一种人羊膜间充质干细胞来源的细胞外囊泡及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种人羊膜间充质干细胞来源的细胞外囊泡，制备方法为：分离培养获得人羊膜间充质干细胞后，培养并进行传代扩增，培养第3‑5代人羊膜间充质干细胞，密度达到70％‑80％时弃去培养基，用PBS洗涤后换用含5％无细胞外囊泡的胎牛血清的α‑MEM(不含酚红)培养液，继续培养48h后收集细胞培养上清，最后通过梯度及高速离心制备得到细胞外囊泡。该细胞外囊泡可通过携带的miRNAs21‑5p/128‑3p/221‑3p，直接靶向结合肥大的心肌细胞内的PIK3R1 mRNA的3’‑UTR区，抑制PI3K/Akt通路，因此可用于制备防治病理性心肌细胞肥大药物。

【技术实现步骤摘要】
一种人羊膜间充质干细胞来源的细胞外囊泡及其应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)来源的细胞外囊泡及其应用。
技术介绍
病理性心肌细胞肥大(pathologicalcardiomyocyteshypertrophy,PCH)主要由衰老及神经体液失调控(如血管紧张素II升高)所引起，是多种心血管疾病(如高血压、心肌梗塞、缺血性心脏病等)的共同过程，被认为是引起心力衰竭和死亡的重要独立危险因素，防治PCH对治疗多种心血管病症有着重要的意义。传统的药物和干预措施仅可部分改善临床症状，探索新的临床治疗方法和策略从而抑制甚至逆转病理性心肌细胞肥大逐渐成为心血管领域研究的重要方向。人羊膜间充质干细胞(humanamnioticmesenchymalstemcells,hAMSCs)由产后被“废弃”的羊膜组织中获取，具有取材方便、来源广泛且无伦理学争议、低免疫原性、有较强的多分化潜能等优势，是治疗心血管疾病理想的一种间充质干细胞。研究发现：间充质干细胞(MSCs)的移植治疗作用中的80％是通过其旁分泌作用实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人羊膜间充质干细胞来源的细胞外囊泡，其特征在于，直径为40-300nm，所述细胞外囊泡的制备方法包括如下步骤：/n(1)分离培养获得人羊膜间充质干细胞后，培养并进行传代扩增，用含15％胎牛血清的α-MEM完全培养基培养第3-5代人羊膜间充质干细胞，密度达到70％-80％时，弃去培养基，使用PBS洗涤细胞3-5次，换用含5％无细胞外囊泡的胎牛血清的α-MEM(不含酚红)培养液，继续培养48h后，收集细胞培养上清；/n(2)取10ml细胞培养上清，梯度离心后取上清，通过0.22μm孔径滤器过滤去除细胞碎片，以100000g的转速4℃离心100-150min，得到的沉淀即为细胞外囊泡；/n步...

【技术特征摘要】
1.一种人羊膜间充质干细胞来源的细胞外囊泡，其特征在于，直径为40-300nm，所述细胞外囊泡的制备方法包括如下步骤：
(1)分离培养获得人羊膜间充质干细胞后，培养并进行传代扩增，用含15％胎牛血清的α-MEM完全培养基培养第3-5代人羊膜间充质干细胞，密度达到70％-80％时，弃去培养基，使用PBS洗涤细胞3-5次，换用含5％无细胞外囊泡的胎牛血清的α-MEM(不含酚红)培养液，继续培养48h后，收集细胞培养上清；
(2)取10ml细胞培养上清，梯度离心后取上清，通过0.22μm孔径滤器过滤去除细胞碎片，以100000g的转速4℃离心100-150min，得到的沉淀即为细胞外囊泡；
步骤(1)中，所述无细胞外囊泡的胎牛血清的制备方法：将Gibco胎牛血清以100000-120000g的转速4℃离心12h后，分为3层，轻轻吸取最上层透明层，即为无细胞外囊泡的胎牛血清。


2.如权利要求1所述的人羊膜间充质干细胞来源的细胞外囊泡，其特征在于，步骤(1)中，所述人羊膜间充质干细胞的分离培养方法包括如下步骤：
1)使用含双倍青链霉素的PBS缓冲液反复冲洗羊膜组织，然后将羊膜组织剪碎，按羊膜组织:消化液＝1:(1-2)的体积比加入消化液，37℃孵育7-10min，得到消化后的羊膜组织；所述消化液为含有2.4U/ml蛋白酶Dispase的1x磷酸盐缓冲液；
2)将消化后的羊膜组织加入到含有10％胎牛血清的α-MEM完全培养基中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳建亮，谢春凤，朱剑云，苗登顺，王嵘，于珍珍，孙海建，陈海云，周佳雯，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32