本发明专利技术公开了一种用于扩增沙门氏菌(Salmonella)的CAMP引物组及试剂盒。所述CAMP引物组包括以下三组引物组中的一组或两组以上：针对Salmonella的CFSA231完整基因组扩增的引物组、针对Salmonella的CFSA664完整基因组扩增的引物组、针对Salmonella的CFSA1096完整基因组扩增的引物组。CAMP引物组由Salmonella的三个特异保守区域CFSA231基因组、CFSA664基因组、CFSA1096基因组设计获得，各保守区域基因组由6条引物组成，包括序列主引物(NF/NR)一组、外引物(F2/R2)一组、内引物(LF/LR)一组。本发明专利技术提供的引物组敏感性高、特异性强，由其制成的试剂盒能够快速、准确的检测到待测样品中含有的沙门氏菌。本发明专利技术所提供的可视化试剂盒将为现场检测提供极大便利，将其制备成为试剂盒可实现对沙门氏菌快速准确的检测。
【技术实现步骤摘要】
一种用于扩增沙门氏菌的CAMP引物组及试剂盒和应用
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种用于扩增沙门氏菌的CAMP引物组及试剂盒和应用。
技术介绍
沙门氏菌病(Salmonellosis)是一种由沙门氏菌(Salmonella)引起的在全球范围内肆虐的公共卫生疾病。其主要病症表现为腹泻、发烧、头痛、腹部绞痛和呕吐等。沙门氏菌是我国最常见的食源性致病菌。在世界范围内，几乎所有即食食品和大部分过程标准中均将沙门氏菌列为限量指标。我国由细菌引起的食物中毒中，70％-80％是由沙门氏菌引起的。主要通过肉类和蛋类制品传播，在环境中例如粪便、土壤和水中可以保存5个月至2年之久。目前沙门氏菌的治疗主要通过抗生素进行治疗。根据文献报道，已经分离出很多能够抵抗多种抗生素的沙门氏菌菌株。这使得对于该疾病的防控显得尤为重要，而对于该细菌的快速、特异、高灵敏的诊断则为防控中的重要一环。我国现行检测标准(GB4789.4-2016)主要通过鉴别培养基以及血清检测试验进行鉴别。方法复杂，最快需要三天的时间才能得到检测结果，难以应对海关、防疫站、生产企业等的需求。因此，面向现场的快速、灵敏、高特异性核酸标志物检测技术研发将为Salmonella的防控提供强有力的保障。基于竞争性互补配对的核酸恒温扩增技术(Competitiveannealingmediatedamplificationofnucleicacids，CAMP)是2018年本公司委托中国科学院过程工程研究所开发的替代环介导恒温扩增(LAMP)的方法(见CN107446919A)。该方法主要利用2至6种不同的特异性引物识别靶基因的特定区域，在等温条件进行扩增反应。与常规基因检测手段(如PCR等)相比，CAMP反应在恒温水浴箱便可完成，仪器设备要求低，较传统PCR和培养法操作简单许多，不需要专业人士也可准确完成，适合基层医疗机构及地方检验检疫部门的应用。并且，CAMP还可以大大缩短操作时间，减少样品污染机会，适合应用于Salmonella的快速诊断。目前，关于Salmonella的多保守位点的CAMP检测技术还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是，提供一种用于扩增沙门氏菌的CAMP引物组及试剂盒和应用。旨在解决现有技术中检测方法复杂、成本高的技术问题。本专利技术为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：本专利技术用于扩增沙门氏菌的CAMP引物组，所述CAMP引物组包括以下三组引物组中的一组或两组以上：针对Salmonella的CFSA231完整基因组(GenBank:AE014613，其核苷酸序列如SEQIDNO.19所示)扩增的引物组、针对Salmonella的CFSA664完整基因组(GenBank:KT795353，其核苷酸序列如SEQIDNO.20所示)扩增的引物组、针对Salmonella的CFSA1096完整基因组(GenBank:KT795358，其核苷酸序列如SEQIDNO.21所示扩增的引物组。所述CFSA231完整基因组扩增的引物组包括三对引物，分别为：1-Sa-NF：其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，1-Sa-NR：其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；1-Sa-LF：其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，1-Sa-LR：其核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；以及，1-Sa-F2：其核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，1-Sa-R2：其核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；所述CFSA664完整基因组扩增的引物组包括三对引物，分别为：2-Sa-NF：其核苷酸序列如SEQIDNO.7所示，2-Sa-NR：其核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；2-Sa-LF：其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示，2-Sa-LR：其核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；以及，2-Sa-F2：其核苷酸序列如SEQIDNO.11所示，2-Sa-R2：其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示；所述CFSA1096完整基因组扩增的引物组包括三对引物，分别为：3-Sa-NF：其核苷酸序列如SEQIDNO.13所示，3-Sa-NR：其核苷酸序列如SEQIDNO.14所示；3-Sa-LF：其核苷酸序列如SEQIDNO.15所示，3-Sa-LR：其核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；以及，3-Sa-F2：其核苷酸序列如SEQIDNO.17所示，3-Sa-R2：其核苷酸序列如SEQIDNO.18所示。作为优选实施方案，所述CAMP引物组包括三组引物组：CFSA231完整基因组扩增的引物组，CFSA664完整基因组扩增的引物组，CFSA1096完整基因组扩增的引物组。本专利技术提供的CAMP引物组由Salmonella的三个特异保守区域CFSA231基因组、CFSA664基因组、CFSA1096基因组(也称靶基因)设计获得，各保守区域基因组由6条引物组成，包括序列主引物(NF/NR)一组、外引物(F2/R2)一组、内引物(LF/LR)一组。其中，NF/NR为CAMP的主要引物，NF由靶基因中段的N区的互补片段Nc与5’端的F1区连接而成，NR由靶基因中段的N区和3’端的R1c区的互补片段R1连接而成。F2/R2分别为上下游外部引物，F2与靶基因F2区域相同，R2与靶基因的R2c区域互补(所述的靶基因区域在公开专利CN107446919A中有详细描述)。LF/LR分别为上下游内部引物。具体核苷酸序列如表1所示：表1引物序列序列号引物名称核苷酸序列SEQIDNO.11-Sa-NFcgtttgcacagctctttggcgcaccgtttgaatccSEQIDNO.21-Sa-NRccaaagagctgtgcaaacgtcagtgatggacagcgagSEQIDNO.31-Sa-LFcggctttgatatcgatctggSEQIDNO.41-Sa-LRgatggcatcaattttcttcgcSEQIDNO.51-Sa-F2gattcgtatcggtaccgatccSEQIDNO:61-Sa-R2cgcgatttcctgctggcgcSEQIDNO.72-Sa-NFgcttgtcggtaaacgcgatttccatgtcctcgctgtccatcacSEQIDNO.82-Sa-NRggaaatcgcgtttaccgacaagctcagagttcttcgccaccacSEQIDNO.92-Sa-LFgtccatcactgaaaagcgcSEQIDNO.102-Sa-LRccaccagacgggaatcagcggcgSEQIDNO.112-Sa-F2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于扩增沙门氏菌的CAMP引物组，其特征在于，所述CAMP引物组包括以下三组引物组中的一组或两组以上：针对Salmonella的CFSA231完整基因组扩增的引物组、针对Salmonella的CFSA664完整基因组扩增的引物组、针对Salmonella的CFSA1096完整基因组扩增的引物组；/n所述CFSA231完整基因组扩增的引物组包括三对引物，分别为：1-Sa-NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，1-Sa-NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；1-Sa-LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，1-Sa-LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；以及，1-Sa-F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，1-Sa-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；/n所述CFSA664完整基因组扩增的引物组包括三对引物，分别为：2-Sa-NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，2-Sa-NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；2-Sa-LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，2-Sa-LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；以及，2-Sa-F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，2-Sa-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；/n所述CFSA1096完整基因组扩增的引物组包括三对引物，分别为：3-Sa-NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，3-Sa-NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；3-Sa-LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，3-Sa-LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；以及，3-Sa-F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，3-Sa-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。/n...
【技术特征摘要】
1.一种用于扩增沙门氏菌的CAMP引物组，其特征在于，所述CAMP引物组包括以下三组引物组中的一组或两组以上：针对Salmonella的CFSA231完整基因组扩增的引物组、针对Salmonella的CFSA664完整基因组扩增的引物组、针对Salmonella的CFSA1096完整基因组扩增的引物组；
所述CFSA231完整基因组扩增的引物组包括三对引物，分别为：1-Sa-NF：其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，1-Sa-NR：其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；1-Sa-LF：其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，1-Sa-LR：其核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；以及，1-Sa-F2：其核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，1-Sa-R2：其核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；
所述CFSA664完整基因组扩增的引物组包括三对引物，分别为：2-Sa-NF：其核苷酸序列如SEQIDNO.7所示，2-Sa-NR：其核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；2-Sa-LF：其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示，2-Sa-LR：其核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；以及，2-Sa-F2：其核苷酸序列如SEQIDNO.11所示，2-Sa-R2：其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示；
所述CFSA1096完整基因组扩增的引物组包括三对引物，分别为：3-Sa-NF：其核苷酸序列如SEQIDNO.13所示，3-Sa-NR：其核苷酸序列如SEQIDNO.14所示；3-Sa-LF：其核苷酸序列如SEQIDNO.15所示，3-Sa-LR：其核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；以及，3-Sa-F2：其核苷酸序列如SEQIDNO.17所示，3-Sa-R2：其核苷酸序列如SEQIDNO.18所示。
2.如权利要求1所述的用于扩增沙门氏菌的CAMP引物组，其特征在于：所述CAMP引物组包括三组引物组：CFSA231完整基因组扩增的引物组，CFSA664完整基因组扩增的引物组，CFSA1096完整基因组扩增的引物组。
3.一种用于检测沙门氏菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜昱光，毛瑞，梁组源，刘雪连，刘滢，孙明，
申请(专利权)人：中科芯瑞苏州生物科技有限公司，北京大北农科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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