胰腺细胞的扩增和分化方法以及应用技术

本发明专利技术提供了一种胰腺细胞的扩增方法，包括对胰腺组织依次进行消化处理、重悬处理、不连续密度梯度离心处理和扩增处理。本发明专利技术的所述扩增方法使用哺乳动物的胰腺导管作为胰腺前体样细胞的来源，并在所述不连续密度梯度离心处理后去除得到的细胞团中的胰岛细胞和腺泡细胞，有利于提高所述胰腺前体样细胞的得率，避免由于使用胚胎干细胞而带来的伦理方面的限制和可能带来的致癌风险；使用的扩增培养基包括由若干小分子化合物组成的重编程物质，能够避免由于使用基因编辑方法改变基因序列而容易造成的非特异性及脱靶缺失等风险。本发明专利技术还提供了经所述扩增方法得到的胰腺前体样细胞的分化方法和应用。

【技术实现步骤摘要】
胰腺细胞的扩增和分化方法以及应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及胰腺细胞的扩增和分化方法以及应用。
技术介绍
糖尿病是一种以胰岛素分泌不足或周围组织胰岛素抵抗导致的高血糖为特征的慢性代谢紊乱疾病，晚期可导致全身组织器官，特别是眼、肾、心血管及神经系统的损害及其功能障碍和器官衰竭。药物治疗和胰岛素补充是糖尿病目前最常见的治疗方法，但并不能完全治愈糖尿病，同时难以阻止远期并发症的发生发展。人类β细胞能够分泌胰岛素，降低血糖，以调节脂肪和蛋白质代谢，而人胚胎干细胞由于具有无限的增殖能力，理论上可以从其产生无限量的人类β细胞，因而近年来备受关注。现有技术中对胚胎干细胞进行逐步诱导能够得到具有胰岛素分泌功能的细胞，但诱导的过程程序复杂，周期长且成本高；另外，由胚胎干细胞诱导得到的细胞团中，具有胰岛素分泌功能的细胞占比一般不会超过30％，后期的纯化过程容易污染细胞团，从而使得到的具有胰岛素分泌功能的细胞具有潜在的致癌风险。因此，找到切实有效的胰岛细胞的替代细胞并获得足够数量的可用于细胞替代治疗的种子细胞刻不容缓。因此，有必要开发一种新型的胰腺本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胰腺细胞的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：获取胰腺组织，所述胰腺组织来源于哺乳动物的胰腺导管；/nS2：对所述胰腺组织依次进行消化处理、重悬处理和不连续密度梯度离心处理后，收集各密度梯度交界处的细胞团，然后去除所述细胞团中的胰岛细胞和腺泡细胞，得到原代细胞；/nS3：采用扩增培养基对所述原代细胞进行扩增处理，以诱导所述原代细胞重编程，得到胰腺前体样细胞；/n所述扩增培养基包括由若干小分子化合物组成的重编程物质，所述重编程物质包括生长因子、Rock信号通路抑制剂、WNT信号通路激动剂和TGF-β信号通路抑制剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种胰腺细胞的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：获取胰腺组织，所述胰腺组织来源于哺乳动物的胰腺导管；
S2：对所述胰腺组织依次进行消化处理、重悬处理和不连续密度梯度离心处理后，收集各密度梯度交界处的细胞团，然后去除所述细胞团中的胰岛细胞和腺泡细胞，得到原代细胞；
S3：采用扩增培养基对所述原代细胞进行扩增处理，以诱导所述原代细胞重编程，得到胰腺前体样细胞；
所述扩增培养基包括由若干小分子化合物组成的重编程物质，所述重编程物质包括生长因子、Rock信号通路抑制剂、WNT信号通路激动剂和TGF-β信号通路抑制剂。


2.根据权利要求1所述的扩增方法，其特征在于，所述胰腺组织来源于人胰腺导管。


3.根据权利要求1所述的扩增方法，其特征在于，所述生长因子包括表皮细胞生长因子、肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子中的至少一种，所述扩增培养基中，所述表皮细胞生长因子、所述肝细胞生长因子和所述成纤维细胞生长因子中的任意一种的含量为5-100纳克/毫升。


4.根据权利要求1所述的扩增方法，其特征在于，所述扩增培养基中，所述Rock信号通路抑制剂的含量为2-15微摩尔/升，所述WNT信号通路抑制剂的含量为2-10微摩尔/升，所述TGF-β信号通路抑制剂的含量为0.5-20微摩尔/升。


5.根据权利要求4所述的扩增方法，其特征在于，所述Rock信号通路抑制剂为Y27632、Fasudil、Thiazovivin和SB-772077-B中的至少一种，所述WNT信号通路激动剂为重组WNT蛋白、重组R-spondin蛋白和糖原合成酶激酶3β抑制剂中的至少一种，所述糖原合成酶激酶3β抑制剂为BIO、CHIR99021和TWS119中的至少一种，所述TGF-β信号通路抑制剂为A83-01、RepSox和SB431542中的至少一种。


6.根据权利要求1所述的扩增方法，其特征在于，所述扩增培养基还包括基础培养基、血清和无血清神经元添加物，所述扩增培养基中，所述血清和所述无血清神经元添加物的总体积百分比不高于15％，所述血清的体积百分比为2-10％。


7.根据权利要求6所述的扩增方法，其特征在于，所述重编程物质还包括脂类信号物质，所述扩增培养基中，所述脂类信号物质的含量为0.5-10微摩尔/升。


8.根据权利要求7所述的扩增方法，其特征在于，所述脂类信号物质为1-磷酸鞘氨醇和溶血磷脂酸中的至少一种。


9.根据权利要求1所述的扩增方法，其特征在于，所述基础培养基为MEM、DMEM、BME、DMEM/F12、RPMI...

【专利技术属性】
技术研发人员：鄢和新，
申请(专利权)人：上海赛尔维医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31