一种高效分离人滑膜原代细胞的方法技术

本发明专利技术属于生物技术及细胞培养技术领域，具体涉及一种高效分离人滑膜原代细胞的方法。本发明专利技术所述高效分离人滑膜原代细胞的方法，采用Hank′s平衡盐溶液对滑膜进行预处理，并在加入Ⅱ型胶原酶和糖苷酶消化处理后于CO

【技术实现步骤摘要】
一种高效分离人滑膜原代细胞的方法
本专利技术属于生物技术及细胞培养
，具体涉及一种高效分离人滑膜原代细胞的方法。
技术介绍
滑膜(synovium)是关节囊的内层，呈淡红色，薄而柔软，由疏松结缔组织组成。滑膜可以分泌滑液，在关节活动中起重要作用。正常的滑膜分为两层，即薄的细胞层(内腔层)和血管层(内膜下层)。滑膜细胞起源于骨骼胚基中的间充质。滑膜组织内包含多种细胞，如滑膜细胞、白细胞、脂肪细胞等。滑膜细胞又分A型和B型两种。巨噬细胞样A型细胞(MLC)有丝状伪足，具有吞噬功能，不具有增殖能力。B型滑膜细胞(FLC)又称成纤维滑膜细胞，分裂增殖迅速，可以进行体外传代培养。由于滑膜细胞可以分泌多种炎症介质，如肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素1(IL-1)等介质参与关节损伤的病理过程。滑膜细胞是维持关节正常功能的重要组织结构，同时也是各种关节疾病疾患时的主要病变部位，特别是内风湿性关节炎中滑膜组织的改变最为明显。通过体外培养滑膜细胞，并检测其功能，在研究骨关节炎发病机制、临床疗效作用机制、抗风湿等新型药物筛选及药理机制方面具有重要意义本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效分离人滑膜原代细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)取人体新鲜滑膜组织置于无菌培养皿中，采用Hank′s平衡盐混合液反复冲洗，并将清洗后的滑膜组织转移至无菌培养瓶中，以无菌剪刀剪碎，移入EP管并加入Hank′s平衡盐混合液混匀，离心并弃上清；/n(2)收集离心后的沉淀物，加入含有青链霉素混合液的DMEM培养液重悬，并加入含Ⅱ型胶原酶和糖苷酶的消化液，置于CO

【技术特征摘要】
1.一种高效分离人滑膜原代细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取人体新鲜滑膜组织置于无菌培养皿中，采用Hank′s平衡盐混合液反复冲洗，并将清洗后的滑膜组织转移至无菌培养瓶中，以无菌剪刀剪碎，移入EP管并加入Hank′s平衡盐混合液混匀，离心并弃上清；
(2)收集离心后的沉淀物，加入含有青链霉素混合液的DMEM培养液重悬，并加入含Ⅱ型胶原酶和糖苷酶的消化液，置于CO2培养箱中进行消化培养；
(3)培养结束后，取出培养物并加入胰蛋白酶，吹打成浆状，随后用无菌细胞过滤筛过滤，收集滤液并离心，弃上清；
(4)收集离心后的沉淀物，用DMEM高糖培养液重悬沉淀物，置于细胞培养瓶于CO2细胞培养箱中，进行细胞培养，待细胞贴壁，即得所需人滑膜原代细胞。


2.根据权利要求1所述的高效分离人滑膜原代细胞的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述Hank′s平衡盐包括如下成分：





3.根据权利要求1或2所述的高效分离人滑膜原代细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述青链霉素在所述DMEM培养液中的质量浓度为0.5-1.5wt％。


4.根据权利要求1-3任一项所述的高效分离人滑膜原代细胞的方法，其特征在于，所述步...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丹丹，曹盛楠，师浩钧，刘凡杰，孙国栋，王平，王磊磊，李华忠，陈元振，侯广建，王涛，孟岩，任鹏程，
申请(专利权)人：山东省医药生物技术研究中心山东省病毒研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37