一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法和应用，涉及生物技术领域。具体地，该方法通过基因编辑技术对目标动物血管内皮细胞中的Ctnna1基因进行基因敲除，或通过RNAi技术沉默目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的表达，使目标动物表现出典型的视网膜新生血管性疾病的特征，该疾病模型既可作为新生视网膜血管的疾病模型，又为研究视网膜新生血管疾病的发病过程及机制的研究提供了便利，还为该疾病的治疗或预防提供了新的靶标。

【技术实现步骤摘要】
一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法和应用
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法和应用。
技术介绍
视网膜新生血管(Retinalneovascularization,RNV)相关性眼部疾病是一类以病理性视网膜新生血管为主要特征的疾病，主要包括增殖性糖尿病视网膜病变(proliferativediabeticretinopathy，PDR)、早产儿视网膜病变(retinopathyofprematurity，ROP)和视网膜静脉阻塞(centralretinalveinocclusion，RVO)等。该类疾病的发病率高、治疗预后差，故具有较高的致盲率，严重危害人类的视力健康。目前，临床上针对RNV的治疗，除了疾病早期进行的激光光凝、眼内注射抗血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)药物以外，尚无更加有效的治疗方法。并且，研究表明抗VEGF治疗并非对所有患者均有效，同时抗VEGF治疗存在价格昂贵、需反复注射增加患者感染风险等诸多缺点，导致其临床运用受限。因此，在进行RNV发病机理研究的同时，构建有效的动物模型以寻求新的有效治疗手段或治疗靶点，是亟待解决的医学问题。目前，尚且缺乏可用于RNV治疗方法研究的动物模型。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法和应用。本专利技术是这样实现的：第一方面，实施例提供了一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法，其包括：通过基因编辑技术对目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因进行基因敲除，以敲除掉Ctnnal基因的第二个外显子序列，或通过RNAi技术沉默目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的表达。第二方面，实施例提供了前述实施例提供的用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法得到的视网膜新生血管疾病模型在筛选用于预防或治疗视网膜新生血管相关疾病的药物中的应用。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术实施例提供了一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法，通过基因编辑技术敲除目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因，或通过RNAi技术沉默目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的表达，使目标动物表现出典型的视网膜新生血管性疾病的特征，该疾病模型既可作为新生视网膜血管的疾病模型，又为研究视网膜新生血管疾病的发病过程及机制的研究提供了便利，还为该疾病的治疗或预防提供了新的靶标。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为实施例1中Ctnna1基因敲除型小鼠的构建图；图2为实施例1中Ctnna1基因敲除型小鼠的繁育路线图；图3为试验例1中Ctnna1在小鼠血管中的敲除效率研究结果图；图4为试验例2中Ctnna1基因敲除型小鼠的视网膜铺片的检测结果图；图5为试验例3中Ctnna1基因敲除型小鼠眼球切片和玻璃体血管免疫组化染色结果；图6为试验例4中Ctnna1基因敲除型小鼠的血管内皮细胞的增殖实验及其统计结果。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。具体实施方案本申请实施例提供了一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法，通过基因编辑技术对目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因进行基因敲除，以敲除掉Ctnnal基因的第二个外显子序列，或通过RNAi技术沉默目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的表达。Ctnnal1基因位于五号染色体上，编码α-catenin蛋白，它是连环蛋白家族的成员之一，定位于细胞膜粘附连接区域，它通过与钙黏蛋白和细胞骨架蛋白的相互作用，调控钙黏蛋白-肌动蛋白丝连接的配置。经专利技术人研究发现，Ctnnal基因与视网膜新生血管疾病相关，通过基因编辑技术敲除目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的第二个外显子序列，或通过RNAi技术沉默目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的表达，使Ctnnal基因在目标动物血管内皮细胞中丧失功能，得到表现出典型视网膜新生血管疾病特征的动物模型。在可选实施方式中，所述基因编辑技术选自：CRISPR/Cas9技术、ZFN技术、TALENs技术和Cre-loxp基因敲除技术中的任意一种。在可选实施方式中，所述基因编辑技术为Cre-loxp基因敲除技术。在可选实施方式中，对目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因进行基因敲除，以敲除掉Ctnnal基因的第二个外显子序列是指：仅敲除目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的第二个外显子序列或敲除的序列中含有Ctnnal基因的第二个外显子序列。具体地，敲除的序列中含有Ctnnal基因的第二个外显子序列是指：敲除掉第一外显子和第二外显子的情况等。只要敲除了Ctnnal基因的第二个外显子序列用于制备视网膜新生血管疾病模型，则落入本申请的保护范围。在可选实施方式中，敲除目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的外显子序列或Ctnnal基因的全序列。即也可以通过将Ctnnal基因的外显子序列或Ctnnal基因的全序列进行敲除，以达到使Ctnnal基因功能丧失的效果。需要说明的是，所述目标动物为哺乳动物。优选地，所述目标动物为非人哺乳动物。优选地，所述目标动物选自小鼠、大鼠、狗、猪、兔、牛、马、羊、猴和猿中的任意一种。在可选的实施方式中，所述方法还包括：将进行了Ctnnal基因敲除或基因沉默的目标动物进行交配或体外受精。即，在进行了Ctnnal基因敲除或基因沉默的基础上，进行进一步地操作，如将基因敲除或基因沉默的动物进行交配或体外受精，获取的子代作为动物模型也属于本申请的保护范围。此外，本专利技术实施例还提供了如前述任一实施方式所述的用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法构建的视网膜新生血管疾病模型在筛选用于预防或治疗视网膜新生血管相关疾病的药物中的应用。在可选的实施方式中，所述视网膜新生血管相关疾病包括：糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞和视网膜静脉周围炎中的任意一种。以下结合实施例对本专利技术的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1本实施例提供了一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法，其包括利用Cre-loxp基因敲除技术，敲除目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的第二个外显子，以构建视网膜新生血管疾病模型，具体如下。将携带loxp本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法，其特征在于，其包括：通过基因编辑技术对目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因进行基因敲除，以敲除掉Ctnnal基因的第二个外显子序列，或通过RNAi技术沉默目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的表达。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法，其特征在于，其包括：通过基因编辑技术对目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因进行基因敲除，以敲除掉Ctnnal基因的第二个外显子序列，或通过RNAi技术沉默目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的表达。


2.根据权利要求1所述的用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法，其特征在于，所述基因编辑技术选自：CRISPR/Cas9技术、ZFN技术、TALENs技术和Cre-loxp基因敲除技术中的任意一种。


3.根据权利要求2所述的用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法，其特征在于，所述基因编辑技术为Cre-loxp基因敲除技术。


4.根据权利要求1～3任一项所述的用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法，其特征在于，对目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因进行基因敲除是指：仅敲除目标动物血管内皮细胞中的Ctnnal基因的第二个外显子序列或敲除的序列中含有Ctnnal基因的第二个外显子序列。


5.根据权利要求1～3任一项所述的用于构建视网膜新生血管疾病模型的方法，其特征在于，对目标...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨正林，朱献军，李姝锦，杨牧，
申请(专利权)人：四川省人民医院，
类型：发明
国别省市：四川;51