小分子物质在制备体外维持肌腱干细胞表型的试剂中的应用制造技术

本发明专利技术提供了小分子物质在制备体外维持肌腱干细胞表型的试剂中的应用，属于细胞培养技术领域，所述小分子物质包括SB939、CP‑673451、卵磷脂、AZD2858、盐酸伊达比星、硫酸长春新碱和长春碱中的一种或几种。本发明专利技术中的小分子物质通过提高肌腱系特异基因和蛋白的表达水平，来体外维持肌腱干细胞表型。

【技术实现步骤摘要】
小分子物质在制备体外维持肌腱干细胞表型的试剂中的应用
本专利技术属于细胞培养
，尤其涉及小分子物质在制备体外维持肌腱干细胞表型的试剂中的应用。
技术介绍
肌腱损伤为常见的运动系统损伤，外力引起的肌肉突然猛力的收缩，可造成肌腱起止点的完全或部分撕裂，称肌腱断裂。若肌腱长期反复经受轻微外伤，或肌腱本身有慢性磨损，日久引起肌腱断裂，称肌腱自发性断裂。肌腱损伤可造成疼痛、局部肿胀、与功能障碍。目前，肌腱损伤或断裂尚未有理想的治疗方法，临床治疗通常是对症处理，包括药物治疗、物理治疗、手术治疗，如直接缝合、自体或异体移植、人工合成材料修补等。但由于修复愈合能力较差，并发症发病率高且长期疗效不稳定，容易出现肌腱粘连、钙化、强度降低，甚至再次断裂等问题。组织工程技术的发展为提高肌腱的修复质量带来了广阔前景。肌腱干细胞作为组织工程理想的种子细胞来源之一，不仅具有像骨髓间充质干细胞一样的干细胞特性，而且高表达肌腱特异性的基因和蛋白质，如胶原I，粘蛋白C和纤连蛋白等。因此，肌腱干细胞是一种非常有潜力应用于肌腱组织工程中的种子细胞。肌腱干细胞来源有限，需在体外扩增后应用于组织工程治疗。但是肌腱干细胞在体外扩增培养之后会逐渐丢失表型，肌腱相关基因表达显著下降。以肌腱干细胞作为种子细胞修复后的肌腱在力学性能上，特别是在微观结构上与正常肌腱仍有显著区别，修复组织的超微结构显示其由大量的小直径的胶原纤维构成，这些小直径胶原纤维正是导致愈后肌腱力学性能低下的直接因素。不仅如此，干细胞用在肌腱修复时易出现异位骨化现象，导致肌腱修复失败。因此，目前尚缺乏适合肌腱干细胞在体外扩增过程中维持表型的培养条件。生物活性因子作为培养基的添加成分，由于可控、操作便捷，已经被广泛用于干细胞分化调控和组织工程领域。多种生长因子具有肌腱系诱导潜力，但是本领域目前没有达到共识和公认的培养基成分。利用生长因子进行分阶段诱导的策略仍具有一定的局限性，其低稳定性与高昂的价格一定程度限制了广泛使用，同时存在细胞向骨系、软骨系分化的风险趋势。相较大分子，小分子药物不易降解，易于合成，易储存，易运输，易标准化，细胞通透性强，没有免疫原性，小分子作用于蛋白质层面，且未发现有致瘤性，有良好的临床应用前景。最重要的是，小分子在诱导细胞分化和转分化，改变细胞命运方面具有巨大潜力。因此，提供促进肌腱干细胞表型维持的小分子及小分子组合在肌腱干细胞体外培养应用中具有重要意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供小分子物质在制备体外维持肌腱干细胞表型的试剂中的应用，本专利技术的小分子物质能够在体外维持肌腱干细胞表型。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了小分子物质在制备体外维持肌腱干细胞表型的试剂中的应用，所述小分子物质包括SB939、CP-673451、卵磷脂、AZD2858、盐酸伊达比星、长春新碱磷酸盐和长春碱中的一种或几种；所述SB939的CAS号为929016-96-6；所述CP-673451的CAS号为343787-29-1；所述卵磷脂的CAS号为8002-43-5；所述AZD2858的CAS号为486424-20-8；所述盐酸伊达比星的CAS号为57852-57-0；所述硫酸长春新碱的CAS号为2068-78-2；所述长春碱的CAS号为865-21-4。优选的，当所述小分子物质包括SB939、CP-673451、卵磷脂和AZD2858时，所述SB939、CP-673451、卵磷脂和AZD2858的摩尔比为1:2:2:2。优选的，当所述小分子物质包括SB939、CP-673451和卵磷脂时，所述SB939、CP-673451和卵磷脂的摩尔比为1:2:2。优选的，当所述小分子物质包括SB939、CP-673451和AZD2858时，所述SB939、CP-673451和AZD2858的摩尔比为1:2:2。优选的，当所述小分子物质包括SB939、卵磷脂和AZD2858时，所述SB939、卵磷脂和AZD2858的摩尔比为1:2:2。优选的，当所述小分子物质包括CP-673451、卵磷脂和AZD2858时，所述CP-673451、卵磷脂和AZD2858的摩尔比为1:1:1。优选的，所述小分子物质的溶剂包括二甲基亚砜。本专利技术还提供了小分子物质在制备提高肌腱系特异基因表达水平的试剂中的应用，所述小分子物质包括SB939、CP-673451、卵磷脂、AZD2858、盐酸伊达比星、长春新碱磷酸盐和长春碱中的一种或几种；所述SB939的CAS号为929016-96-6；所述CP-673451的CAS号为343787-29-1；所述卵磷脂的CAS号为8002-43-5；所述AZD2858的CAS号为486424-20-8；所述盐酸伊达比星的CAS号为57852-57-0；所述硫酸长春新碱的CAS号为2068-78-2；所述长春碱的CAS号为865-21-4。优选的，所述肌腱系特异基因包括Scleraxis基因。本专利技术提供了小分子物质在制备体外维持肌腱干细胞表型的试剂中的应用，所述小分子物质包括SB939、CP-673451、卵磷脂、AZD2858、盐酸伊达比星、长春新碱磷酸盐和长春碱中的一种或几种；所述SB939的CAS号为929016-96-6；所述CP-673451的CAS号为343787-29-1；所述卵磷脂的CAS号为8002-43-5；所述AZD2858的CAS号为486424-20-8；所述盐酸伊达比星的CAS号为57852-57-0；所述硫酸长春新碱的CAS号为2068-78-2；所述长春碱的CAS号为865-21-4。本专利技术中的小分子物质通过提高肌腱系特异基因和蛋白的表达水平，来体外维持肌腱干细胞表型。附图说明图1示肌腱干细胞体外培养过程中表型丢失，其中A示ScxGFP转基因小鼠刚分离出的尾腱和体外传代培养过程中，不同代次细胞的荧光表达情况(绿色：ScxGFP；P：细胞代次；标尺200μm)；B示体外传代培养过程中肌腱系特异基因Scx、Tnmd和Thbs4的表达情况(n＝3，*p<0.05,**p<0.01，***p<0.001)；图2示单个小分子SB939有效维持肌腱干细胞表型，提升ScxGFP表达水平，小分子浓度2μM，标尺200μm；图3示单个小分子CP-673451有效维持肌腱干细胞表型，提升ScxGFP表达水平，小分子浓度2μM，标尺200μm；图4示单个小分子卵磷脂有效维持肌腱干细胞表型，提升ScxGFP表达水平，小分子浓度2μM，标尺200μm；图5示单个小分子AZD2858有效维持肌腱干细胞表型，提升ScxGFP表达水平，小分子浓度2μM，标尺200μm；图6示单个小分子AZD2858有效维持肌腱干细胞表型，提升ScxGFP表达水平，小分子浓度10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.小分子物质在制备体外维持肌腱干细胞表型的试剂中的应用，所述小分子物质包括SB939、CP-673451、卵磷脂、AZD2858、盐酸伊达比星、硫酸长春新碱和长春碱中的一种或几种；/n所述SB939的CAS号为929016-96-6；/n所述CP-673451的CAS号为343787-29-1；/n所述卵磷脂的CAS号为8002-43-5；/n所述AZD2858的CAS号为486424-20-8；/n所述盐酸伊达比星的CAS号为57852-57-0；/n所述硫酸长春新碱的CAS号为2068-78-2；/n所述长春碱的CAS号为865-21-4。/n

【技术特征摘要】
1.小分子物质在制备体外维持肌腱干细胞表型的试剂中的应用，所述小分子物质包括SB939、CP-673451、卵磷脂、AZD2858、盐酸伊达比星、硫酸长春新碱和长春碱中的一种或几种；
所述SB939的CAS号为929016-96-6；
所述CP-673451的CAS号为343787-29-1；
所述卵磷脂的CAS号为8002-43-5；
所述AZD2858的CAS号为486424-20-8；
所述盐酸伊达比星的CAS号为57852-57-0；
所述硫酸长春新碱的CAS号为2068-78-2；
所述长春碱的CAS号为865-21-4。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，当所述小分子物质包括SB939、CP-673451、卵磷脂和AZD2858时，所述SB939、CP-673451、卵磷脂和AZD2858的摩尔比为1:2:2:2。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，当所述小分子物质包括SB939、CP-673451和卵磷脂时，所述SB939、CP-673451和卵磷脂的摩尔比为1:2:2。


4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，当所述小分子物质包括SB939、CP-673451和AZD2858时，所述SB939、CP-673451和AZD2858的摩尔比为1:2:2。...

【专利技术属性】
技术研发人员：茵梓，张艳杰，陈晓，雷庭筠，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33