一种TaqMan探针法的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种TaqMan探针法的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒及其应用，所述的试剂盒包含：CHO DNA Control，DNA Dilution Buffer，2x MaxDetect qPCR Mix，10x CHO Detection Mix；本发明专利技术还涉及上述试剂盒的用途和使用方法。试剂盒中包含制备标准曲线的DNA参考品CHO DNA Control，已溯源至国家标准品，利用Taqman探针定量PCR方法，能快速、特异地检测fg水平的CHO宿主细胞的DNA残留。本试剂盒适用于生物制药的中间产物到最终成品的不同样本类型，检测结果准确可靠，精密度高，可检测浓度范围为0.3ng/μL‑3fg/μL。

【技术实现步骤摘要】
一种TaqMan探针法的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒及其应用
本专利技术涉及分子生物学
，具体地说，是一种TaqMan探针法的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒及其应用。
技术介绍
TaqMan荧光探针是一种寡核苷酸探针，其5’端携带荧光基团，如FAM、TET、VIC、HEX等，3’端携带淬灭基团，如TAMRA、BHQ等。PCR扩增时在加入引物的同时加入特异性的荧光探针。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告基团和淬灭基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。TaqMan探针法的开发通过引入基于TaqDNA聚合酶5’-3’外切酶活性的荧光标记探针，实时定量PCR系统得到了显著提升。这些荧光探针的使用，使得实时定量的方法得到了发展，实现了仅对特定扩增产物的检测，避免了普通荧光定量PCR染料会结合引物二聚体或非特异性扩增产物的假阳性。此外，荧光标本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测CHO宿主细胞DNA残留的引物对，其特征在于，所述引物对为SEQ IDNO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测CHO宿主细胞DNA残留的引物对，其特征在于，所述引物对为SEQIDNO:1所示的正向引物和SEQIDNO:2所示的反向引物。


2.一种用于检测CHO宿主细胞DNA残留的反应体系，其特征在于，所述的反应体系为实时荧光定量PCR反应体系，包含权利要求1所述的引物对和SEQIDNO:3所示的探针。


3.权利要求2所述的反应体系在制备CHO宿主细胞DNA残留检测的试剂盒中的应用。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的CHO宿主细胞DNA残留检测是适用于但不限于CHO细胞表达或生产的治疗蛋白质药物、重组疫苗或单克隆抗体。


5.一种用于检测CHO宿主细胞DNA残留的方法，其特征在于，所述的方法为：使用权利要求2所述的反应体系对待测样本提取DNA后进行实时荧光定量PCR，根据所获得的标准曲线，计算得到待检样本中CHO细胞DNA的量。


6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的待测样本可为但不限于CHO细胞表达或生产的治疗蛋白质药物、重组疫苗或单克隆抗体。


7.一种TaqMan探针法的CHO宿主DNA残留检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含CHODNAControl，DNADilutionBuffer，2xMaxDetectqPCRMix，10xCHODetectionMix；所述的DNADil...

【专利技术属性】
技术研发人员：习杨，陈旭，陈刚，Y·建国，
申请(专利权)人：依科赛生物科技太仓有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32