【技术实现步骤摘要】
一种T细胞体外嵌合抗原受体改造及扩增的优化培养方法
本专利技术涉及生物化学与分子生物学领域，尤其涉及一种T细胞体外嵌合抗原受体改造及扩增的优化培养方法。
技术介绍
肿瘤免疫治疗近年来在肿瘤治疗领域取得了诸多重要进展，包括过继性免疫治疗，非特异性免疫调节治疗，免疫检查点阻断治疗和单克隆抗体治疗等。其中，嵌合抗原受体T细胞治疗(ChimericantigenreceptorTcelltherapy，CARTcelltherapy)是目前最重要的肿瘤免疫治疗方法之一，其主要治疗流程是通过慢病毒等方式改造病人外周血中分离的T细胞，得到特异性CART细胞实现对肿瘤的特异性治疗。T细胞需要两个信号来激活，一般通过T细胞受体(Tcellreceptor，TCR)识别抗原递呈细胞(Antigenpresentingcell，APC)递呈的抗原多肽以激活CD3信号通路获得第一信号，并同时通过T细胞表面的共刺激分子和APC或靶细胞上的配体结合以获得第二信号。两者共同作用激发下游级联反应使得T细胞激活和增殖并进行细胞杀伤等。鉴于第一信号会...
【技术保护点】
1.一种T细胞体外嵌合抗原受体改造及扩增的优化培养方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)分离纯化CD4
【技术特征摘要】
1.一种T细胞体外嵌合抗原受体改造及扩增的优化培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)分离纯化CD4+和CD8+T细胞；
2)制备高浓度钾离子培养基；
3)T细胞的培养与改造：将50万个步骤1)获得的所述CD4+T细胞与50万个步骤1)获得的所述CD8+T细胞混合，用0.5ml所述高浓度钾离子培养基重悬得到细胞悬液；将所述细胞悬液加入24孔细胞培养板中，滴加磁珠悬液，置于37摄氏度，5％CO2培养箱，培养24小时；
4)慢病毒感染；
5)分离改造后的T细胞；
6)改造后的所述T细胞扩增；
7)培养9天后，当所述T细胞生长进入平台期时进行杀伤试验检测体外杀伤效率。
2.如权利要求1所述的T细胞体外嵌合抗原受体改造及扩增的优化培养方法，其特征在于，所述步骤1)中，具体步骤为：先进行细胞计数，然后分离纯化CD4+和CD8+T细胞，其中，可使用细胞计数板或细胞计数仪进行所述细胞计数。
3.如权利要求1所述的T细胞体外嵌合抗原受体改造及扩增的优化培养方法，其特征在于，所述CD4+T细胞从人外周血PBMC中分离纯化得到。
4.如权利要求1所述的T细胞体外嵌合抗原受体改造及扩增的优化培养方法，其特征在于，所述CD8+T细胞从人外周血PBMC中分离纯化得到。
5.如权利要求1所述的T细胞体外嵌合抗原受体改造及扩增的优化培养方法，其特征在于，所述高浓度钾离子培养基中氯化钾的质量浓度为：2500～48...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏芳，章崇祺，常昊宛，王欢禹，马小京，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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