一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法技术

本发明专利技术涉及药物分析技术领域，具体涉及一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法。所述的测定方法采用气相色谱‑质谱联用法进行测定。本发法灵敏度高，可以简单、快速、准确地同时测定两种基因毒性杂质。

【技术实现步骤摘要】
一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法
本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法。
技术介绍
多索茶碱是甲基黄嘌呤的衍生物，它是一种支气管扩张剂，能够通过抑制平滑肌细胞内的磷酸二酯酶而产生松弛气管平滑肌、抑制哮喘的作用。多索茶碱在合成过程中使用到了乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷，该结构有潜在基因毒性。根据该药制剂的用法用量，上述基因毒性杂质的杂质限度为20ppm，采用一般液相色谱和气相色谱的分离分析方法，此两种基因毒性杂质的测定灵敏度较难达到药品检验的控制要求。因此无论从药物质量控制还是质量标准研究着眼，都需要开发一种操作简便、灵敏度高的多索茶碱基因毒性杂质乙酸乙烯酯和/或2-溴-1,1-二氧基乙烷的测定方法，以便控制原料药质量和制定最严谨的药品测定质量标准应用于原料和制剂的流通和使用过程。
技术实现思路
针对现有技术的不足，为了解决现有分析方法中缺少对乙酸乙烯酯和/或2-溴-1,1-二氧基乙烷两种基因毒性杂质进行测定的实际问题，本专利技术提供一种多索茶碱原料药中相关上述两种基因毒性杂质的测定方法。本专利技术提供的多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法，采用气相色谱-质谱联用法进行测定，具体测定方法如下：(1)气相色谱条件：色谱柱：VF-1301ms气相色谱柱；进样口温度：200℃；接口温度：230℃；升温程序：50℃保持3min，以15℃/min升至110℃保持2min，以50℃/min升至200℃保持5min；载气：高纯氦气；进样方式：直接进样，分流比：20:1；进样量：1μL；溶剂延迟：1min，4min～8min关闭测定器(溶剂峰)；(2)质谱条件：离子源类型：EI源，70eV；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；采集模式：选择离子监测模式(SIM)。优选地，所述色谱柱为：VF-1301ms(30m×1μm×0.25mm)气相色谱柱。优选地，所述基因毒性杂质为乙酸乙烯酯和/或2-溴-1,1-二氧基乙烷。更优选地，所述基因毒性杂质为乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷，即所述测定方法同时测定乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷。优选地，所述基因毒性杂质乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷在测定条件下选择的特征离子为：优选地，所述测定方法采用溶剂切除和干扰组分切除方法。优选地，所述基因毒性杂质乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷的测定灵敏度分别为0.1ppm和0.01ppm。优选地，所述基因毒性杂质乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷的定量限分别为0.7ppm和0.06ppm。优选地，所述测定方法包括以下步骤：1)样品配制：混合标准系列溶液配制：分别精密称取乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷对照品适量，用N,N-二甲基甲酰胺配制成单个对照品储备液，分别精密量取单个对照品储备液适量至同一容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，制成混合对照品储备液；再分别精密吸取混合对照品储备液适量，稀释至不同系列浓度，得混合标准系列溶液；供试品配制：准确称取多索茶碱粗品适量至容量瓶中，加适量N,N-二甲基甲酰胺震荡混匀，密封超声至样品完全溶解，加N,N-二甲基甲酰胺定容至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，滤液作为供试品；2)标准曲线绘制：将上述混合标准系列溶液注入气相色谱-质谱仪中，测定相应的峰面积，以标准溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线并列出校准曲线的数学方程和线性范围；3)测定：将上述供试品精密进样注入气相色谱-质谱联用仪，得到供试品色谱峰面积；4)计算：将供试品色谱峰面积代入上述标准曲线计算杂质乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷的含量。在一个具体实施方式中，所述测定方法包括以下步骤：1)样品配制：混合标准系列溶液配制：分别精密称取乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷对照品适量，用N,N-二甲基甲酰胺配制成乙酸乙烯酯浓度为3.846mg/ml，2-溴-1,1-二氧基乙烷浓度为0.3167mg/ml的单个对照品储备液，分别精密量取单个对照品储备液1ml至同一100ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，制成混合对照品储备液，再分别精密吸取混合对照品储备液适量，稀释至乙酸乙烯酯浓度分别为0.769μg/ml、1.23μg/ml、1.54μg/ml、1.92μg/ml、2.31μg/ml，2-溴-1,1-二氧基乙烷浓度分别为0.0633μg/ml、0.101μg/ml、0.127μg/ml、0.158μg/ml、0.190μg/ml的混合标准系列溶液；供试品配制：准确称取多索茶碱粗品0.3g至10ml容量瓶中，加适量N,N-二甲基甲酰胺震荡混匀，密封超声1min至样品完全溶解，加N,N-二甲基甲酰胺定容至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，滤液作为供试品；2)标准曲线绘制：将上述混合标准系列溶液注入气相色谱-质谱仪中，测定相应的峰面积，以标准溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线并列出校准曲线的数学方程和线性范围；3)测定：将上述供试品精密进样1μl，注入气相色谱-质谱联用仪，得到供试品色谱峰面积；4)计算：将供试品色谱峰面积代入上述标准曲线计算杂质乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷的含量。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术提供的多索茶碱原料药中基因毒性的测定方法，可以同时有效的检出乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷两种基因毒性杂质，气相色谱-质谱联用法能够大幅提高测定灵敏度，质谱溶剂切除技术，干扰成分切除技术和直接进样测定sim离子能够准确定量目标化合物，操作简单，结果准确。本专利技术通过气相色谱-质谱联用法测定多索茶碱原料药中基因毒性杂质，采用溶剂切除和干扰组分切除的方法，有效的减少了样品对质谱测定器的污染。本专利技术通过气相色谱-质谱联用法测定多索茶碱原料药中基因毒性杂质，采用程序升温方法，有效的减少了毛细管色谱柱的固定液的流失，提高色谱柱使用寿命。本专利技术通过气相色谱-质谱联用法测定多索茶碱原料药中基因毒性杂质，采用溶剂切除和干扰组分切除的方法，极大的净化了测试背景。另外程序升温和SIM离子测定，能够准确识别样品母离子和碎片离子，保证了痕量测定的准确性。本方法乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷测定灵敏度能分别达到0.1ppm和0.01ppm，具有很高的灵敏度和专属性。本专利技术通过气相色谱-质谱联用法测定多索茶碱原料药中基因毒性杂质，乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷定量限能够达到0.7ppm和0.06ppm，能够准确定量痕量基因毒性杂质，实现生产控制和完善测定质量标准的目的。总之，本专利技术提供的测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法，其特征在于，所述测定方法采用气相色谱-质谱联用法进行测定，具体测定条件如下：/n(1)气相色谱条件：/n色谱柱：VF-1301ms气相色谱柱；/n进样口温度：200℃；/n接口温度：230℃；/n升温程序：50℃保持3min，以15℃/min升至110℃保持2min，以50℃/min升至200℃保持5min；/n载气：高纯氦气；/n进样方式：直接进样，分流比：20:1；/n进样量：1μL；/n溶剂延迟：1min，4min～8min关闭测定器；/n(2)质谱条件：/n离子源类型：EI源，70eV；/n离子源温度：230℃；/n四级杆温度：150℃；/n采集模式：选择离子监测模式。/n

【技术特征摘要】
1.一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法，其特征在于，所述测定方法采用气相色谱-质谱联用法进行测定，具体测定条件如下：
(1)气相色谱条件：
色谱柱：VF-1301ms气相色谱柱；
进样口温度：200℃；
接口温度：230℃；
升温程序：50℃保持3min，以15℃/min升至110℃保持2min，以50℃/min升至200℃保持5min；
载气：高纯氦气；
进样方式：直接进样，分流比：20:1；
进样量：1μL；
溶剂延迟：1min，4min～8min关闭测定器；
(2)质谱条件：
离子源类型：EI源，70eV；
离子源温度：230℃；
四级杆温度：150℃；
采集模式：选择离子监测模式。


2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述色谱柱为：VF-1301ms(30m×1μm×0.25mm)气相色谱柱。


3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述基因毒性杂质为乙酸乙烯酯和/或2-溴-1,1-二氧基乙烷。


4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述基因毒性杂质为乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷，即所述测定方法同时测定乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷。


5.根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述基因毒性杂质乙酸乙烯酯和2-溴-1,1-二氧基乙烷在测定条件下选择的特征离子为：





6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗晶，戴涌，柳小秦，安学霞，黄佳，焦文冬，刘文龙，唐娜，魏亚宁，吴沛佳，
申请(专利权)人：陕西省食品药品监督检验研究院，
类型：发明
国别省市：陕西;61