净化材料的前处理，得到净化干净的样品溶液，进液相色谱‑串联质谱检测分析，同时测定血清或血浆中奥氮平、氯氮平、喹硫平、阿立哌唑、氟哌啶醇、利培酮、帕立哌酮和齐拉西酮8种抗精神类药物的检测方法。特异性净化材料的前处理是以硅胶为基质的混合型固相萃取小柱，血液经过特异性净化材料净化，可以去除血液中基质的干扰，提高8种抗精神类药物基质效应，更好保证抗精神类药物的回收率。

【技术实现步骤摘要】
一种用于血清或血浆中抗精神药物的液质检测方法
本专利技术属于医学检验分析
，具体地说是一种检测血清或血浆样品中抗精神药物奥氮平、氟哌啶醇、帕利哌酮、阿立哌唑、利培酮、氯氮平、富马酸喹硫平和甲磺酸齐拉西酮的液相色谱-串联质谱的检测方法。技术背景治疗药物浓度监测是指在临床进行的药物治疗中，在指定的时间间隔测量患者血液中特定药物的浓度。抗精神病药物又称神经阻滞剂，除用于精神分裂和偏执性精神障碍外，分裂样精神障碍和其他具有精神运动性兴奋妄想和幻想等症状的精神障碍皆为其适应症。目前，抗精神病药种类繁多，包括应用时间较久的典型药物和非典型药物，典型药物主要对阳性症状较好，对阴性较差。而非典型药物的对应症状谱疗效广，不良反应小，便于长期服用。[冯立志,等,临床和实验医学杂志,2007；6(5):114-115]。典型和非典型的抗精神药物进行治疗药物浓度监测，主要原因如下：通过保持抗精神药物持续缓慢维持最低有效血液浓度能有效提高患者的依从性，减少患者的毒副作用。稳定状态下的抗精神病药物血液浓度表现出较大的患者间差异，但抗精神药物在患者中每天相对稳定，所以监测血液中抗精神药物浓度是很有价值的。现阶段国内临床抗精神药物血药浓度监测的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、放射免疫法(RIA)、气相色谱法(GC)和液相串联质谱法(LC-MS)等。HPLC是上世纪七八十年代发展起来的一种血药浓度的测定方法，采用合适的色谱柱，对抗精神药物及其代谢物的分离和鉴定。该方法特异性高，结果准确可靠，但该方法需要花费更多时间精力用在前处理样品的干扰物质的去除，操作复杂，且HPLC达不到到精准检测定量。放射免疫法(RIA)是六十年代专利技术的一种超微量分析技术，引用放射性同位素监测技术的高度灵敏性、和免疫学抗原-抗体反应的高度特异性相结合的分析法。其优势主要是灵敏度较高，样品用量少，精确度高，操作简便，检出迅速。缺点是该方法操作步骤较多，需要特殊监测设备，操作人员可能受到放射性危害等。[周静,等,安徽预防医学杂志,2018；(1):71-73]。气相色谱法具有分离效能高，分析速度快，样品量少等特点，但适用范围仅用于气体和易挥发物的定性和定量分析。高效液相色谱串联质谱是以质谱仪为检测手段，集高效液相色谱仪的高分离能力、质谱仪的高灵敏度和高选择性于一体的强有力分析检测工具。在药物分析研究领域中，大部分药物是极性较大的化合物，而在诸多分析仪器中，液相色谱分析范围广，包括不挥发化合物、极性化合物、热不稳定化合物和生物大分子化合物(包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等)。质谱特异性强，可以提高较多的结构定性信息，而且检测灵敏度很高。液质联用技术能够对准分子离子进行多级裂解，从而提供化合物的相对分子量以及丰富的碎片信息。在药物研发中的杂质研究和药物动力学研究阶段，通常杂质和药代动力学样品的血药浓度的含量很低，分析难度大且干扰多，液质联用技术由于其选择性强和灵敏度高，可以快速准确地测定药物分析中的痕量物质。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于血清或血浆中抗精神药物的液质检测方法及其特异性净化材料的前处理。特异性净化材料是以硅胶为基质的混合型固相萃取小柱，采用固相萃取填料，血清或血浆经过特异性净化材料净化，可以去除血清或血浆中基质的干扰，提高8种抗精神类药物基质效应，更好保证抗精神类药物的回收率。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是一种用于血清或血浆中抗精神药物的液质检测方法，包括如下步骤：1)血清或血浆样本提取：取血清或血浆样本加入氘代内标，涡旋混合，加入蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，低温高速离心，取上清液，备用；2)装填固相萃取柱；3)固相萃取分离：固相萃取柱先采用纯有机溶剂进行活化；再加入纯水进行平衡；将步骤1)得到的上清液上样后；加入纯水进行第一步淋洗；第二步用体积比(4:6-7:3)混合液进行淋洗，用有机溶剂进行第三步淋洗，用纯有机相进行洗脱，收集全部的洗脱流份；4)样品的分析：将步骤3)收集的洗脱流份，采用C18反相高效液相色谱分离，串联质谱检测分析，扫描得到样品谱图，检测8种抗精神药物及其氘代内标正离子。优选地，步骤1)中血清或血浆样本的体积为5μL-500μL；氘代内标的体积为0.5μL-500μL；蛋白沉淀剂为体积比为1:1～5:1的有机溶剂:纯水混合液，所述有机溶剂为乙腈或甲醇。优选地，步骤2)中装填规格：填料50-500mg，柱管体积1-6mL。优选地，步骤2)中填料为以硅胶为基质的混合型固相萃取填料，结构式如下：其中，键合相n等于8-30；固相萃取材料硅胶颗粒度为20μm-100μm，孔径为比表面积150m2/g-400m2/g。优选地，步骤3)固相萃取柱先采用0.2mL-2mL纯有机溶剂进行活化；再加入0.2mL-2mL纯水溶液进行平衡；离心取得上清液0.1mL-2mL上样；加入0.1mL-2mL纯水进行第一步淋洗；加入0.1mL-1mL甲醇水(体积比4:6～7:3)进行第二步淋洗；加入0.1mL-2mL甲醇进行第三步淋洗；最后用0.1mL-2mL的甲醇进行洗脱，收集全部的洗脱流份；所述的有机溶剂为甲醇、乙腈、异丙醇、乙醇、丙酮中的一种或几种。优选地，步骤5)中所述高效液相色谱条件：色谱柱：C185μm，50*3mm；流速0.5mL/min；梯度洗脱；柱温30-45℃；进样量：0.1-20μL；所述质谱分析条件：离子化模式：ESI+；喷雾电压：5.5KV；脱溶剂气温度：500℃；雾化气：40psi；辅助雾化气：40psi；气帘气：25psi；扫描方式：多反应监测(MRM)。上述一种用于血清或血浆中抗精神药物液质检测方法及其特异性净化材料的前处理，测定8种抗精神药物奥氮平、氟哌啶醇、帕利哌酮、阿立哌唑、利培酮、氯氮平、富马酸喹硫平和甲磺酸齐拉西酮的基质效应为85.00％-110.00％，提取回收率为90.00％-115.00％。本专利技术能够准确测定血清或血浆中8种抗精神药物的含量。本专利技术的有益效果：(1)前处理过程新颖。本专利技术首次以固相萃取方法提取、纯化血清或血浆，提出以硅胶为基质的混合型固相萃取填料，该填料对抗精神药物具有特异性富集纯化；(2)操作简单、高通量。本专利技术提供的前处理方法，操作简单可靠，利于临床血清或血浆样本实现高通量；(3)定性定量准确。本方法采用高效液相-串联质谱法检测，血清或血浆样本加内标校正，标准曲线定量，结果准确度高且稳定，可用于临床血液样本8种抗精神药物准确的定性定量。附图说明图1为实施例1标准曲线溶液帕立哌酮离子通道的MRM色谱图；图2为实施例1标准曲线溶液阿立哌唑离子通道的MRM色谱图；图3为实施例1标准曲线溶液利培酮离子通道的MRM色谱图；图4为实施例1标准曲线溶液氯氮平离子通道的MRM色谱图；图5为实施例1标准曲线溶液氟哌啶醇离子通道的MRM色谱图；图6为实施例1标准曲线溶液奥氮本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于血清或血浆中抗精神药物的液质检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n1)血清或血浆样本提取：取血清或血浆样本加入目标氘代内标，涡旋混合，加入蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，低温高速离心，取上清液，备用；/n2)装填固相萃取柱：装填规格：固相萃取填料50-500mg，柱管体积1-6mL；/n3)固相萃取分离：对所述固相萃取柱进行活化，平衡，上样，淋洗，洗脱，最后收集全部洗脱流份；/n4)样品分析：将步骤3)收集的洗脱流份，进高效液相色谱-串联质谱检测分析，检测血清或血浆中8种抗精神类药物及其氘代内标的正离子。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于血清或血浆中抗精神药物的液质检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)血清或血浆样本提取：取血清或血浆样本加入目标氘代内标，涡旋混合，加入蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，低温高速离心，取上清液，备用；
2)装填固相萃取柱：装填规格：固相萃取填料50-500mg，柱管体积1-6mL；
3)固相萃取分离：对所述固相萃取柱进行活化，平衡，上样，淋洗，洗脱，最后收集全部洗脱流份；
4)样品分析：将步骤3)收集的洗脱流份，进高效液相色谱-串联质谱检测分析，检测血清或血浆中8种抗精神类药物及其氘代内标的正离子。


2.根据权利要求1所述的液质检测方法，其特征在于，所述抗精神药物为奥氮平、氟哌啶醇、帕利哌酮、阿立哌唑、利培酮、氯氮平、富马酸喹硫平和甲磺酸齐拉西酮。


3.根据权利要求1所述的液质检测方法，其特征在于，血清或血浆样本取样的体积为5μL-500μL；每5μL血清或血浆样本加入抗精神药物氘代内标1μL-100μL，抗精神药物奥氮平、利培酮、帕利哌酮的氘代内标浓度为10ng/mL-1μg/mL，氟哌啶醇氘代内标浓度为2ng/mL-200ng/mL，阿立哌唑、氯氮平、喹硫平、齐拉西酮的氘代内标浓度为20ng/mL-2μg/mL。


4.根据权利要求1所述的液质检测方法，其特征在于，蛋白沉淀剂为体积比为1:1～5:1的有机溶剂和纯水的混合液，蛋白沉淀剂加入的体积为0.1mL-2mL；所述有机溶剂为乙腈或甲醇。


5.根据权利要求1所述的液质检测方法，其特征在于，固相萃取柱填料是以硅胶为基质的混合型固相萃取填料，填料结构式如下：



其中键合相n等于8-30；固相萃取材料硅胶颗粒度为20μm-100μm，孔径为比表面积150m2/g-400m2/g。

【专利技术属性】
技术研发人员：曹云峰，王爽，张亚莲，于杰，潘永强，洪沫，
申请(专利权)人：大连润生康泰医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21