一种提高人脐带间充质干细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的方法技术

本发明专利技术提供一种提高人脐带间充质干细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的方法，包括在添加了细胞因子bFGF和FGF8的neurobasal medium培养基中培养人脐带间充质干细胞的步骤。本发明专利技术能够明显增加间充质干细胞的胶质细胞源性神经营养因子分泌量，安全且易产业化。通过细胞因子诱导的方法，而非基因修饰、共培养和条件培养基培养的方法提高其分泌胶质细胞源性神经营养因子的能力，避免了其它方法所带来的风险和不确定性，更适用于产业化和临床应用。与现有文献中所报道的刺激或诱导的技术相比，使用本方法培养间充质干细胞6天后，胶质细胞源性神经营养因子的分泌量较之前培养方法有明显的增多。

【技术实现步骤摘要】
一种提高人脐带间充质干细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的方法
本专利技术提供间充质干细胞的培养方法，尤其是一种提高人脐带间充质干细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的方法。
技术介绍
胶质细胞源性神经营养因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor，GDNF)是1993年Lin等从大鼠B49胶质细胞系中分离、纯化获得的一种神经营养因子，属于TGF-β超家族。胚胎发育期时它存在于整个中枢神经系统，在成熟的脑组织内主要广泛分布于皮质、海马、纹状体、黑质、丘脑、小脑、胼胝体等部位。胶质细胞源性神经营养因子是一种多效能的神经营养因子，不仅对运动神经元而且对感觉神经元，尤其是对其它神经营养因子相对不敏感的神经元有很强大的神经营养作用，还能够特异性保护多巴胺能神经元，对抗缺血性损害以及促进内源性神经干细胞的增殖和分化。胶质细胞源性神经营养因子在治疗帕金森病、神经损伤以及运动神经元病等神经系统疾病中发挥的有效作用已被大量的体内外试验所证实。近年来研究还发现提高抑郁症患者体内的胶质细胞源性神经营养因子水平可改善患者症本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高人脐带间充质干细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的方法，其特征在于，包括：/n在添加了细胞因子bFGF和FGF8的neurobasal medium培养基中培养人脐带间充质干细胞的步骤。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高人脐带间充质干细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的方法，其特征在于，包括：
在添加了细胞因子bFGF和FGF8的neurobasalmedium培养基中培养人脐带间充质干细胞的步骤。


2.如权利要求1所述的提高人脐带间充质干细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的方法，其特征在于：
其中，细胞因子bFGF用量为20～100ng/mL、细胞因子FGF8用量为50～150ng/mL。


3.如权利要求1所述的提高人脐带间充质干细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的方法，其特征在于：
其中，细胞因子bFGF用量为50ng/mL、细胞因子FGF8用量为100ng/mL。


4.如权利要求1所述的提高人脐带间充质干细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的方法，其特征在于：
包括以下步骤：
取P3～P5代人脐带间充质干细胞，当细胞贴壁生长至80％-90％融合时，吸弃培养上清，取10～15mL0.01M磷酸缓冲液PBS加入培养瓶内洗涤后吸弃洗液，共计两次；
2)加入0.125％胰蛋白酶和0.01％乙二胺四乙酸EDTA消化液，消化至细胞呈圆形漂起时终止；
3)加入20mL0.01M磷酸缓冲液PBS反复吹打冲洗，在室温下1000转/分离心5分钟；弃去上清液后，加入10mLDMEM/F-12培养基重悬细胞，在T75培养瓶中按照1×104/cm2～2×104/cm2接种人脐带间充质干细...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢姜，王斌，董方，
申请(专利权)人：千石生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31