杂交瘤细胞株2H3及其产生的抗体和应用制造技术

本发明专利技术涉及单抗制备技术领域，具体公开一种杂交瘤细胞株2H3及其产生的抗体和应用。所述杂交瘤细胞株2H3的保藏号为CTCC NO:C2019217，其分泌的单克隆抗体可用于制备CK‑MB蛋白检测试剂和急性心肌梗死早期诊断试剂。本发明专利技术提供的杂交瘤细胞株2H3分泌的单克隆抗体与CK‑MB蛋白的结合具有灵敏度高、特异性好的优点。

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞株2H3及其产生的抗体和应用
本专利技术涉及单抗制备
，尤其涉及一种杂交瘤细胞株2H3及其产生的抗体和应用。
技术介绍
急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction，AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死，临床上多表现为剧烈而持久的胸骨后疼痛，休息及硝酸酯类药物不能完全缓解，伴有血清心肌酶活性增高及进行性心电图变化，可并发心律失常、休克或心力衰竭，常可危及生命。中国近年来每年此病新增至少50万，现有患者至少200万。心肌损伤标志物中的肌酸激酶MB同工酶(creatinekinaseMB，CK-MB)的浓度被视为诊断急性心肌梗死较敏感的指标之一。CK为二聚体酶由M、B两个亚基两两组成，包括脑型(BB，主要存在于脑细胞)、肌肉型(MM)、杂化型(MB，主要存在于心肌细胞)和线粒体型(MiMi)4种，CK-MM和CK-BB的存在均影响CK-MB浓度检测的准确性。现有技术中用于诊断急性心肌梗死的方法包括：(1)心电图特征性改变，新出现Q波及ST段抬高和ST-T动态演变；(2)心肌损伤标志物升高，肌酸激酶同工酶(CK-MB)可于发病3-6小时开始增高，于3-4d恢复正常；(3)其他血象检测，白细胞数增多，中性粒细胞数增多，嗜酸性粒细胞数减少或消失，血沉加快，血清肌凝蛋白轻链增高。关于心电图特征性改变的诊断方法，由于国内、国外缺乏较大样本的临床对照研究，目前各个权威机构推荐的急性心肌梗死的心电图诊断标准的灵敏度和特异性尚不清楚，没有统一标准，限制了其应用；用于诊断急性心肌梗死的心肌损伤标志物的检测特异性、准确性均不尽人意；通过血象检测诊断急性心肌梗死不能体现早期诊断的理念。基于现有技术中检测急性心肌梗死的手段的局限性，寻找一种灵敏性和准确性高的用于急性心肌梗死早期诊断的方法是亟待解决的问题。
技术实现思路
针对现有通过检测血清蛋白标志物来诊断急性心肌梗死的方法存在误差大、准确度低的问题，本专利技术提供一种杂交瘤细胞株2H3及其产生的抗体和应用。为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：一种杂交瘤细胞株2H3，所述杂交瘤细胞株2H3的保藏号为CTCCNO:C2019217，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址是武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏时间是2019年10月14日，命名为抗CKMB的杂交瘤细胞株2H3。相对于现有技术，本专利技术提供的杂交瘤细胞株2H3进行扩大培养后，其产生的单克隆抗体为IgG3型，抗体效价高。杂交瘤细胞株2H3产生的单克隆抗体的对CK-MB蛋白结合的灵敏度高、特异型好，存在多种急性心肌梗死的指标蛋白(CK-MB、CK-MM和CK-BB)的情况下，杂交瘤细胞株2H3产生的单克隆抗体可特异性的结合CK-MB蛋白，提高检测结果的准确性。本专利技术还提供所述杂交瘤细胞株2H3分泌的单克隆抗体。本专利技术还提供所述单克隆抗体在制备CK-MB蛋白检测试剂中的应用。本专利技术还提供所述单克隆抗体在制备急性心肌梗死早期诊断试剂中的应用。本专利技术还提供一种CK-MB蛋白的免疫检测试剂盒，包括所述的单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的M180抗体。相对于现有技术，本专利技术提供的包含所述的单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的M180抗体的试剂盒，通过双抗夹心ELISA方法，可快速、准确的检测出血清中CK-MB蛋白的浓度变化，显著提高了急性心肌梗死早期诊断效率，且该试剂盒检测的精密度好，为急性心肌梗死的早期诊断提供了可靠保障。优选的，所述试剂盒还包括酶标板、包被液、封闭液、洗涤液、显色液和终止液。优选的，所述包被液为45-55mM的碳酸盐溶液；所述封闭液为10％(v/v)的小牛血清；所述洗涤液为含有0.08-0.12％(v/v)吐温的0.008-0.012M的PBS溶液；所述显色液为TMB显色液；所述终止液为0.8-1.2M的硫酸。优选的，本专利技术还提供所述试剂盒的使用方法，具体为：将所述单克隆抗体固定在所述酶标板上作为捕获抗体，捕获待测样品中的抗原蛋白，以辣根过氧化物酶标记的M180抗体作为检测抗体与被捕获的所述抗原蛋白结合，加入所述显色液，通过显色程度判断抗原蛋白浓度。相对于现有技术，本专利技术提供的CK-MB蛋白的免疫检测试剂盒的使用方法，方便快捷、仪器设备要求低、可推广使用。优选的，所述使用方法具体包括以下操作：将所述捕获抗体用所述包被液稀释后加入所述酶标板中，使所述捕获抗体固定在所述酶标板上，用所述洗涤液对所述酶标板进行洗涤，再用所述封闭液对所述酶标板进行封闭，然后加入待测样品进行反应，用洗涤液洗涤，加入所述检测抗体，反应完成后用所述洗涤液洗涤，加入所述显色液进行显色反应后，加入所述终止液终止反应；测定所述酶标板孔中反应液的OD值，根据所述OD值判断抗原蛋白的浓度。优选的，所述捕获抗体用所述包被液稀释至1-10μg/μL。优选的，所述检测抗体的加入浓度为50-500ng/μL。优选的，所述捕获抗体与所述检测抗体的质量比为2-200:1。上述优选的试剂盒的使用方法可进一步增加试剂盒对CK-MB蛋白检测的灵敏度，使检测限低至0.815ng/mL。附图说明图1是本专利技术实施例1中杂交瘤细胞株2H3分泌的单克隆抗体Westernblot检测图谱；图2是本专利技术实施例2中提到的双抗夹心ELISA方法的原理图；图3是本专利技术实施例2中建立的杂交瘤细胞株2H3分泌的单克隆抗体的反应标准曲线图。图4是本专利技术实施例3中CK-MB蛋白免疫检测试剂盒对CK-MB蛋白的特异性检测图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1杂交瘤细胞株2H3的建立1.1实验材料小牛血清、HAT选择培养基均购自Gibco公司；弗氏完全/不完全佐剂购于Sigma公司；实验动物为Balb/c小鼠，6-8周龄，雌性，按一级动物喂养；CK-MB蛋白标准品购自美国LEE生物公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的M180抗体，购自北京中杉公司；酶标板，购自厦门云鹏科技公司。1.2动物免疫选取7-8周龄的雌性BALB/c小鼠9只，分为3组，每组3只，将CK-MB蛋白用生理盐水稀释至0.5ug/uL，取80uLCK-MB蛋白稀释液，加入等体积的佐剂进行乳化，并在小鼠颈背部皮下进行多点注射，第一次免疫用弗氏完全佐剂进行乳化，其后的免疫用弗氏不完全佐剂进行乳化，每隔2周加强免疫一次，在第五次免疫后，取9只免疫小鼠，饲养9天，断尾取血，用间接ELISA检测方法，检测小鼠血清抗体效价，具体免疫流程如表1所示。表1小鼠免疫流程第五次免疫后，用间接ELISA测定小鼠的血清效价，测定结果如表2所示。...

【技术保护点】
1.一种杂交瘤细胞株2H3，其特征在于：所述杂交瘤细胞株2H3的保藏号为CTCC NO:C2019217。/n

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株2H3，其特征在于：所述杂交瘤细胞株2H3的保藏号为CTCCNO:C2019217。


2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株2H3分泌的单克隆抗体。


3.权利要求2所述的抗体在制备CK-MB蛋白检测试剂中的应用。


4.权利要求2所述的抗体在制备急性心肌梗死早期诊断试剂中的应用。


5.一种CK-MB蛋白的免疫检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求2所述的单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的M180抗体。


6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：还包括酶标板、包被液、封闭液、洗涤液、显色液和终止液。


7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述包被液为45-55mM的碳酸盐溶液；所述封闭液为10％(v/v)的小牛血清；所述洗涤液为含有0.08-0.12％(v/v)吐温的0.008-0.012M的PBS溶液；所述显色液为TMB显色液；所述终止液为0.8-1.2M的硫酸。


8.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：程华，武向丽，孙劲冲，闫静辉，
申请(专利权)人：河北省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：河北;13