NT-3基因疗法的方法和材料技术

本披露内容涉及神经营养因子3(NT‑3)多核苷酸的重组腺相关病毒(rAAV)递送。本披露内容提供了rAAV和使用该rAAV进行NT‑3基因疗法以改善肌肉强度、刺激肌肉生长以及治疗肌肉消耗障碍如肌营养不良和腓骨肌萎缩神经病变的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】NT-3基因疗法的方法和材料相关申请的交叉引用本申请要求于2017年10月20日提交的美国临时专利申请号62/574,828、于2018年5月25日提交的美国临时专利申请号62/676687和于2018年10月4日提交的美国临时专利申请号62/741,335的优先权，将这些申请的披露内容通过引用以其整体特此并入。美国政府利益声明本专利技术是在美国国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)资助的授权号NS105986和U01-NS066914下由政府支持完成的。政府拥有本专利技术的某些权利。通过引用并入序列表本申请含有作为披露内容的单独部分的计算机可读形式的序列表(文件名：53122A_Seqlisting.txt；17,133字节-ASCII文本文件；创建于2018年10月18日)，将其通过引用以其整体并入本文。
本披露内容涉及神经营养因子3(NT-3)多核苷酸的重组腺相关病毒(rAAV)递送。本披露内容提供了rAAV和使用rAAV进行NT-3基因疗法以改善肌肉强度、刺激肌肉生长以及治疗神本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸，该核酸以从5'至3'的顺序包含：/n(i)第一AAV2反向末端重复序列(ITR)；/n(ii)SEQ ID NO:11的核苷酸147-860所列出的肌肉肌酸激酶启动子/增强子序列；/n(iii)编码人NT-3多肽的核苷酸序列；以及/n(iv)第二AAV2 ITR序列；/n其中该人NT-3多肽具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:2至少90％相同或与SEQ ID NO:2为100％相同，或者由与SEQ ID NO:11的核苷酸1077-1850为90％相同或与SEQID NO:11的核苷酸1077-1850为100％相同的核苷酸序列编码。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171020 US 62/574828;20180525 US 62/676687;2018101.一种核酸，该核酸以从5'至3'的顺序包含：
(i)第一AAV2反向末端重复序列(ITR)；
(ii)SEQIDNO:11的核苷酸147-860所列出的肌肉肌酸激酶启动子/增强子序列；
(iii)编码人NT-3多肽的核苷酸序列；以及
(iv)第二AAV2ITR序列；
其中该人NT-3多肽具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQIDNO:2至少90％相同或与SEQIDNO:2为100％相同，或者由与SEQIDNO:11的核苷酸1077-1850为90％相同或与SEQIDNO:11的核苷酸1077-1850为100％相同的核苷酸序列编码。


2.如权利要求1所述的核酸，该核酸进一步包含在所述启动子/增强子的3’端，SEQIDNO:11的核苷酸892-1024中所列出的嵌合内含子。


3.如权利要求1或2所述的核酸，该核酸进一步包含在所述编码人NT-3多肽的核苷酸序列的3'端，SEQIDNO:11的核苷酸1860-2059中所列出的SV40聚腺苷酸化信号。


4.如权利要求1-3中任一项所述的核酸，
其中所述第一ITR在SEQIDNO:11的核苷酸7-112中列出，和/或
其中所述第二ITR在SEQIDNO:11的核苷酸2121-2248中列出。


5.如权利要求1-3中任一项所述的核酸，
其中所述第一ITR在SEQIDNO:11的核苷酸7-112中列出，并且
其中所述第二ITR在SEQIDNO:11的核苷酸2121-2248中列出。


6.一种包含scAAV1.tMCK.NTF3基因组的核酸，该基因组与SEQIDNO:11所列出的核苷酸序列至少90％相同。


7.一种包含SEQIDNO:11所列出的scAAV1.tMCK.NTF3基因组的核酸。


8.一种包含如权利要求1-7中任一项所述的核酸的重组腺相关病毒颗粒(rAAV)，其中该rAAV具有感染性。


9.如权利要求8所述的rAAV颗粒，其中该rAAV是血清型AAV-1、AAV-2、AAV-3、AAV-4、AAV-5、AAV-6、AAV-7、AAV-8、AAV-9、AAV-10、AAV-11、或AAVrh.74。


10.如权利要求8-10所述的rAAV颗粒，其中该rAAV基因组中的AAVDNA来自AAV-1。


11.一种组合物，该组合物包含如权利要求8-10中任一项所述的rAAV颗粒、和药学上可接受的载体。


12.如权利要求11所述的组合物，其中配制该组合物以在有需要的受试者中治疗肌肉消耗障碍或神经病变。


13.如权利要求11所述的组合物，其中配制该组合物以在有需要的受试者中刺激肌肉生长。


14.一种在有需要的人类受试者中治疗肌肉消耗障碍或神经病变的方法，该方法包括向该人类受试者给予编码该NT-3多肽的核酸；其中
a)该核酸包含与SEQIDNO:1的核苷酸序列90％相同的核苷酸序列，
b)该核酸包含SEQIDNO:1的核苷酸序列；
c)该核酸包含编码与SEQIDNO:2至少90％相同或与SEQIDNO:2为100％相同的氨基酸序列的核酸序列，
d)编码该NT-3多肽的核酸是如权利要求1-7中任一项所述的核酸，
e)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，并且将该rAAV以导致持续表达低浓度NT-3多肽的剂量来给予，
f)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内途径，并且给予的rAAV的剂量为约1.5x1012vg/kg至约6.5x1012vg/kg，
g)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内途径，并且给予的rAAV的剂量为约2x1012vg/kg至约6x1012vg/kg，
h)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内途径，并且给予的rAAV的剂量为约2x1012vg/kg，
i)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内途径，并且给予的rAAV的剂量为约4x1012vg/kg，
j)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内途径，并且给予的rAAV的剂量为约6x1012vg/kg，
k)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内注射，浓度为约2x1013vg/ml，使用约0.5至1ml的3至6次注射/块肌肉来给予，或
l)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内注射，浓度为约2x1013vg/ml，使用多次注射以总体积约5至14ml来给予。


15.一种在有需要的人类受试者中改善肌肉强度或刺激肌肉生长的方法，该方法包括向该人类受试者给予编码该NT-3多肽的核酸的步骤；其中
a)该核酸包含与SEQIDNO:1的核苷酸序列90％相同的核苷酸序列，
b)该核酸包含SEQIDNO:1的核苷酸序列；
c)该核酸包含编码与SEQIDNO:2至少90％相同或与SEQIDNO:2为100％相同的氨基酸序列的核酸序列，
d)编码该NT-3多肽的核酸是如权利要求1-7中任一项所述的核酸，
e)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，并且将该rAAV以导致持续表达低浓度NT-3多肽的剂量来给予，
f)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内途径，并且给予的rAAV的剂量为约1.5x1012vg/kg至约6.5x1012vg/kg，
g)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内途径，并且给予的rAAV的剂量为约2x1012vg/kg至约6x1012vg/kg，
h)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内途径，并且给予的rAAV的剂量为约2x1012vg/kg，
i)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内途径，并且给予的rAAV的剂量为约4x1012vg/kg，
j)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内途径，并且给予的rAAV的剂量为约6x1012vg/kg，
k)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内注射，浓度为约2x1013vg/ml，使用约0.5至1ml的3至6次注射/块肌肉来给予，或
l)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，给予途径是肌内注射，浓度为约2x1013vg/ml，使用多次注射以总体积约5至14ml来给予。


16.如权利要求14或15所述的方法，其中将该核酸使用病毒载体来给予。


17.如权利要求16所述的方法，其中该病毒载体是腺相关病毒载体。


18.如权利要求14-17中任一项所述的方法，其中该核酸与肌肉特异性启动子可操作地连接。


19.如权利要求14-18中任一项所述的方法，其中该肌肉特异性启动子是肌肉特异性肌酸激酶启动子。


20.如权利要求14-19中任一项所述的方法，其中该scAAV1.tMCK.NTF3包含SEQIDNO:11所列出的NT-3基因盒。


21.如权利要求14-20中任一项所述的方法，其中该给予途径是肌内注射。


22.如权利要求14-21中任一项所述的方法，其中该给予途径是肌内双侧注射至腓肠肌和胫骨前肌的内侧头和外侧头。


23.如权利要求15-22中任一项所述的方法，其中该受试者中的上肢或下肢的肌肉强度得到改善。


24.如权利要求15-22中任一项所述的方法，其中该肌肉强度的改善被测量为在CMT儿科量表(CMTPeds)上的综合得分的降低或者被测量为在两年时间段内疾病进展的减少。


25.一种包含编码NT-3多肽的核酸的组合物，该组合物用于治疗人类受试者的肌肉消耗障碍或神经病变，其中：
a)该核酸包含与SEQIDNO:1的核苷酸序列90％相同的核苷酸序列，
b)该核酸包含SEQIDNO:1的核苷酸序列；
c)该核酸包含编码与SEQIDNO:2至少90％相同或与SEQIDNO:2为100％相同的氨基酸序列的核酸序列，
d)编码该NT-3多肽的核酸是如权利要求1-7中任一项所述的核酸，
e)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，并且将该rAAV以导致持续表达低浓度NT-3多肽的剂量来给予，
f)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，该组合物被配制用于肌内给予途径，并且该rAAV的剂量为约1.5x1012vg/kg至约6.5x1012vg/kg，
g)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，该组合物被配制用于肌内给予途径，并且该rAAV的剂量为约2x1012vg/kg至约6x1012vg/kg，
h)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，该组合物被配制用于肌内给予途径，并且该rAAV的剂量为约2x1012vg/kg，
i)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，该组合物被配制用于肌内给予途径，并且该rAAV的剂量为约4x1012vg/kg，
j)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，该组合物被配制用于肌内给予途径，并且给予的rAAV的剂量为约6x1012vg/kg，
k)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，该组合物被配制用于肌内注射，浓度为约2x1013vg/ml，使用约0.5至1ml的3至6次注射/块肌肉来给予，或
l)编码该NT-3多肽的核酸是重组腺相关病毒(rAAV)scAAV1.tMCK.NTF3，该组合物被配制用于肌内注射，浓度为约2x1013vg/ml，使用多次注射以总体积约5至14ml来给予。


26.一种包含编码NT-3多肽的核酸的组合物，该组合物用于在人类受试者中改善肌肉强度或刺激肌肉生长，其中
a)该核酸包含与SEQIDNO:1的核苷酸序列90％相同的核苷酸序列，
b)该核酸包含SEQIDNO:1的核苷酸序列；
c)该核...

【专利技术属性】
技术研发人员：Z撒亨克，
申请(专利权)人：全国儿童医院研究所，
类型：发明
国别省市：美国;US